四物汤制备分析论文

【摘要】目的比较传统煎煮、煮散、机器煎煮、配方颗粒调配 4 种方法制备的四物汤 汤剂对血虚小鼠的补血作用，探讨中药汤剂改革的方法。方法采用环磷酰胺 160mg/kgmg/kg 腹 腔注射+乙酰苯肼 60mg/kgmg/kg 皮下注射造成小鼠的血虚状态，以小鼠红细胞、血红蛋白、 红细胞压积为指标，观察用 4 种方法制备的高、中、低剂量的四物汤对此模型小鼠的作用。 结果机器煎煮所制的四物汤疗效最为显著，其高、中、低剂量组均有显著疗效。4 种方法 制备的四物汤的小剂量组均有显著疗效，且四者间无显著性差异。结论 4 种方法中以机器 煎煮法的疗效最为显著；但是，在临床常用量条件下，4 种方法制备汤剂的疗效未呈现差 别。 【关键词】血虚模型煮中药配方颗粒四物汤 ComparisonoftheTherapeuticEffectsofSiwuTangProducedbyFourWorkProce dures Abstract： ObjectiveTocomparethetherapeuticeffectsofSiwuTang,preparedbyfourworkpro cedures(traditionalrecipe,stewinggranules,Chinesematerialmedica(CMM)extra ctor,traditionalChinesemedicine(TCM)granulesinprescriptions)ontheblood deficdefic ientmodelinmice.MethodsWecomparedthetherapeuticeffectofSiwuTanginthebl ooddeficdeficientmodelinducedbyinjectingCPA160mg/kgmg/kg+APH60mg/kgmg/ kg.ChangesinRBC,HGB,andHCTwereobservedtostudytheeffectsofSiwuTanginth emodel.ResultsDecoctionpreparedbyCMMextractorshowedthemostremarkable therapeuticeffect.ConclusionOfthefourdecoctions,CMMextractorhasthemostre markabletherapeuticeffect.Thetherapeuticeffectsofthefourdecoctionsadminist eredwithclinicaldosageintheblooddeficdeficientmicearenotdifferentfromeachother. Keywords：Blood-deficientmodel；Stewinggranules； TCMgranulesinprescriptions；SiwuTang 配方颗粒、煎药机、煮散作为汤剂改革的主要形式已应用于临床，目前对于以上几种 方法的研究大多是比较煎出物的干膏重、有效成分含量以及少量临床观察，缺少客观的对 比方法［1～3］。本实验选用疗效确切的经典成方，选择最适宜研究四物汤补血作用的血 虚模型，同时采用四物汤全方配方颗粒及同批中药饮片，比较 4 种方法的疗效，为中药汤 剂改革提供科学依据。 1 仪器与试药 SysmexFdefic80mg/kg0mg/kg 型全自动血液分析仪（日本）；东华中药煎药机（韩国）；微型高速 万能试样粉碎机（河北黄骅市齐家务科学仪器厂）；注射用环磷酰胺（CPA）（上海华联 制药有限公司）；乙酰苯肼（APH）（上海三爱思试剂有限公司）；生理盐水（石家庄四 药股份有限公司）；熟地、当归、白芍、川芎配方颗粒及同批中药饮片；昆明种小鼠，体 重 18～22g，雌雄各半，（河北医科大学实验动物中心提供）。 