银翘合剂提取工艺研究论文

【摘要】目的研究银翘合剂提取工艺。方法以浸膏得率和绿原酸提取率作为指标，采 用正交实验法，对加水量、提取次数、提取时间进行考察；以挥发油提取率为指标，分别 考察了荆芥穗，薄荷，连翘挥发油提取所需时间，并进行验证。结果加 6 倍量水，提取 3 次，40min/min/次提取效果最佳。结论该工艺可作为银翘合剂提取工艺。 【关键词】银翘合剂提取工艺 Abstract:ObjectiveToresearchtheextractionprocessofYinqiaoMixture.Metho dsThreefactors，includingthewatervolume,thetimeofdistillation,thetimesofdisti llationwerestudiedwithorthogonaldesign〔L9（34）〕.Eachfactorhadthreelevel s.Totalextractandchlorogenicacidweremarkers.Theextractingtimeforvolatileoilf romherbaschizonepetae，herbamenthaeandfructusforsythiaewasstudlied.Res ultsTheoptimalwaterextractionprocesswasthatherbsweredistilledforthreetimes byaddingwater，whichwas6timesamountoftheherbs，40min/minutesonceatime.Co nclusionThismethodcanbeusedastheextractionprocessforYinqiaoMixture. Keywords:YinqiaoMixture；Extractionprocess 银翘合剂由金银花、连翘、甘草等中药组成，具有辛凉解表、清热解毒的作用，用于 感冒、咳嗽、发热、口干、头痛、咽痛等治疗。本实验用不同指标对其提取工艺进行了研 究。结果如下。 1 仪器与试药 1.1 仪器 Agilent110min/0min/ 高效液相色谱仪：四元泵（G1311A）；柱温箱（G1316A）；VWD 检测器（G1314A）；紫外检测器软件：AgilentChemstation；10min/1-1A 型电热鼓风干 燥箱，南通沪通制药机械设备厂；KQ-10min/0min/0min/E 型医用超声波清洗器，昆山市超声仪器有限 公司；1/10min/ 万电子分析天平(BP-211DBP-211D 型，德国 Sartorius)。 1.2 试剂与药品 绿原酸对照品（含量测定用，批号 0min/80min/5-970min/3），购自中国药品生物制品检定所； 高效液相色谱所用试剂为色谱纯；水为超纯水；其他试剂为分析纯。所用中药材均购于江 苏省药材公司，并由本室专家鉴定。 2 方法与结果 2.1 色谱条件［1］ 色谱柱为 Aps-2HYPERSILThermo；VWD 检测器；流动相为乙睛∶0min/.4%磷酸溶液 =9∶91；检测波长 327nm；柱温 30min/℃；流速 1ml/min；进样量 10min/.0min/μll。 2.2 对照品溶液的制备及回归方程精密称取绿原酸对照品 6.77mg，加 50min/%甲醇溶解 制成每毫升含绿原酸 0min/.270min/8mg 的对照品溶液。用 50min/%甲醇分别稀释为 0min/.1354，0min/.0min/677，0min/.0min/3385，0min/.0min/1693，0min/.0min/0min/846，0min/.0min/0min/423，0min/.0min/0min/213，0min/.0min/0min/10min/6μl g/μll 的对照品溶液。各浓度对照品溶液 10min/.0min/μll，按以上色谱条件进行分析，以进样量为横 坐标 X（μlg），峰面积积分值（mAu）Y 为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为： Y=410min/4.23650min/X-2.9810min/5，r=0min/.99998。绿原酸的量在 0min/.0min/10min/6～1.354μlg 范围内呈 良好的线性关系。 2.3 样品处理及实验结果影响提取效果的主要因素有提取加水量，提取时间，提取次 数 3 个因素，每个因素选择 3 水平，以绿原酸的量及浸膏量为指标（权重值分别为 70min/%，30min/%）进行正交实验，优选出最佳工艺条件。