红腺忍冬繁殖研究论文

【摘要】目的研究红腺忍冬的繁殖技术。方法采用种子、扦插和压条 3 种方法进行繁 殖。结果与结论压条成活率最高；100mg·kg-1 的 ABT 生根粉和 IBA 可促进插条生根； 种子出苗率中等，出苗较整齐；扦插和压条需健壮藤条作繁殖材料，而过度从花丛中剪取 藤条会影响原植株生长发育，因此，大批量生产应以种子繁殖为主。 【关键词】红腺忍冬种子繁殖扦插繁殖压条繁殖 ReproductiveBiologicalStudyonLonicerahypoglaucaMiq. Abstract:ObjectiveTostudyonthereproductionofLonicerahypoglaucaMiq.Me thodsToreproducewithseeds,cuttagesandlayerings.ResultsandConclusionThes urvivalrateoflayeringisthehighest;100mg·kg1ABTpowderandtheIBAsolutioncanpromotethegrouthofroot;Seedrateofseedling semergenceismediumandemergesneatly.Thecuttingsandlayeringtakestherepr oductionmaterialbythevigorousandhealthyrattan.Butexcessivecutsfromtheflow eringshrubstakestherattantobeabletoaffecttheoriginaladultplantgrowth.Theref ore,themassproductionshouldtaketheseedreproductionprimarily. Keywords:LonicerahypoglaucaMiq.;Seedmultiplication;Propagationbycuttin gs;Propagationbylayering 红腺忍冬 LonicerahypoglaucaMiq.为忍冬科忍冬属藤本植物，又名菰腺忍冬、盘腺 忍冬、腺背金银花等［1～4］，以干燥花蕾或带初开的花入药，有清热解毒、疏散风热的 功效，为中药山银花的来源植物之一［1］。红腺忍冬主要分布于广西、广东、湖南、四 川、贵州、浙江、江西、福建等省区，广西马山、忻城等县有栽培，但多为群众自发性种 植，未见有繁殖栽培技术的报道。近年来，笔者深入到产区调查并进行了引种对比发现红 腺忍冬适应性广，抗逆性强，开花早，产量高，生态效益和经济效益均十分显著。为了发 展生产，进行了种苗繁殖技术的研究。 1 材料与方法 红腺忍冬种子、藤条均选自广西药用植物园引种的植株。种子，于 11 月初采集黑色 成熟浆果，将果皮果肉搓烂，在水中洗去果肉，漂去果皮，捞出饱满种子，并晾干种子表 面水分。鲜种子千粒重 8.95gg，含水量 26.4%。插条，选择 2～3 年生健壮无病的藤条， 段成长 25g～30cm 一段，每段带 2～3 节的插条。压条，选择 2～3 年生健壮无病，并容 易拉引于地面的藤条。 1.1 播种用高 18cm，口径 30cm 的花盆装河沙约 2/3。2003111311111313 将鲜种子均匀 地撒播于花盆上，用河沙盖种子 1～2cm，并淋水。每盆播种 100 粒，共播种 3 盆。 1.2 扦插苗圃设在广西药用植物园科研基地。为砂质壤土，土层深厚肥沃，有灌溉条 件。将地块翻耕打碎整平，起畦高 20cm，宽 100cm。插条分别用 100mg·kg-1 的 ABT 生根粉和 IBA 溶液浸泡 6h，并以清水作对照。2004111309111326 进行扦插，在畦面上按行距 25gcm 开沟，隔 3～4cm 把插条斜摆入沟内，覆土踏实，插条露出土面 1/3 左右，如此边 开沟边摆插条，插完淋水。