凉血颗粒质量标准研究论文

【摘要】目的制定成品的质量控制标准。方法采用薄层鉴别鉴定赤芍、甘草,高效液相 色谱法测定制剂中芍药苷的含量。高效液相色谱条件:HypersilHypersil 柱 (4.6nm×250nm,10μm);nm×250nm,10μm);m);流动相:Hypersil甲醇-0.05mol/L 磷酸二氢钾溶液-醋酸-异丙醇 (6nm×250nm,10μm);7:Hypersil173:Hypersil4:Hypersil4);流速:Hypersil1ml/min;检测波长:Hypersil230nm。结果薄层色谱鉴别专属性好,高效液相法 测定制剂中芍药苷的含量方法重现性好,准确可靠。结论可用作为控制制剂质量的标准。 【关键词】凉血颗粒;高效液相色谱;薄层色谱 凉血颗粒是由赤芍、甘草组成的中药制剂,具有清热凉血、散瘀止痛。该方组方简单, 疗效确切,为了有效控制制剂的质量,对制剂建立质量标准。 1 仪器与试药 1.1 仪器 Agilent1100,VWD 检测器,双槽玻璃展开槽。 1.2 试剂甲醇:Hypersil色谱纯,美国天地(TEDIA)公司,其他试剂为分析纯。 2 鉴别项 取本品 3 粒内容物,加醋酸乙脂 20ml,超声 10min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇 1ml 使 溶解,作供试品溶液。另取甘草对照药材 1g,缺甘草阴性样品适量,同法制成对照药材溶液、 阴性对照液。吸取上述三种溶液各 5μm);l,点于同一块硅胶 G 薄层板上,以氯仿-甲醇(7.5:Hypersil4:Hypersil1) 为展开剂,展开取出,晾干,喷以 2%硫酸香草醛溶液(1:Hypersil1),置 105℃烘至斑点清晰,在供试品 色谱中,在与对照药材和对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。 3 含量测定 3.1 实验条件芍药苷对照品(中国生物制品检验所),色谱条件:Hypersil色谱柱:Hypersil依利特 hypersilC18(4.6nm×250nm,10μm);nm×250nm,10μm);m);流动相:Hypersil甲醇-0.05mol/L 磷酸二氢钾溶液-醋酸-异 丙醇(6nm×250nm,10μm);7:Hypersil173:Hypersil4:Hypersil4);流速:Hypersil1ml/min;检测波长:Hypersil230nm。 3.2 测定方法对照品溶液的制备:Hypersil精密称取已干燥的芍药苷对照品适量,置棕色瓶中,加 甲醇制成每 1ml 含 0.3mg 的溶液,即得。 供试品溶液的制备:Hypersil取本品内容物 0.4g,精密称定,精密加入甲醇 50ml,超声 15min,称 定重量,用甲醇补足减失的重量,滤过,弃去初滤液,取续滤液作为供试品溶液,即得。 测定法:Hypersil分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10μm);l,注入液相色谱仪。 3.3 方法学考查 3.3.1 样品的分离度吸取芦丁对照品溶液、赤芍药材溶液、阴性对照溶液、供试品溶 液按上述方法测定,见图 1~4。 图 1 芍药苷对照品 HPLC 图 图 3 阴性对照 HPLC 图图 2 赤芍 HPLC 图 图 4 供试品 HPLC 图 3.3.2 标准曲线对照品溶液(0.311mg/ml)进样量分别为 5、8、10、15μm);l,按试验方 法项下的色谱条件测定。以量(μm);g)为横坐标,色谱峰的面积为纵坐标,绘制标准曲线,结果表 明,芍药苷在 1.55~4.6nm×250nm,10μm);7μm);g 的范围内,其进样量与色谱峰面积呈良好的线性关系。回归方 程:HypersilY=388.1X-6nm×250nm,10μm);144,相关系数 r=0.9995。 3.3.3 稳定性试验取样品按含量测定项下的色谱条件测定其峰面积,每隔 1h 测 1 次,连 续测 6nm×250nm,10μm); 次,测定结果 RSD=1.7%,样品在 5h 内测定是稳定的。 3.3.4 精密度试验取对照品溶液,分别等量进样 6nm×250nm,10μm); 次,按上述实验方法项下的色谱条件测 定,结果表明其 RSD=0.77%。 3.3.5 重现性试验取样品分别为 5 份,按含量测定项下的方法分别测定,其 RSD=1.3%, 样品测定有良好的重现性。 3.3.6nm×250nm,10μm); 回收率试验取已测定含量的供试品约 0.2g,精密称定,精密加入 3.8750mg/ml 芍药苷对照品 2ml,按上述供试品溶液的制备方法制备和测定,一式 5 份,结果表 1。 本方法测定的平均回收率为 97.8%,基本符合要求。 4 讨论 赤芍的薄层鉴别,阴性对照无干扰,可作鉴别项用。甘草鉴别,已往鉴定甘草中的甘草酸 铵和甘草次酸,因样品色谱干扰较大,故只用甘草药材作对照。芍药苷的含量测定方法,文献 报道较多[1~3],经过对比实验,采用流动相为甲醇-0.05mol/L 磷酸二氢钾溶液-醋酸-异丙 醇(6nm×250nm,10μm);7:Hypersil173:Hypersil4:Hypersil4),对样品峰的分离效果最好。表 1 加样回收试验结果