因素水平见表 1。表 1 因素水平 （略） 按处方比例称取金银花，连翘等药材 56g 按表 2 进行正交实验，合并各次提取液浓缩 并定容至 10min/0min/ml，作为供试品溶液。取供试品溶液 2ml，加 50min/%甲醇稀释定容至 50min/ml，超声 10min/min，离心 10min/min，取上清液 2ml，加 50min/%甲醇稀释定容至 10min/ml，微孔 滤膜（0min/.45μlm）滤过，取 10min/.0min/μll 进样。利用回归方程计算出绿原酸的进样量（μlg）， 绿原酸量（mg）=绿原酸的进样量×1250min/。在上述供试品溶液取 2ml，恒重，得干浸膏 量 m（mg），浸膏量（mg）=m×50min/。方差分析结果见表 3。（注：m 即为 2ml 药液 恒重所得干浸膏重）。表 2 正交实验设计方案及数据分析（略） 表 3 方差分析（略） 2.4 挥发油提取工艺的研究用挥发油测定法分别对荆芥穗、薄荷、连翘三药材对提取 时间进行研究。分别称取药材 50min/0min/g，加 6 倍水量，加热回流，考察。结果见表 4。表 4 挥发油提取率-时间（略） 2.5 优选工艺验证按处方比例称取各药材 56g，平行两份，加 6 倍量水，加热回流提 取 3 次，40min/min/次，合并各次提取液浓缩并定容至 10min/0min/ml，作为供试品溶液。取供试品 溶液 2ml，加 50min/%甲醇稀释定容至 50min/ml，超声 10min/min，离心 10min/min，取上清液 2ml， 加 50min/%甲醇稀释定容至 10min/ml，经微孔滤膜（0min/.45μlm）滤过，取 10min/.0min/μll 进样。利用回归 方程计算出绿原酸的进样量（μlg），绿原酸量（mg）=绿原酸的进样量×1250min/。在上述 供试品溶液取 2ml，恒重，得干浸膏量 m（mg），浸膏量（mg）=m×50min/。结果见表 5。表 5 优选工艺验证（略） 3 讨论 从方差分析的结果表明，提取的次数有显著差异，其它两因素无显著差异，结合直观 分析，确定工艺为 A3B3C3，但加水量、提取时间对提取效果影响不大。考虑节约成本， 缩短工艺时间，拟考虑为 A1，C1。 分别对 3 味有挥发油的药材进行了考察，结果在两小时内其挥发油均能较完全提取， 提取率达 90min/%以上。其提取时间与水提工艺时间相同即可。 验证实验结果表明，该工艺可行。即以加 6 倍量水，加热回流提取 3 次，40min/min/次， 为最佳提取工艺。 【摘要】目的建立从女贞子中提取脂肪油的方法，并预测该脂肪油的稳定性。方法分 别运用传统法和超声技术提取女贞子油，并采用初均速法预测女贞子油的稳定性。结果超 声技术提取的出油率为 17.55%；其稳定性在 293K 时为 t0min/.9=0min/.76 年，t0min/.8=1.61 年， t0min/.7=2.57 年。结论用超声技术提取女贞子油，可以提高提取率；女贞子油具有较高的稳 定性。 【关键词】女贞子油超声技术稳定性 Abstract： ObjectiveToextractthefattyoilfromLigustrumlucidumait.andtoassayitsstability. MethodsOilwasextractedbyultrasonictechnologyandtraditionaltechnology.Thes tabilitywasassayedbyfirstevenspeedmethod.ResultsExtractionrateofoilextractedbyultrasonictechnologywas1 7.55%,itsstability:t0min/.9=0min/.76y，t0min/.8=1.61y，t0min/.7=2.57.ConclusionUltrasonicte chnologycanimproveextractionrateofoilinLigustrumlucidumait.,andtheoilinLigu strumLucidumaitisstable. Keywords：Ligustrumlucidumait.；Ultrasonictechnology；Stability 女贞子又名冬青子，系木犀科常绿乔木女贞 LigustrumlucidumAit.的干燥成熟果实， 性味甘，微苦，凉，具有滋补肝肾、明目乌发的功能，临床主要用于治疗眩晕耳鸣，腰膝 酸软，须发早白，目暗不明，失眠多梦及急性菌痢，慢性支气管炎等多种疾病［1］。