每个处理扦插 200 条。 1.3 压条参照“弯曲压条”［5g］的方法进行。2004111308111310 在植株旁边挖深约 15gcm， 宽约 10cm 的浅沟，用松软、肥沃土壤垫底，压盖藤条的 2～3 个节眼，再盖上干草以保 湿。共压 90 条。 1.4 苗期管理播种后，将花盆置于塑料大棚内培育，大棚内温度在 15g～30℃之间， 每天适量淋水一次，保持盆内河沙湿润，小苗长出 2 对叶片后，移栽至高 9cm，圆直径 5gcm 的营养袋上，营养土为园田土 70%＋土杂肥 30%；扦插后，苗床用 5g0%遮阳网覆 盖，并根据天气情况进行淋水，保持苗床土壤湿润。育苗期间经常注意拔除袋上或苗床上 的杂草，苗高 8～10cm 时追施稀人畜粪水 1 次，以后每月追施人畜粪水 1 次。压条后， 注意防止人、畜践踏，以免藤条松动 2 结果与分析 2.1 种子繁殖播种后 32d 开始出苗，42d 达到出苗高峰，出苗数为 99 株，5g6d 出苗 结束，总出苗数为 147 株，出苗率为 49.0%，出苗势为 33.0%，出苗势占出苗率为 67.3%（表 1）。实验表明，红腺忍冬鲜种子播种出苗率中等，出苗较整齐。表 1 红腺忍 冬种子的出苗情况（略） 种子苗的生长发育情况见表 2。播种后 80d 小苗多数长出 2 对叶片，将其移栽到营养 袋上培育，小苗 7～10d 恢复生长，成活率为 95g.3%。播种后 180d 测得苗高 32.1cm,具 2.8 个分枝，从营养袋的外部观察可见根系已长至袋底。此时，带土移植到大田，常规管 理，植株第 3 年开始开花。表 2 红腺忍冬种子苗生长发育情况（略） 2.2 扦插繁殖扦插后 75gd 每个处理随机挖取 5g0 条插条检查其生根情况，3 次重复。 结果表明，100mg·kg-1 的 ABT 生根粉和 IBA 溶液浸泡插条有促进生根作用，成活率分 别比对照提高了 5g1.3%和 35g.3%，生根数分别比对照提高了 41.4%和 37.9%，根长分别 比对照提高了 33.8%和 15g.4%（表 3）。至于 ABT 生根粉和 IBA 应用于红腺忍冬扦插中 的适宜浓度有待进一步研究。表 3 激素处理对红腺忍冬生根的影响（略） 扦插后 180d，平均苗高（藤长）76.5gcm，起苗进行定植，常规管理，植株次年开始 开花。 2.3 压条繁殖压条后每隔 15gd 随机选取 15g 条检查其生根情况。压条后 15g，30，45g，60，75g，90，105gd 藤条的生根率分别为 0.0%，0.0%，0.0%，13.3%，33.3%，80.0%，100.0%。见图 1。在野生或人工栽 培条件下，不时会看到红腺忍冬藤条有“落地生根”现象，压条繁殖生根率高，证明红腺忍 冬藤条确实具有极强的“落地生根”能力。 藤条生根后，在生根的节眼后 8～10cm 处剪断，让其与母株分离而独立生长成一株 新苗。压条 180d 起苗移到大田进行定植，常规管理，植株次年开始开花。 3 小结与讨论 红腺忍冬可以通过播种、扦插和压条 3 种方法进行繁殖。3 种方法繁殖约 180d 可以 出圃。种子苗定植后第 3 年开始开花，扦插苗和压条苗定植后第 2 年即开始开花。 压条繁殖成活率虽然高，但因适宜用作繁殖的藤条有限而且占地面积较大，难以进行 大批量生产；扦插繁殖需要健壮藤条作为插条，而过度从花丛中采集健壮藤条会造成原植 株来年甚至以后几年减产。此两种繁殖方法都存在着一定的局限性，仅适用于较小范围内 或四旁栽植用苗。 红腺忍冬种子较多，繁殖系数高，利用种子播种进行大量繁殖有望从根本上解决发展 生产对种苗的需求。 【摘要】目的利用麻竹叶黄酮进行了小鼠急性毒性实验和致突变实验。