超声波提取马鞭草总黄酮研究论文

【摘要】目的为充分利用马鞭草植物资源，避免资源的浪费，探讨马鞭草总黄酮的提 取及鉴别方法。方法采用超声波乙醇浸提法从马鞭草中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮 类物质进行验证，并用分光光度法测定含量。结果测得样品中总黄酮的含量 C=0.2028mg/ml，回收率为 101.4%，其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过 程，无任何污染，是提取马鞭草黄酮类物质的有效途径。 【关键词】超声波提取马鞭草总黄酮鉴别 TheTotalFlavanoneofHerbaVerbenaeExtractionandtheIdentificationbyUltra sonicWave Abstract： ObjectiveTomakeuseoftheresourcesofherbaverbenae,avoidwastingandapproac htheextractionoftotalflavanoneofherbaverbenae.MethodsTheflavonoidswereex tractedbyethanolasthesolventfromHerbaVerbenaewithultrasonicwaveandetha nolextraction.UsingspectrophotometrytoextractandchecktheflavanoneofHerba Verbenae.ResultsThedensityofthetotalflavanoneofherbaverbenaewasC=0.202 8mg/ mlandtherateofrecoverywas101.4%.Ttheoutcomeandthepurityoftheflavanone wereallveryhigh.ConclusionThismethodisapurelyphysicalprocessandhasnotany pollution.ItisanidealwaytoextracttheflavanoneofHerbaVerbenae. Keywords：Ultrasonicwavetreatment；Herbaverbenae；Totalflavanone； Identification 马鞭草 Herbaverbenae 始载于《名医别录》，为马鞭草科植物马鞭草 VerbenaoficinalisL．的全草，广泛分布于我国中南、西南及山西、甘肃、新疆、江苏和的全草，广泛分布于我国中南、西南及山西、甘肃、新疆、江苏和 浙江等地［1］。马鞭草性苦、辛，微寒，具有清热解毒、活血通经、利水消肿、截疟的 功效，用于感冒发热、黄疸、痢疾、痛经、水肿、疟疾、跌打损伤等［1］。其主治癥瘕 积聚、经闭痛经、疟疾、喉痹、痈肿、水肿、热淋等症，可用于治疗疟疾、白喉、传染性 肝炎、流行性感冒、丝虫病、咳嗽等［2］。马鞭草亦可利尿，止血，促进泌尿系统结石 的排出，减少黏膜出血，缓解疼痛，配合其它常用利水通淋化石的中药，临床常获良效 ［3］。除此之外，其外用可治疗痔疮、关节痛、跌打损伤、水疝等［4，5］。马鞭草含 有鞭草苷、5二氢马鞭草苷、桃叶珊瑚苷、熊果酸、3α，24二羟基齐墩果酸、十六酸、 β谷甾醇、羽扇豆醇、蒿黄素、β胡萝卜素等化学成分［2］。由于其在临床应用中有明 显的疗效，近年又发现有新的药理活性，现代研究又发现马鞭草醇提取物具有抗生育、抗 癌作用［1］。因此马鞭草中的化学成分及药效物质引起了新的关注。马鞭草由于临床应 用无毒副作用，前景具有潜在优势，对其研究受到重视。 近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的 毒质等研究已有报道［6，7］，表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。很 多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等， 可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并 且还可避免高温对提取成分的影响［7］。但超声技术应用于提取马鞭草中黄酮类物质的 研究尚未见报道，本文报道用超声波提取马鞭草总黄酮及鉴别。 1 仪器与试剂 1.1 仪器 KQ5200DB 型数控超声波清洗器（超声工作频率 40kHz、昆山市超声仪器 有限公司）；UV755B 紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZFI 型三用紫外分 析仪(上海顾村光电仪器厂)；SHBIII 循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。 1.2 试剂 95%乙醇；亚硝酸钠 AR；硝酸铝 AR；氢氧化钠 AR；三氯化铝 AR；盐酸 AR；氨水 AR；乙酸镁 AR；镁粉 AR；正丁醇 AR；冰醋酸 AR；醋酸乙酯 AR；芦丁标准 品（中国药品生物制品检定所）；新鲜马鞭草购自广西百色市人民菜市。 2 方法与结果 2.1 总黄酮成分提取取新鲜马鞭草，烘干，粉碎。称取马鞭草粉末约 6g，加 80ml95%乙醇，超声波提取 2.5h，抽滤。滤渣再加 80ml95%乙醇，超声波提取 2.5h， 抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩 25ml 左右为止，放置 250ml 容量瓶中， 用 60%乙醇稀释至刻度，得样品液。 2.2 测定方法依据以芦丁为对照品测定马鞭草中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同 时控制适宜 pH 值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收 峰。 2.3 定量实验-总黄酮的含量测定 2.3.1 波长的选择 取样品液适量，在 0.30ml5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以 试剂为空白参比液在 420～700nm 波长范围测定络合物的吸光度，络合物于 510nm 波 长处有最大吸收，故测定时选用此波长。 2.3.2 标准曲线的绘制 分别精密吸取芦丁对照液（0.10mg/ ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml 于 10.00ml 容量瓶中，分别加 入 5%亚硝酸钠溶液 0.30ml，摇匀，静置 6min；再加 10%硝酸铝溶液 0.30ml，摇匀， 静置 6min；再加 4%氢氧化钠溶液 4.00ml，用 60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置 12min，以试剂作空白参比液，于 510nm 处测吸光度。