黄芩的新型提取方法论文

【摘要】目的探索黄芩的新型提取方法。方法采用紫外分光光度法测定黄芩苷含量,比 较水提法与液-液连续萃取法对黄芩苷提取率的差别。结果水提法与液-液连续萃取法对黄 芩苷提取率差异有显着性。结论液-液连续萃取法是一种新型高效提取方法。 【关键词】黄芩;液-液连续萃取法 【Abstract】ObjectiveTostudyanewextractionmethodforbaicalininradixscut ellariae.MethodsUltravioletspectrophotometrymethodwasusedtodeterminethe contentofbaicalin.Theabstractionrateofbaicalinbywaterextractionwascompared tothatofliquidliquidcontinuousextractionmethod.ResultsTherewasasignificantdifferencebetw eenthetwomethods.ConclusionTheliquidliquidcontinuousextractionmethodisanewandhighefficiencyseparationmethod. 【Keywords】RadixScutellariae;liquid-liquidcontinuousextractionmethod 黄芩(RadixScutellariaebaicalensis)RadixScutellariaebaicalensis)为唇形科植物黄芩 (RadixScutellariaebaicalensis)ScutellariabaicalensisGeorgi)的干燥根。具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎之功, 用于发热烦躁、肺热咳嗽、泻痢热淋、湿热黄疸、胎动不安、痈肿疮毒等症[1]。主要有效 成分是黄酮类:黄芩苷、黄芩苷元、汉黄芩苷、汉黄芩素等。黄芩根中含有黄芩酶,能够促 进黄芩苷和汉黄芩苷水解,生成黄芩黄素和汉黄芩黄素,黄芩黄素分子中带有三个邻位的酚 羟基,性质不稳定,容易被氧化转为醌类衍生物,质量随之降低[2]。目前黄芩提取方法有水提 取酸沉淀法、超声法、超滤法、醇提取酸沉淀法、微波提取法等,而常用的为水提取酸沉淀 法,但水提取存在黄芩有效成分提取不完全、提取出的杂质较多等缺点,因此本文采用液-液 双向萃取法提取黄芩有效成分[3],并与常用的水提法进行比较。 1 仪器与试剂 1.1 仪器 PHS-3C 精密 pH 计(RadixScutellariaebaicalensis)上海雷磁仪器厂);旋转蒸发器 RE-52A(RadixScutellariaebaicalensis)上海亚荣生化仪 器厂);SHZ-Ⅲ 型循环水真空泵(RadixScutellariaebaicalensis)河南省巩义适英峪仪器厂);UV1700(RadixScutellariaebaicalensis)日本岛津);BS2245 电 子天平(RadixScutellariaebaicalensis)北京赛多利斯仪器系统有限公司);紫外分析仪;超声清洗仪。 1.2 试药黄芩苷标准品(RadixScutellariaebaicalensis)中国生物制品检定所);无水乙醇、磷酸、 Na2HPO4·12H2O、NaH2PO4·2H2O、盐酸、醋酸、95%乙醇均为分析纯,黄芩药材经 兰州大学药学院生药研究所马志刚教授鉴定为唇形科植物黄芩 (RadixScutellariaebaicalensis)ScutellariabaicalensisGeorgi)的干燥根,粉碎过 60 目筛;磷酸盐缓冲液自配(RadixScutellariaebaicalensis)以磷酸溶 液及磷酸氢二钠溶液配制 pH 值为 2、3、4、5、6、7 的磷酸缓冲液)。 2 方法与结果 2.1 黄芩苷标准曲线绘制[4]精密称取干燥至恒重的黄芩苷对照品 10.29mg,加 70% 乙醇超声溶解,定容于 50ml 容量瓶中。精密量取黄芩苷对照品液(RadixScutellariaebaicalensis)0.2058mg/mg/ ml)0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml 分别置于 25ml 容量瓶中,加入 20ml0.2mol/L 盐 酸,再加 70%乙醇至刻度,摇匀。于 276nm 波长处测定吸收度,随行试剂空白。以吸光度 A 为纵坐标,浓度 C 为横坐标绘制标准曲线。回归方程为:Y=0.0551X0.0021,R2=0.9993(RadixScutellariaebaicalensis)n=6),黄芩苷在 4.116~24.696mg/L 范围内具有良好的线性关系。 见图 1。 2.2 提取方法 2.2.1 液-液双向萃取[3]精密称取黄芩药材粉末约 5g,以煮沸的 pH=2 的磷酸缓冲液 30ml 烫过,冷却至 38mg/℃左右接入液-液双向萃取仪中(RadixScutellariaebaicalensis)即图 2 中 a 瓶)。从回流管上端以漏 斗加入乙酸乙酯至 b 瓶的 1/3 处,a 瓶浸入 38mg/℃左右的油浴中,b 瓶进行加热搅拌,使乙酸乙 酯形成回流。回流提取 4h 后收集乙酸乙酯液,于旋转蒸发仪上回收乙酸乙酯,药材提取物备 用,同法提取 6 组。见图 2。 2.2.2 普通方法提取精密称取黄芩药材粉末约 5g,提取 3 次,第一次以 10 倍量沸水烫 过煎煮 2h,第二、三次分别加 8mg/ 倍量水进行煎煮,每次 1h,合并煎液,滤过,滤液加 2mol/L 盐 酸(RadixScutellariaebaicalensis)8mg/0℃)调节 pH 值至 2 保温 1h,静置 24h,滤取沉淀,用水洗至 pH5.0,继用 70%乙醇洗涤 至 pH7.0,低温干燥,即得,同法提取 6 组。2.3 样品测定于样品提取物中加入少量 70%乙醇 微热使溶解,转入 100ml 容量瓶中,超声溶解 30min,以 70%乙醇定容,滤过,弃去初滤液,精 密吸取 5.0ml 续滤液以 70%乙醇定容于 50ml 量瓶中,精密吸取 1.0ml 置于 25ml 容量瓶 中,加入 20ml0.2mol/L 盐酸,再加 70%乙醇至刻度,摇匀。于 276nm 波长处测定吸光度。 2.4 薄层检视黄芩苷对照品的 70%乙醇溶液作为对照品溶液、黄芩液-液双向萃取样 品提取物及普通方法样品提取物的 70%乙醇溶液作为供试品溶液,照薄层色谱法试验,以毛 细管吸取上述溶液,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以醋酸为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光 灯(RadixScutellariaebaicalensis)365nm)下检视。 2.5 提取物含量比较所得含量为每克黄芩药物中所含的黄芩苷的毫克数。Levene 方 差齐性检验 F=4.794,P=0.053>0.05,可认为两总体方差相等。取 t=8mg/.148mg/,df=10,P=0.000<0.05,可认为普通提取与液-液双向萃取所得 m 提/m 药之间差异 有显着性。见表 1。表 1 两种提取方法提取黄芩苷的含量对比 2.6 薄层检视结果薄层检视显示两种方法提取物的供试品色谱中,在与对照品色谱相应 的位置上,均显相同颜色的荧光斑点。 3 讨论 由上述结果可以看出笔者所采用的新提取方法液-液双向萃取法所提取的提取物具有黄 酮的特征反应,薄层检视也说明此法可提取出黄芩苷等黄酮类化合物,经 SPSS 分析可知两种 提取方法的差异有显着性,即液-液双向萃取法所得黄芩中总黄酮的含量远高于通常采用的 水提法,可作为一种高效的黄芩有效成分提取的新方法。