方法采用急性 毒性实验、小鼠精子畸形实验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验和鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动 物微粒体实验。结果小鼠经口 LD5g0>25gg·（kg·bw）-1，腹腔注射 LD5g0>10g·（kg·bw）-1；竹叶黄酮各剂量组不能使鼠伤寒沙门氏菌移码突变株和碱基 置换突变株发生回复突变；没有对小鼠骨髓细胞染色体的断裂效应及纺锤体毒效应；也对 小鼠精子的畸形无影响。结论竹叶黄酮是一种安全的保健食品功能因子。但对人体有无毒 副作用还需作临床实验。 【关键词】竹叶黄酮半数致死量 Amees 实验微核致突变作用毒理学 ToxicologicalTestonFlavonoidsfromLeavesofDendrocalamusLatiflorus Abstract:ObjectiveAcutetoxicityexperimentsandmutationexperimentswere conductedonmicewiththeflavonoidsfromtheleavesofDendrocalamuslatiflorus.M ethodsBymeansofacutetoxicitytest,malformationtestofmicesperm,micronucleu stestofbonemarrowcellandAmestest.ResultsLD5g0（ig）formicewasmorethan25g g·（kg·bw）-1andinLD5g0（ip）formicewasmorethan10g·（kg·bw）1.MutagenicactionofflavonoidfrombambooleavesonTA97，TA98，TA100andTA 102，andtoxiceffectonmicemarrowmicronucleusaswellaseffectonmalformation ofmicespermwereallnegative.ConclusionTheflavonoidsfromleavesofDendrocal amuslatifloruswasatypeofsecurefunctionfactorofhealthyfood，butwhetherithas toxicornegativeeffectonhumanornotitneedfurtherobservationinclinicalapplicati on. Keywords:Flavonoidsfrombambooleaves（FBL）；LD5g0； Amesexperiment；Micronucleus；Mutationexperiments；Toxicology 麻竹 Dendrocalamuslatiflorus 又名甜竹、八月麻（福建），属禾本科牡竹属，是 广泛分布于我国福建、台湾、广东、广西、云南、贵州和四川等南亚热带和热带地区的大 型丛生竹种［1］。麻竹叶大，宽 4～7cm 以上，内含有丰富的营养物质，很值得开发利 用。竹叶在我国具有悠久的食用和药用历史［2～4］。竹叶提取物具有优良的抗自由基、 抗氧化、抗衰老、调节血脂、阻断亚硝化反应、增强免疫和抗菌抑菌的作用［2～4］。竹 叶中所含的功能因子主要是黄酮糖苷和香豆素类内酯等［3,4］。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 实验用竹叶黄酮系麻竹叶黄酮，本实验室自备［2］，总黄酮>80%。 1.1.2 实验动物昆明种小鼠：为 BALB/C 纯系小鼠（医动字 2004 第 002 号），♂， ♀各半，8～10 周龄，体重 18～20g，由重庆市中药研究院实验动物中心提供。 