甘草酸药理作用及机制研究论文

【论文关键词】土霉素片;微生物限度检查法 【论文摘要】目的:建立土霉素片的微生物限度检查方法。方法:采用薄膜过滤法对土 霉素片处理后,分别进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证。结果:金黄色葡萄球菌和白 色念珠菌的回收率均大于 70%。结论:土霉素片采用薄膜过滤法检查微生物限度方法成立。 TerramycinpiecemicroorganisminspectionmethodconfirmationWangYannin gGuoLingbo 【Abstract】Objective:Establishmentterramycinpiecemicroorganismlimitin spectionmethod.Method:Usesthethinfilmtofilterthelawafterterramycinpiecepro cessing,separatelycarriesonthebacterium,themoldandthesaccharomycetescou ntsthemethodconfirmation.Result:Thegoldenyellowstaphylococcusandthewhit erosaryfungusreturnsratioisbiggerthan70%.Conclusion:Theterramycinpieceusesthethinfilmtofilterth elawinspectionmicroorganismlimitmethodtobetenable. 【Keywords】Terramycinpiece;Microorganismlimitinspectionmethod 土霉素是四环素类抗生素,能特异性地与细菌核糖体 30S 亚基的 A 位结合,抑制肽链的 增长和影响细菌蛋白质的合成,对细菌有广谱抑菌作用。因此其微生物限度检查不能用平皿 法,而应采用薄膜过滤法消除其抑菌作用后再检查。 1 材料 1.1 仪器:HWS-250 型恒温恒湿箱(天津苏瑞科技开发有限公司),集菌仪(杭州泰林生物 技术设备有限公司),薄膜(孔径 0.22um),康氏振荡器。 1.2 试剂:玫瑰红钠琼脂培养基,营养琼脂培养基,胆盐乳糖增菌培养基,MUG 培养基,甘 露醇氯化钠琼脂培养基等,均由中国药品生物制品检定所提供。 1.3 菌种:阳性对照菌:金黄色葡萄球菌(验证细菌)、白色念珠菌(验证酵母菌、霉菌);阴 性对照:金黄色葡萄球菌(验证大肠埃希菌)。所用菌种均由中国药品生物制品检定所提供;稀 释剂及冲洗剂为 pH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液。 1.4 样品:土霉素片[0.25g(25 万单位)],厂家为河南华利药业有限责任公司,批号为 07070601。 2 方法与结果 2.1 细菌、霉菌、酵母菌检查方法验证。 2.1.1 细菌检测方法验证。 2.1.1.1 试验组:取供试品 10g,加入 pH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液,于康氏振荡器上振摇 10 分钟,使片分散,500 转、分离心后,分离上清液作为供试液。取上述供试液 10ml,加入 100ml 稀释剂中,薄膜过滤,用冲洗液冲洗 2 次,每次 100ml,第 3 次冲洗液中加入金黄色葡 萄球菌菌悬液 0.5ml,薄膜过滤,取出滤膜,面朝上贴于营养琼脂平皿上,35℃培养 48 小时, 计数。 2.1.1.2 菌液组:取金黄色葡萄球菌菌悬液 0.5ml,直接接种于营养琼脂平皿上,35℃培 养 48 小时,计数。 2.1.1.3 供试品对照组:取上述供试液 10ml,加入 100ml 稀释剂中,薄膜过滤,用冲洗液 冲洗 3 次,每次 100ml,取出滤膜,面朝上贴于营养琼脂平皿上,35℃培养 48 小时,计数。 2.1.1.4 稀释剂对照组:取稀释液 10ml,薄膜过滤,用冲洗液冲洗 2 次,每次 100ml,第 3 次冲洗液中加入 0.5ml 金黄色葡萄球菌菌悬液,薄膜过滤,取出滤膜,菌面朝上贴于营养琼脂 平皿上,35℃培养 48 小时,计数。 2.1.1.5 上述试验连续做三次,结果如下: 金黄色葡萄球菌计数后平均值: 稀释剂对照组菌数:第一次 47 个,第二次 53 个,第三次 49 个; 菌液组菌数:第一次 58 个,第二次 64 个,第三次 60 个; 试验组菌数:第一次 45 个,第二次 54 个,第三次 46 个; 供试品对照组菌数:第一次 0 个,第二次 0 个,第三次 0 个。 