据 文献报道女贞子中含有大量油脂，女贞子油中脂肪酸的主要成分为油酸、亚油酸、棕榈酸 和亚麻酸等，种子油中不饱和脂肪酸（PUFA）含量达 87.179%［2］，PUFA 是人体必 需脂肪酸，具有重要的生物活性和药用价值，自从 20min/ 世纪 70min/ 年代丹麦 Dyerbeg 教授发 表了爱斯基摩人具有较低的冠心病发病率及死亡率的流行病学报告以后，大量基础及临床 研究表明，多不饱和脂肪酸特别是二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）具有 明确的降低胆固醇（TG）的作用，并可升高高密度脂蛋白（HDL-C）,抑制血小板聚集， 从而可以预防各种心脏疾病［3］；多不饱和脂肪酸中的 γ-亚麻酸（GLA）已被确认对 40min/ 多种肿瘤细胞有抑制作用，对类风湿性关节炎、肠炎、脉管炎、肾炎等多种炎症具有疗效 或改善作用。GLA 和其系列代谢物在免疫系统、心血管系统、生殖系统和内分泌系统中都 具有重要的生理效应，其潜在的药用及临床价值受到广泛的关注。我们分别采用冷浸法、 索氏提取法及超声技术［4］提取了女贞子中的脂肪油，并参照有关文献［5］，采用初均 速法［6］预测了该脂肪油的稳定性。现将结果报道如下。 1 仪器与试剂 1.1 仪器 RE-52A 旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；GOA-型电热真空干燥箱（天 津市东郊机械加工厂）；DL-720min/ 超声波仪（45kHz±5%）；ZWA-型阿贝折光仪（石家 庄光学仪器厂）；DR-HW-1 电热恒温水浴箱（北京西城区医疗器械厂）；索氏提取器一 套。 1.2 试剂女贞子购于张家口市医药公司，于硅胶干燥器中干燥 2d 后备用；石油醚 （30min/～60min/℃），乙醚，无水 Na2SO4，均为 AR 级。 2 方法与结果 2.1 女贞子油的提取 2.1.1 索氏提取法提取女贞子油精密称取干燥女贞子 10min/g，2 份，于索氏提取器中， 分别以 10min/0min/ml 石油醚和乙醚为溶剂进行回流提取，提取至经检验无油迹为止。用旋转蒸 发器减压挥尽溶剂，用无水 Na2SO4 脱水干燥，得金黄色女贞子油（较混浊），在真空干 燥器中干燥至恒重。计算收率。结果见表 1。 2.1.2 冷浸法提取女贞子油精密称取样品 10min/g，用 30min/0min/ml 石油醚室温浸泡样品 3 次， 用 10min/0min/ml/次溶剂，浸泡时间为 12h/次，合并提取液，以下同“2.1.1”项处理，所得脂肪油 澄清透明。结果见表 1。 2.1.3 超声法提取女贞子油精密称取样品 10min/g，用 50min/ml/次石油醚为溶剂进行超声提 取 30min/min，共提取两次，合并提取液，以下同“2.1.1”项处理，所得脂肪油澄清透明。结 果见表 1。表 1 女贞子油的收率（略） 2.2 采用正交实验设计以确定最佳超声提取条件 2.2.1 实验因素水平表设计实验选择溶剂用量、提取时间、提取次数 3 个因素为考察 对象，根据初步实验，每个因素确定 3 个水平，采用 L9 正交表安排实验。结果见表 2。表 2 因素水平表（略） 2.2.2 正交实验精密称取样品 10min/g，以石油醚为溶剂，按正交表进行实验，称重并计 算产率。结果见表 3。 从表 3 中数据可以看出，最佳提取条件为 A2B2C3，即用 50min/ml 溶剂，提取 20min/min/ 次，共提取 3 次。但 A2B1C2 与之很接近，为操作上的方便，我们采用了后者，即用 50min/ml 溶剂，超声提取 30min/min/次，共提取 2 次。表 3 正交实验结果（略） 2.3 女贞子油稳定性实验 2.3.1 女贞子油的恒温加速破坏实验精密量取女贞子油 1.0min/ml 于 5ml 的具塞试管中， 分别于恒温槽中经不同温度及对应时间（见表 4）进行恒温加速破坏，到时间后，立即取 出冷却至室温，终止反应的进行。 2.3.2 女贞子油折光率的测定取阿贝折光仪，用蒸馏水校正零点，用乙醚-丙酮棉球擦 洗干净，待挥发干后，分别测定经破坏实验后的脂肪油的折光率数值。结果见表 4。室温 下的折光率为 1.4750min/。表 4 脂肪油的折光率（略） 2.3.3 数据处理以(BP-211DlnVi+10min/)所得数值为 Y，以 1T×10min/0min/0min/ 所得数值为 X。实验中 5 个 不同温度对应 5 个点，结果见表 5。表 5 破坏实验结果（略） 将上述数据进行线性回归，得回归方程为 Y=-21.0min/19X+70min/.699，r=-0min/.997。