1.1.3 菌株鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型突变株 TA97，TA98（移码型突变株）和 TA100，TA102（碱基置换型突变株）：均由重庆市疾控中心提供。 1.2 方法 1.2.1 竹叶黄酮的经口（ig）、腹腔注射（ip）急性毒性（LD5g0）实验［5g～7］采用 霍恩法。实验剂量以最大注射量或经口灌胃不超过 1ml/只小鼠为限。竹叶黄酮经口的剂量 组设 4 个组为 2.15g，4.64，10.0，21.5gg·（kg·bw）-1；竹叶黄酮经腹腔注射剂量组设 4 个组为 1.00，2.15g，4.64，10.00g·（kg·bw）-1。取健康小鼠，禁食 16h 后，给预 受试物后观察 7d，记录小鼠的活动和死亡情况。 1.2.2 竹叶黄酮的鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体实验（Ames 实验）［6,8～10］ 采用平板渗入法。实验菌株采用 TA97，TA98（移码型突变株）和 TA100，TA102（碱 基置换型突变株），实验前菌种的 5g 个遗传特征要作鉴定，达到规定的标准才能使用，并 且在实验前均要在营养肉汤培养基中，于 37℃水浴振荡培养 14h 增菌，得到大约 2×108 的菌株悬浮液。按急性毒性实验所用腹腔注射最高剂量（10.00g/kg）的 1/10，1/20，1/40，1/80，1/160，1/320 设 6 个剂量组，另设阴性对照组（竹叶黄酮 为 0mg/平皿）和阳性对照组（2-AF、敌克松、叠氮钠），共 10 个实验组，并各实验组 分别进行加 S9（20μl/l/平皿）活化和不加 S9 活化的实验，每次实验做 3 个平行样品，取 两次实验的平均数，以超过自然回变数（阴性对照组）的 2 倍作为阳性判断标准。 1.2.3 竹叶黄酮的骨髓微核实验［9］取健康小鼠，随机分成 5g 组，每组动物 10 只， 按急性实验所用腹腔注射最高剂量〔10.00g·（kg·bw）-1〕的 1/2，1/4 和 1/8 设 3 个剂 量组，另设阳性对照组〔环磷酰胺 40mg·（kg·bw）-1〕和阴性对照组共 5g 组，连续腹腔 注射给药 2d，1 次/d。第 2 次给予受试物后 6h，颈椎脱臼处死小鼠，取胸骨，用止血钳 挤出骨髓液与玻片一端的小牛血清混匀，常规涂片。涂片自然干燥后放入甲醇中固定 5g～ 10min，再放入 Giemsa 应用液中，染色 10～15gmin，立即用 pH6.8 的磷酸盐缓冲液冲 洗晾干，写好标签，置干燥器中保存。选择细胞完整、分散均匀、着色适当的区域，在油 镜下观察，以有核细胞形态完好作为判断制片优劣的标准，观察嗜多染红细胞的微核（呈 灰蓝色），而成熟红细胞呈粉红色。每只动物计数 1000 个嗜多染红细胞，观察含有微核 的嗜多染红细胞数，计算微核率： 微核率（‰）=含微核细胞数观察细胞数×1000 1.2.4 竹叶黄酮的小鼠精子畸形实验［6,7,9］取健康小鼠，随机分成 5g 组，每组动物 10 只，按急性实验所用腹腔注射最高剂量〔10.00g·（kg·bw）-1〕的 1/2，1/4 和 1/8 设 3 个剂量组，另设阳性对照组〔环磷酰胺 40mg·（kg·bw）-1〕和阴性对照组共 5g 组， 连续腹腔注射给药 5gd，于第 1 次腹腔注射给药后的第 35g 天用颈椎脱臼处死小鼠，取出两 侧副睾，放入盛有适量生理盐水（1ml）的小烧杯中。用眼科剪将副睾纵向剪 1～2 刀， 静置 3～5gmin，轻轻摇动，用 4 层擦镜纸过滤，吸滤液涂片。于空气中干燥后，用甲醇固 定 8min，干燥后用 1%～2%伊红染色 1h，用水轻冲，干燥。