2.1.1.6 计算金黄色葡萄球菌回收率。 2.1.1.6.1 稀释剂对照组的回收率:(稀释剂对照组的平均菌落数/菌液组的平均菌落数) ×100% 第一次:47/58×100%=81.0% 第二次:53/64×100%=82.8% 第三次:49/60×100%=81.7% 2.1.1.6.2 试验组的回收率: [(试验组的平均菌落数-供试品对照组平均菌落数)/菌液组平均菌落数]×100% 第一次:(45-0)/58×100%=77.6% 第二次:(54-0)/64×100%=84.4% 第三次:(46-0)/60×100%=76.7% 2.1.2 霉菌、酵母菌检查方法验证。 2.1.2.1 试验组:取供试品 10g,加入 pH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液,于康氏振荡器上振摇 10 分钟,使片分散,500 转、分离心后,分离上清液作为供试液。取上述供试液 10ml,加入 100ml 稀释剂中,薄膜过滤,用冲洗液冲洗 2 次,每次 100ml,第 3 次冲洗液中加入白色念珠 菌菌悬液 0.5ml,薄膜过滤,取出滤膜,面朝上贴于营养琼脂平皿上,23℃培养 72 小时,计数。 2.1.2.2 菌液组:取白色念珠菌菌悬液 0.5ml,直接接种于营养琼脂平皿上,23℃培养 72 小时,计数。 2.1.2.3 供试品对照组:取上述供试液 10ml,加入 100ml 稀释剂中,薄膜过滤,用冲洗液 冲洗 3 次,每次 100ml,取出滤膜,面朝上贴于营养琼脂平皿上,23℃培养 72 小时,计数。 2.1.2.4 稀释剂对照组:取稀释液 10ml,薄膜过滤,用冲洗液冲洗 2 次,每次 100ml,第三 次冲洗液中加入 0.5ml 白色念珠菌菌悬液,薄膜过滤,取出滤膜,菌面朝上贴于营养琼脂平皿 上,23℃培养 72 小时,计数。 2.1.2.5 上述试验连续做三次,结果如下: 白色念珠菌计数后平均值: 稀释剂对照组菌数:第一次 56 个,第二次 60 个,第三次 53 个; 菌液组菌数:第一次 45 个,第二次 47 个,第三次 42 个; 试验组菌数:第一次 43 个,第二次 45 个,第三次 44 个; 供试品对照组菌数:第一次 0 个,第二次 0 个,第三次 0 个。 2.1.2.6 计算白色念珠菌的回收率。 2.1.2.6.1 稀释剂对照组的回收率: (稀释剂对照组的平均菌落数/菌液组的平均菌落数)×100% 第一次:45/56×100%=80.4% 第二次:47/60×100%=78.3% 第三次:42/53×100%=78.2% 2.1.2.6.2 试验组的回收率: [(试验组的平均菌落数-供试品对照组平均菌落数)/菌液组平均菌落数]×100% 第一次:(43-0)/56×100%=76.8% 第二次:(45-0)/60×100%=75.0% 第三次:(44-0)/53×100%=83.0% 2.2 大肠埃希菌检测方法验证。 2.2.1 试验组:取供试品 10g,加入 pH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液,于康氏振荡器上振摇 10 分钟,使片分散,500 转/分离心后,分离上清液作为供试液。取上述供试液 10ml,加入 100ml 稀释剂中,薄膜过滤,用冲洗液冲洗 2 次,每次 100ml,第三次冲洗液中加入大肠埃希 菌菌悬液 0.2ml,薄膜过滤,取出滤膜,放入 100ml 胆盐乳糖培养基中,35℃培养 24 小时,取 0.2ml 上述培养物加入 5mlMUG 培养基中,24 小时后,加靛基质试液 5 滴,液面呈现玫瑰红 环。 2.2.2 阴性菌对照组:照上述方法操作,第三次冲洗时冲洗液中加入 2ml 金黄色葡萄球 菌菌液,薄膜过滤,取出滤膜加入 100ml 胆盐乳糖培养基中,于 35℃培养 24 小时,再取上述 培养物划线接种于甘露醇氯化钠琼脂培养基的平板上,于 35℃培养 24 小时,未发现有金黄 色葡萄球菌典型菌落。 3 讨论 3.1 在细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证三次平行试验中,稀释剂对照菌回收率均不低 于 70%,试验组的菌回收率均不低于 70%,照薄膜过滤法可进行土霉素片的细菌、霉菌及酵 母菌的检查。 3.2 通过大肠埃希菌检测方法验证,阴性对照组未检出金黄色葡萄球菌,试验组检出大肠 埃希菌,按薄膜过滤法可进行土霉素片的大肠埃希菌检查。