结果见表 1。表 1 紫外可见分光 光度计测定芦丁对照液吸光度（略） 根据上表得回归方程：A=-0.03110+13.52C，r=0.9999。 2.3.3 提取物含量的测定精密吸取样品液 0.50ml，置 10ml 容量瓶，按标准曲线的制 备方法测定吸光度 A=0.106，根据回归方程：A=-0.03110+13.52C，计算样品中总黄 酮的含量 C=0.2028mg/ml。 2.3.4 回收实验精密量取样品液 2.00ml，加入标准芦丁对照品 2.00ml（0.10mg/ ml），同前样品测定方法操作测定吸光度，求出回收率为 101.4%。 2.4 定性实验-总黄酮的鉴别 2.4.1 颜色反应 紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈 灰褐色并有荧光斑点。 浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏 30s，立即在紫外光下 观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。 三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加 1％三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见 光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。 乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加 1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈 黄色斑点。 盐酸-镁粉反应：取乙醇提取液 1ml 于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴（一次加 入），在泡沫处呈紫红色。 2.4.2 纸层析取样品溶液 10μll 点在滤纸上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5（体积比）为展 开剂，上行展开 5h，取出晾干。喷 1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑 点。 3 讨论 3.1 实验结果表明，本实验方法工艺简单，回收率为 101.4%，提取效率高于传统方 法，利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可 以强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的，此方法采用全物理过程，无任何污染， 是一条理想的提取黄酮类物质的途径，具有广阔的应用前景。 3.2 黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分， 具有很高的药用价值。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异 黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等［8］。天然来源的生物黄 酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而体现出如下功 能：消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰 老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。 黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、消心脑血管疾病、抗炎镇痛、调节免疫力、降血糖、 治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用［9～14］。近年来，世界 上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其 广谱的药理作用引人瞩目。本文实验结果表明，马鞭草中含有较为丰富的黄酮。因此，马 鞭草具有广泛开发和利用价值，值得综合利用，加强资源开发。 【摘要】目的为充分利用芹菜食物资源，避免资源的浪费，探讨芹菜总黄酮的提取及 鉴别方法。方法采用超声波乙醇浸提法从芹菜中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质 进行验证，并用分光光度法测定含量。结果测得样品中总黄酮的含量 C=0.2126mg/ml， 回收率为 100.3%，其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过程，无任何污染，是 提取芹菜黄酮类物质的有效途径。 【关键词】超声波提取芹菜总黄酮鉴别 TheTotalFlavanoneofCeleryExtractionandtheIdentificationbyUltrasonicWav e Abstract： ObjectiveTomakeuseoftheresourcesofcelery，avoidwastingandapproachtheext ractionoftotalflavanoneofcelery.MethodsTheflavonoidswereextractedbyethano lasthesolventfromcelerywithultrasonicwaveandethanolextraction.Usingspectro photometrytoextractandchecktheflavanoneofcelery.ResultsThedensityofthetot alflavanoneofcelerywasC=0.2126mg/ mlandtherateofrecoverywas100.3%.Theoutcomeandthepurityoftheflavanonew ereallveryhigh.ConclusionThismethodisapurelyphysicalprocessandhasnotanyp ollution.Itisanidealwaytoextracttheflavanoneofcelery. Keywords：Ultrasonicwavetreatment;Celery;Totalflavanone;Identification 芹菜 ApiumgraveolensL．的全草，广泛分布于我国中南、西南及山西、甘肃、新疆、江苏和属伞形花科一年生或二年生草本植物，异名药芹、旱芹。 芹菜味辛、甘，性凉，营养丰富。