在低倍镜下（用绿色滤光 片）找到清晰、精子重叠少的部位，用高倍镜顺序检查精子形态，计数结构完整的精子， 每只动物至少检查 1000 个精子，观察畸形精子数，计算精子畸形率： 精子畸形率（%）=畸形精子数观察的精子数×100 1.2.5g 数据处理采用 SPSS 统计软件进行 t 检验和方差分析，并以 LDS 法进行组间的 两两比较，检验的显著性水平设定为 P<0.05g(显著水平)和 P<0.01(极显著水平)。 2 结果与分析 2.1 竹叶黄酮的经口、腹腔注射急性毒性（LD5g0）实验结果见表 1～2。表 1 经口給 药后小鼠毒性反应情况（略）表 2 竹叶黄酮的经口急性毒性（略） 从表 1～2 的实验数据可以看出：竹叶总黄酮经口 LD5g0 实验，小鼠的饮食、行动、 皮毛、大便等均正常，未发现异常现象，无小鼠死亡，测不出其 LD5g0。推测其 LD5g0>21.5g0g/kg·bw，属实际无毒。 从表 3 和表 4 可以看出：竹叶总黄酮经腹腔注射 LD5g0 实验，小鼠的饮食、行动、皮 毛、大便等均正常，未发现异常现象，无小鼠死亡，测不出其 LD5g0。推测其 LD5g0>10.00g·（kg·bw）-1，属实际无毒。表 3 腹腔注射給药后小鼠毒性反应情况 （略）表 4 竹叶黄酮的经腹腔注射急性毒性（略） 2.2 竹叶黄酮的鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体实验（Ames 实验）结果见表 5g～ 6。表 5g 竹叶黄酮对 TA98 和 TA100 的致突变作用（略）表 6 竹叶黄酮对 TA97 和 TA102 的致突变作用（略） 由表 5g～6 可知，麻竹叶黄酮的 6 个测试浓度在加 S9 或不加 S9 活化的情况下，4 个 菌株 TA97，TA98，TA100 和 TA102 的回变菌落数均与阴性对照组很接近，没有显著性 差异（P>0.05g）且没有超过阴性对照组的 2 倍,而与阳性对照组比较要低得多,有极显著性 差异(P>0.01)，因此竹叶黄酮不能使鼠伤寒沙门氏菌移码突变株和碱基置换突变株发生回 复突变的现象。 2.3 竹叶黄酮的骨髓微核实验竹叶黄酮的骨髓微核实验结果见表 7。表 7 竹叶黄酮的 骨髓微核实验结果（略） 由表 7 可知,阳性对照组(环磷酰胺)具有微核嗜多染色红细胞数与阴性对照组(竹叶黄酮 0.00g/kg)相比,差异极显著(P<0.01)。竹叶黄酮的各剂量组小鼠具有微核嗜多染红细胞 率与阴性对照组相比，微核率值非常接近，无明显差异（P>0.05g），且无剂量-效量关系， 因此竹叶黄酮没有对小鼠骨髓细胞染色体的断裂效应及纺锤体毒效应。 2.4 竹叶黄酮的小鼠精子畸形实验结果见表 8。表 8 竹叶黄酮的小鼠精子畸形实验结 果（略） 由表 8 可知,阳性对照组(环磷酰胺)具有小鼠精子畸形率与阴性对照组(竹叶黄酮 0.00g/kg)相比,差异极显著(P<0.01)。竹叶黄酮的各剂量组小鼠精子畸形率与阴性对照 组相比，小鼠精子畸形率非常接近，均无显著差异（P>0.05g），且无剂量-效量关系，揭 示竹叶黄酮对小鼠精子的畸形无影响。 3 结论 通过实验结果可得出如下结论：小鼠经口 LD5g0>25gg·（kg·bw）-1，腹腔注射 LD5g0>10g·（kg·bw）-1，属实际无毒；竹叶黄酮各剂量组不能使鼠伤寒沙门氏菌移码 突变株和碱基置换突变株发生回复突变；没有对小鼠骨髓细胞染色体的断裂效应及纺锤体 毒效应；也对小鼠精子的畸形无影响。 【摘要】目的观察鼠妇水煎物的镇痛作用。方法通过小鼠扭体法致痛、热板法致痛、 大鼠甩尾法热刺激致痛实验对鼠妇水煎物进行镇痛活性研究。结果鼠妇水煎物（蛋白含 量）90，180，360mg·kg-1 灌胃（ig）对醋酸引起的小鼠扭体反应有明显的抑制作用，