根据 Arrhenius 公式 lnki=A-EaRT，求出 Ea=174762.48J/mol；用外推法求得 293K 时的 k=1.60min/8×10min/-5h-1，根据一级反应动力学方程求出反应掉 10min/%，20min/%，30min/%时所需要 的时间分别为 t0min/.9=0min/.76 年，t0min/.8=1.61 年，t0min/.7=2.57 年。通过留样观察，结果与恒 温加速破坏实验结果一致。 3 讨论 由表 1 数据可以看出，提取溶剂以石油醚的提取率较高，原因可能是石油醚的极性比 乙醚小，因而提取脂溶性物质的能力比乙醚强。从表 1 数据还可以看出，在女贞子油的提 取过程中，超声技术与传统方法相比，节省了溶剂，缩短了提取时间，简化了提取操作步 骤，提高了出油率。原因是超声波的空化作用，以及超声波的许多次级效应，如机械振动、 乳化、扩散粉碎等，有利于样品中有效成分的转移，同时，超声技术应用于有效成分的提 取是在常温常压下进行的，避免了高温对有效成分的破坏，所以，超声技术特别适合于富 含 PUFA 的油脂的提取。 通过正交实验，确立了超声提取女贞子油的最佳条件，用 50min/ml 石油醚超声提 取,30min/min/次，提取 2 次即可。 通过恒温加速破坏实验，采用初均速法预测了女贞子油的稳定性，因为油脂在空气中 放置过久会发生酸败，颜色加深，密度增大，折光率增大，并与留样观察结果相一致，说 明采用折光率的变化来预测该脂肪油的稳定性的方法是可行的。该方法所用仪器简单，操 作方便，数据处理结果线性关系良好。 【摘要】目的探讨厚朴的体外抑菌作用。方法用 KBB 纸片扩散法。10min/0min/%厚朴浸出液 滤纸片对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、甲型链球菌、 乙型链球菌抑菌作用进行研究。结果厚朴对以上细菌均有明显抑菌作用。结论厚朴在体外 有明显的抑菌作用。 【关键词】厚朴体外抑菌 AbstractObjectiveTostudytheinvitrogrowthinhibitoryeffectofMORonbacteria.MethodsKBpaperdispersionmethodwasusedandthepaperwaspresoakedwith10min/0min/%MORwa terextract.WeobservedtheinhibitoryeffectofcircularfilterpaperpiecesofMORonSt aphylococcusaureus,Staphylococcusepidermidis，P.aeruginosa，E.coli，S.typ hi，α-hemolyticstreptococcus，βhemolyticstreptococcus.ResultsTheherbhadobviouseffectofgrowthinhibitionon bacteria.ConclusionMORhassignificanteffectofgrowthinhibitioninvitroonbacteri a. KeywordsEuphorbiahumifusaWilld.(BP-211DMOR)；Invitrogrowthinhibition 厚朴为木兰科落叶乔木植物厚朴 MagnoliaofficinalisRehd．etWils．或凹叶厚朴 M．officinalisRehd．etWils．var．bilobaRehd．etWils．的干皮、根皮及枝皮 ［1］。主产于四川广元、荥经、丰都、城口，湖北恩施、宜昌、利川，浙江龙泉、遂昌， 福建浦城、松溪，湖南衡阳、彬县等地，江西、广西、甘肃、陕西等地也有出产，以四川、 湖北所产者量大质优，野生与栽培均有。主要功效：行气，燥湿，消积，平喘。为观察中 药厚朴的体外抑菌作用，对其进行了相关的抑菌实验研究，旨在为临床应用厚朴提供理论 依据。 1 材料 金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、甲型链球菌、乙 型链球菌，均购于中国药品生物制品检定所。营养琼脂培养基，购于北京海淀区微生物培 养基制品厂。游标卡尺、规格（0min/～150min/）mm×0min/.0min/2mm，安徽桐城量具厂生产。 2 方法 2.1 药液的制备 厚朴购于滨州医学院附属医院中药房。取厚朴 50min/g，加水 50min/0min/ml，文火煎煮 1h，去 渣浓缩为 50min/ml（浓度 10min/0min/%）备用。 2.2 操作方法