已有研究证实，芹菜含有丰富的黄酮类化合物、多不饱 和脂肪酸、矿物元素、丁基苯酞类、萜类、香豆素衍生物、叶绿素、氨基酸与维生素、膳 食纤维等［1］，其中，黄酮类化合物主要成分为水蓼素及 7-甲基水蓼素,医学证明，这 2 种黄酮类化合物是治疗高血压的有效成分［2］。在药理上，芹菜还具有降压、安神、降 血糖、血脂、软化血管、增强免疫力、增进食欲和健胃等药理作用［2］。还可作为神经 衰弱、小便热涩不利、月经不调等症的食疗。芹菜中含有大量膳食纤维素，经常食用有促 进肠蠕动、防治便秘以及预防大肠癌等［3］。 有文献报道芹菜中总黄酮的提取方法采用乙醇提取［2～4］，但是，这种方法的提取 效率仍然较低。近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动 物组织浆的毒质等研究已有报道［5，6］，表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分 的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅 拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提 取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响［6］。但超声技术应用于提取芹菜中黄酮 类物质的研究尚未见报道，本文报道用超声波提取芹菜总黄酮及鉴别。 1 仪器与试剂 1.1 仪器 KQ5200DB 型数控超声波清洗器（超声工作频率 40kHz、昆山市超声仪器有限公 司）；UV755B 紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZF-I 型三用紫外分析仪(上 海顾村光电仪器厂)；SHBIII 循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。 1.2 试剂 95%乙醇 AR；亚硝酸钠 AR；硝酸铝 AR；氢氧化钠 AR；三氯化铝 AR；盐酸 AR； 氨水 AR；冰醋酸 AR；醋酸乙酯 AR；芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；新鲜芹 菜买自百色市农贸市场。 2 方法与结果 2.1 总黄酮成分提取 取新鲜芹菜，烘干，粉碎。称取芹菜粉末约 6g，加 80ml95%乙醇，超声波提取 2.5h，抽滤。滤渣再加 80ml95%乙醇，超声波提取 2.5h，抽滤，合并两次滤液，减压 回收乙醇至滤液仅剩 5～7ml 为止，放置 100ml 容量瓶中，用 60%乙醇稀释至刻度，得 样品液。 2.2 测定方法依据 以芦丁为对照品测定芹菜中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜 pH 值， 使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。 2.3 定量实验-总黄酮的含量测定 2.3.1 波长的选择取样品液适量，在 0.30ml5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经 硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在 420～700nm 波长范围测定络合物的吸光度，络 合物于 510nm 波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。 2.3.2 标准曲线的绘制分别精密吸取芦丁对照液（0.13mg/ ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml 于 10.00ml 容量瓶中，分别加 入 5%亚硝酸钠溶液 0.30ml，摇匀，静置 6min；再加 10%硝酸铝溶液 0.30ml，摇匀， 静置 6min；再加 4%氢氧化钠溶液 4.00ml，用 60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置 12min，以试剂作空白参比液，于 510nm 处测定吸光度，结果见表 1。表 1 紫外可见分 光光度计测定吸光度（略） 根据上表得回归方程：A=3.619×103+12.34C，r=0.9999。 2.3.3 提取物含量的测定精密吸取样品液 0.50ml，置 10.00ml 容量瓶，按标准曲线 的制备方法测定其吸光度 A=0.137，根据回归方程：A=3.619×103+12.34C，计算样 品中总黄酮的含量 C=0.2162mg/ml。 2.3.4 回收率实验 精密量取样品液 1.00ml，加入标准芦丁对照品 1.00ml（0.13mg/ml），同前样品 测定方法操作测定吸光度，求出回收率为 100.3%。 2.4 定性实验-总黄酮的鉴别 2.4.1 颜色反应紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色， 在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。 浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏 30s，立即在紫外光下 观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。 三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加１％三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见 光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。 乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加 1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈 黄色斑点。 盐酸-镁粉反应：取乙醇提取液 1ml 于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴（1 次加入）， 在泡沫处呈紫红色。 2.4.2 纸层析取样品溶液 10μll 点在滤纸上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5（体积比）为展 开剂，上行展开 5h，取出晾干。喷 1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑 点。 3 讨论 3.1 实验结果表明，本实验方法工艺简单，回收率为 100.3%，利用本文所提供的超 声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法，达到