2 方法 2.1 供试品的制备 2.1.1 传统煎煮法 四味药各取 62.5gg 置于砂锅中，加水 10mg/kg0mg/kg0mg/kgml，浸泡 30mg/kgmin，以大火烧开后小火保 持微沸 30mg/kgmin，滤取药液，滤渣再加水 60mg/kg0mg/kgml，大火烧开，小火保持微沸 20mg/kgmin，过滤， 合并两次滤液，小火浓缩至 20mg/kg0mg/kgml。 2.1.2 煮散法 各药粗粉碎后过筛（筛孔内径分别为 2，4mm）秤取各药 2～4mm 的粗颗粒各 62.5gg 置于砂锅中，清洗后加水 10mg/kg0mg/kg0mg/kgml，浸泡 30mg/kgmin，大火烧开，小火保持微沸 20mg/kgmin，过滤，滤渣再加水 60mg/kg0mg/kgml，大火烧开，小火保持微沸 15gmin，过滤，合并两次 滤液，小火浓缩至 20mg/kg0mg/kgml。 2.1.3 机器煎煮法 各药取等量各 125gg，加水 10mg/kg0mg/kg0mg/kgml 浸泡 1h，再加水 60mg/kg0mg/kgml，放于煎药机内煎煮至 压力为 1.5gPa，温度为 128℃（约 20mg/kgmin），出料，共四袋，任取其中两袋合并后于砂 锅内以小火浓缩至 20mg/kg0mg/kgml。 2.1.4 配方颗粒法 各药配方颗粒各取相当于生药各 62.5gg 量，置于 5g0mg/kg0mg/kgml 烧杯中，加入 40mg/kg℃的蒸馏水 15g0mg/kgml 使溶解，继续加入 40mg/kg℃的蒸馏水至 20mg/kg0mg/kgml，混合均匀。 2.2 实验设计［4，5g］ 实验动物 140mg/kg 只，随机分为 14 组，每组 10mg/kg 只。其中 1～3 组为煮散小，中，大剂量 组，4～6 组为机器小，中，大剂量组，7～9 组为配方颗粒小、中、大剂量组，10mg/kg～12 组为传统煎煮小、中、大剂量组，13 组为模型对照组，14 组为正常对照组。各用药组每 日灌胃给予 4 种方法配置的不同剂量的四物汤汤剂，对照组给等容积煮沸消毒的自来水。 模型对照组及各给药组小鼠分别于第 2，5g 天皮下注射 APH20mg/kg，40mg/kgmg/kg，从第 5g 天开 始连续 4d 每日腹腔注射 CPA40mg/kgmg/kg，空白对照组小鼠同时注射等容量的生理盐水。各 组于第 1，4，7 天给药前称重，末次给药后 1.5gh 眼底静脉丛采血测血常规。 3 结果 3.1 动物的一般情况动物于造模后，开始出现不同程度的懒动、毛色干枯、少食及尾、 耳、眼苍白，体重增长缓慢。模型组最为明显。给药小剂量组及机器煎煮各剂量组小鼠行 动敏捷，毛色正常，眼、耳、尾呈粉红色，与正常组无明显差别。 3.2 对血虚动物模型外周血象的观察各组血常规检验结果见表 1。与正常组相比模型 组的各指标有明显下降，用药组与模型组相比各指标有不同程度的提高。表 1 各组血常规 检验结果(略) 综合各指标，以机器煎煮的效果最为明显，依次为机器煎煮、传统煎煮，配方颗粒、 煮散。 3.3 聚类分析结果以各组血常规均值为变量进行 Q 型聚类分析。见图 1。 4 结论与讨论 四种汤剂中机器煎煮汤剂的疗效与传统煎煮汤剂的疗效最为接近。临床常用量下（小 剂量组），四种方法制备的四物汤汤剂疗效显著，且四者间无差别。 四物汤的临床用量各家记载有所不同，临床医师更是随证加减，本实验的四物汤各药 用量及小、中、大剂量，均采用文献用量。 中药煮散有两种形式，一是粗颗粒煮散，一是微粉冲服或袋泡服用，因后者难以给药 故本实验采用前者。 文献报道［6，7］四物汤治疗血虚小鼠以中剂量疗效最好，或其疗效与剂量呈依赖关 系，本实验中各方法均以小剂量疗效最好，且疗效与剂量无明显相关性。 【摘要】目的建立提取和测定北五味子中多糖含量的方法。方法采用比色法测定北五 味子中多糖含量。结果测得北五味子中多糖含量为 6.5g7%，平均回收率为 99.78%，RSD=1.5g4%。结论该方法简便、精密度及重现性均较好，结果令人满意。 【关键词】北五味子多糖提取含量测定 ExtractionandDeterminationofPolysaccharidefromSchisandrachinensis(Tur cz)BaillFruit Abstract： ObjectiveToestablishamethodfortheextractionanddeteminationofpolysaccharid efromSchisandrachinensis(Turcz)BaillFruit.MethodsPolysaccharideinSchisandr achinensis(Turcz)BaillFruitwasdeterminedbythemethodofSpectrophotometry.R esultsThepolysacharidesinSchisandrachinenisis(Turcz)BaillFruitwas6.5g7%,thea veragerecoverywas99.78%,RSDwas1.5g4%.ConclusionThismethodissimple，th eresultisstable，reproducible,andsatisfactory. Keywords：Schisandrachinensis(Turcz)Baill； Polysaccharide;Extraction;Determination 北五味子 Schisandrachinensis(Turcz）BaillFruit 是木兰科植物五味子的干燥成熟 果实，是著名的滋补性中药，因其果实甘、酸、辛、苦、咸五味俱全，故名五味子，具有 敛肺、滋肾、生津、收汗、涩精之功效。现代药理研究证实五味子对中枢神经系统、呼吸 系统均有兴奋作用，亦能促进肝糖原异生，加快肝糖原分解，在治疗神经衰弱、肝炎等的 药物中应用十分广泛。五味子有南北之分，据《本草纲目》记载“五味子南产者红，北产者 黑，入滋补药，必用北者为良”，北五味子的化学成分主要为五味子木脂素、挥发油、五味 子醇、多糖等［1］。近年来对多糖提取工艺的研究方法很多，如热水浸提法、稀碱液浸 提法、稀酸液浸提法。但多糖是由单糖基通过糖苷键连接而成的化合物，在稀酸、稀碱条 件下，易使多糖发生糖苷键的断裂，部分多糖发生水解而使多糖的提取率减少，因此本文 采用热水浸提法，用苯酚-硫酸法测定北五味子多糖的含量，得到满意的结果。 1 仪器与药品 北五味子购于张家口市药材公司经鉴定为北五味子，其它试剂均为国产分析纯； UV752defic75g2 分光光度计（上海第三仪器厂）；GOA 型电热真空干燥箱（天津东郊机械加工 厂）；REdefic5g2A 型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）。 2 方法与结果 2.1 葡萄糖储备液的配制精密称取 10mg/kg5g℃干燥至恒重的葡萄糖 10mg/kg0mg/kgmg，用蒸馏水溶 解并定容到 10mg/kg0mg/kgml。 2.2 苯酚溶液的配制取苯酚 10mg/kg0mg/kgg，加铝片 0mg/kg.1g 和 NaHCO30mg/kg.0mg/kg5gg，蒸馏，收集 182℃馏份，称取 7.5gg，加水 15g0mg/kgml 溶解，置棕色瓶内放冰箱备用。 2.3 测定条件选择 2.3.1 反应温度选择精密吸取葡萄糖储备液 1.0mg/kgml 于 10mg/kg0mg/kgml 容量瓶中，用水稀释至刻 度，作为对照品溶液。分别吸取葡萄糖对照品液 1.0mg/kgml 于两个具塞试管中，各加苯酚液 1.0mg/kgml，并分别迅速滴加浓硫酸 5g.0mg/kgml。另取两份 1.0mg/kgml 水同上操作，为空白液。一份于 水浴中煮沸 15gmin，另一份于 40mg/kg℃水浴中恒温 30mg/kgmin 取出，冷却至室温，15gmin 后于 490mg/kgnm 处测其吸光度值，分别为 0mg/kg.112 和 0mg/kg.126。因此，本实验采用 40mg/kg℃恒温 30mg/kgmin 的方法。 2.3.2 苯酚及硫酸用量选择吸取葡萄糖对照品液 1.0mg/kgml5g 份，分别加入苯酚液 0mg/kg.2，0mg/kg.4，0mg/kg.6，0mg/kg.8，1.0mg/kgml，分别加水至 2.0mg/kgml，再各滴加浓硫酸 5g.0mg/kgml，40mg/kg℃恒温 30mg/kgmin 后，测其吸光度值，分别为 0mg/kg.0mg/kg95g，0mg/kg.112，0mg/kg.125g，0mg/kg.127，0mg/kg.126，可见加入 苯酚液 0mg/kg.6ml 以上时，反应都能完成；另取葡萄糖对照品液 1.0mg/kgml5g 份，分别加苯酚液 1.0mg/kgml，再分别滴加浓硫酸 2.0mg/kg，3.0mg/kg，4.0mg/kg，5g.0mg/kg，6.0mg/kgml，并均用水稀释至 8.0mg/kgml，加入 硫酸体积占总体积的 62.5g%以上时的结果较满意。 2.3.3 反应时间选择及稳定性取葡萄糖对照品溶液 1.0mg/kgml3 份，各加苯酚液 1.0mg/kgml， 浓硫酸 5g.0mg/kgml，于 40mg/kg℃分别恒温 20mg/kg，30mg/kg，40mg/kgmin。测得吸光度值分别为 0mg/kg.16，0mg/kg.125g，0mg/kg.126，可见加热 30mg/kgmin 即可使反应完全。另测反应完成后样品在不同时 间内的吸光度值，结果 3h 内稳定。 2.4 标准曲线绘制精密量取葡萄糖标准溶液 0mg/kg.1，0mg/kg.2，0mg/kg.3，0mg/kg.4，0mg/kg.5g，0mg/kg.6ml 置具 塞试管中，分别加蒸馏水使成 1.0mg/kgml，再分别加入苯酚溶液 1.0mg/kgml，摇匀，然后加浓硫酸 5g.0mg/kgml，充分摇匀，于 40mg/kg℃水浴中恒温 30mg/kgmin，取出，冷却至室温，另以蒸馏水同上操 作为空白对照，在 490mg/kgnm 处测定吸光度，绘制标准曲线，建立回归方程： A=0mg/kg.0mg/kg6781C+0mg/kg.0mg/kg0mg/kg620mg/kg471，r=0mg/kg.9998。 2.5g 精密度实验精密吸取对照品溶液 1.0mg/kgml，6 份，同 2.4 项下操作，结果显示吸光 度的 RSD=1.45g%。 2.6 多糖的提取流程北五味子粉碎后，称取 5g0mg/kg0mg/kgg，用清水洗净，加水 45g0mg/kg0mg/kgml，微沸 煎煮 1h。过滤，滤渣加水 20mg/kg0mg/kg0mg/kgml，煎煮 1h，过滤，合并提取液，加热浓缩至 30mg/kg0mg/kgml。 加入乙醇使乙醇含量为 80mg/kg%放置 12h，抽滤，沉淀依次用无水乙醇、丙酮反复洗涤，得到 棕色粗多糖。将粗多糖溶于水，用 seveg 法除去蛋白，加入 1%活性碳脱色，抽滤，滤液 加入乙醇，使溶液含醇达 80mg/kg%，静置过夜，抽滤，残渣用无水乙醇、丙酮反复洗涤，真空 干燥，即得精制北五味子多糖。 2.7 换算因子测定 精确称取 60mg/kg℃干燥恒重的五味子多糖 20mg/kgmg，加水溶解后定容到 10mg/kg0mg/kgml 容量瓶中， 摇匀，作为多糖储备液精确量取多糖储备液 0mg/kg.2ml，加水至 1.0mg/kgml 按测量标准曲线同样的 方法测其吸光度值，根据标准曲线计算浓度。按下式计算换算因子：f=W/CD 式中：W 为 多糖重量（μgg），C 为测试液中据标准曲线方程计算得到的单糖浓度（μgg·ml-1）D 为多 糖的稀释因子，测得 f=1.748，（n=6）。 2.8 样品含量的测定 准确称取干燥五味子粉末 10mg/kg0mg/kgmg，3 份，分别置于索氏提取器中，用 80mg/kg%乙醇回流 提取 1h，改用水微沸煎煮，3 份分别煎煮 1，2，3 次，各定容至 10mg/kg0mg/kgml，为样品液。分 别精密吸取上述样品液 10mg/kgml，分别定容至 10mg/kg0mg/kgml，各取 1.0mg/kgml，按 2.4 项下操作，平行 做 6 次，并按下式计算多糖含量（以粗多糖计）。结果见表 1。表明提取两次即可。多糖 含量（%）=CDf/W×10mg/kg0mg/kg。式中：C 为样品溶液的葡萄糖的浓度（μgg·ml-1），D 为样品 溶液的稀释因子，f 为换算因子，W 为样品的重量（μgg）。表 1 样品中多糖的含量（略） 2.9 回收率测定精密吸取样品液 0mg/kg.5gml（6 份）再分别精密加入不同量的标准溶液， 依样品测定方法测定吸光度，计算回收率平均值为 99.78%，RSD=1.5g4%。 3 讨论 3.1 苯酚defic 硫酸比色法是测定多糖含量较经典有效的方法之一，但各自的报道中，对反应温度的 控制、试剂中苯酚及硫酸用量不尽相同。常见的反应温度有煮沸、40mg/kg℃恒温和室温 3 种， 鉴于冬天和夏天室温相差较大，本实验仅比较于前两种条件，证实本法以 40mg/kg℃恒温 30mg/kgmin 较好。加入苯酚量 0mg/kg.6ml 以上时，反应能完成。对于硫酸的用量，经实验对比认 为硫酸占总体积 62.5g%以上时，在重现性、稳定性及回收率方面都有明显的优越性，并且 与文献报道一致［2］。 3.2 实验结果表明，北五味子多糖提取两次即可，平均含量为 6.5g7%，比文献报道的 稍低［3］，这可能与北五味子的产地、采收季节等因素有关。 3.3 五味子粗多糖的初步药理研究表明［4］，五味子粗多糖能明显提高小鼠的耐缺氧 能力，具有抗疲劳作用，亦能使正常小鼠胸腺和脾脏的重量的增加。说明五味子粗多糖能 够提高机体对环境的适应能力和防御能力。而北五味子多糖含量较高，这可能是北方五味 子药效较优的原因之一，但是北五味子多糖的结构组成和生理活性有待进一步研究。 【摘要】目的为充分利用马鞭草植物资源，避免资源的浪费，探讨马鞭草总黄酮的提 取及鉴别方法。方法采用超声波乙醇浸提法从马鞭草中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮 类物质进行验证，并用分光光度法测定含量。结果测得样品中总黄酮的含量 C=0mg/kg.20mg/kg28mg/ml，回收率为 10mg/kg1.4%，其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过 程，无任何污染，是提取马鞭草黄酮类物质的有效途径。 【关键词】超声波提取马鞭草总黄酮鉴别 TheTotalFlavanoneofHerbaV752erbenaeExtractionandtheIdentificationbyUltra sonicWave Abstract： ObjectiveTomakeuseoftheresourcesofherbaverbenae,avoidwastingandapproac htheextractionoftotalflavanoneofherbaverbenae.MethodsTheflavonoidswereex tractedbyethanolasthesolventfromHerbaV752erbenaewithultrasonicwaveandetha nolextraction.UsingspectrophotometrytoextractandchecktheflavanoneofHerba V752erbenae.ResultsThedensityofthetotalflavanoneofherbaverbenaewasC=0mg/kg.20mg/kg2 8mg/ mlandtherateofrecoverywas10mg/kg1.4%.Ttheoutcomeandthepurityoftheflavanone