冠心病患者血浆含量测定论文

【摘要】目的:测定冠心病患者与健康对照者血浆中 MBL 含量,分析其变化情况,从固有 免疫的角度探讨冠心病的可能致病机制。方法:采集 100 例冠心病(CHD)CHD))患者空腹静脉血,健 康对照者 60 例,采用 ELISA 法对血浆中 MBL 含量进行检测。结果:100 例冠心病人血浆 MBL 含量的平均值为 3900μg/L,g/L,标准差为 3209;60 例健康对照组血浆 MBL 含量的平均值为 2056μg/L,g/L,标准差为 1824。冠心病组血浆 MBL 含量高于健康对照组,经 t 检 验,t=4071,P<001,差别有统计学意义。结论:冠心病组血浆 MBL 水平高于健康对照组,二者 均值比较差别有统计学意义,血浆 MBL 参与了冠心病的发生、发展过程。 【关键词】冠心病;MBL;ELISA;含量 【ABSTRACT】Objective:ThemainpurposeofthisstudyistomeasuretheMBLlevelinpla smawithcoronaryheartdiseaseandtrytoanalyzethepossiblemechanismofCHD)sdevelopmen tfromtheviewofinnateimmune.Methods:100bloodsamplesofCHD)patientsand60thatofhealth controlswerecollectedandtestedbyELISA.Results:TheplasmalevelofMBLwere3900μg/L,g/ L,SD)3209incases,while2056μg/L,g/ L,SD)1824incontrols.TheplasmalevelofMBLincasesishigherthanthatofcontrols(CHD)t=4071,P<0 01).Conclusion:TheplasmalevelofMBLishigherinCHD)patientsthanthatincontrols. 【KEYWORD)S】CHD);MBL;ELISA;Plasmalevel 冠心病(CHD)coronaryheartdisease,CHD))是一种严重危害人类健康的疾病,其发病率和死亡 率居首位,尤其在发达国家更为严重,而在我国也呈逐年上升趋势[1]。其病因和发病机制尚 未完全阐明,近年来,冠心病发病的炎症学说越来越得到重视[2],对一些炎性因子和急性期蛋 白的研究也越来越深入。甘露聚糖结合凝集素(CHD)mannanbindinglectin,MBL)是一种兼有调理 素和直接激活补体功能的免疫分子,参与构成抗感染的第一道防线[3]。国外有些学者报道 MBL 与动脉粥样硬化发生、发展有关[4~7],但国内尚无报道,因此本研究主要测定冠心病患 者血浆中 MBL 含量,并对其变化进行分析,从天然免疫的角度探讨冠心病的可能致病机制,为 其辅助诊断和治疗提供资料。 1 材料与方法 11 实验材料 主要设备:低温冰柜(CHD)thermo,美国);酶标仪(CHD)Starfax2100,美国);普通高速离心机(CHD)TGL168, 上海) 主要试剂:MBLELISA 试剂盒(CHD)北京现代高达生物技术有限责任公司) 12 实验方法 121 标本的收集:空腹静脉血标本用 ED)TAK2 抗凝管(CHD)2ml)收集。 冠心病(CHD)CHD))组:共 100 例,为河北北方学院附属第一医院 20049~200510 月住院的冠 心病患者,男 51 例,女 49 例;年龄 45~70 岁,平均(CHD)6041±9443)岁。病例均经心电图、心肌酶 谱和临床症状等综合诊断,符合 WHO 冠心病诊断标准。 健康对照组:60 例,为来院进行健康体检者,男性 32 例,女 28 例,年龄 43~71 岁,平均 (CHD)6027±7198)岁,病例无冠心病症状、体征,超声心动图及心电图均正常。冠心病组与健康对 照组组间年龄无统计学差异。 122 标本的处理 取 1ml 全血放入 15ml 离心管中,5000 转/min 离心 5min,分离血浆,-86℃保存,供测定血 浆 MBL 含量。 123 血浆中 MBL 含量测定 按 MBLELISA 试剂盒说明书,基本操作如下: 标本及试剂准备:冠心病、健康对照血浆标本从低温冰柜(CHD)-86℃)中取出,溶解并恢复至 室温,离心(CHD)3500 转/min5min)。取上清 2μg/L,l,用标本稀释液对标本进行 200 倍稀释(CHD)加入 398μg/L,l 标本稀释液[PBS+005%BSA]),混匀。所有实验用试剂均在室温平衡后使用。 操作步骤: ① 取 100μg/L,l 稀释标本加入酶标板中,同时做对照,第一孔加 100μg/L,l 稀释液作空白,第二孔 向后依次加含 MBL 不同浓度(CHD)0,1,2,5,10,25,50,100ng/ml)的标准液各 100μg/L,l,标准孔均作复 空; ② 置 37℃水浴 1h; ③ 将板中的液体弃去,每孔加入 150μg/L,l 洗板液进行清洗,室温静置 3min,弃去洗板液,反复 3 遍; ④ 清洗后,每孔加入 100μg/L,l 酶标记的 MBL 抗体,37℃1h,使酶标抗体与标本充分结合。 ⑤ 清洗,操作同③; ⑥ 清洗后,每孔加入底物 A、B 各 50μg/L,l,室温避光 15min。每孔加入终止液 50μg/L,l,轻轻混 匀 20s; ⑦ 用酶标仪比色测定波长为 450nm,参考波长为 620nm。在 20min 内完成。 2 结果 用 SPSS130 软件进行统计分析,冠心病组、健康对照组血浆 MBL 含量的比较,采用两 样本均数比较的 t 检验。 100 例冠心病人血浆 MBL 含量的平均值为 3900μg/L,g/L,标准差为 3209;60 例健康对照组 血浆 MBL 含量的平均值为 2056μg/L,g/L,标准差为 1824。冠心病组血浆 MBL 含量高于健康对 照组,经 t 检验,t=4071,P<001,差别有统计学意义,见表 1。表 1 冠心病组与对照组 MBL 含量 水平比较 3 讨论 人类血清 MBL 浓度主要受结构基因外显子 1 密码子点突变的影响和启动子区多态性的 调控[8~11]。国外已有一些 MBL 基因与冠心病的相关性研究[4~6],但对血浆 MBL 浓度与冠 心病的相关性研究很少,只有冰岛的一份前瞻性研究报告[7]:高浓度的血浆 MBL 者,尤其是糖 尿病病人、高血脂、血沉升高人群患心肌梗死的概率较低,提示 MBL 可能与清除动脉粥样 硬化因素有关。雷克雅未克 Landspitali 大学的瓦尔迪马森(CHD)HelgiValdimarsson)和同事分析 了当地的研究资料,共纳入了 1967 年以后的近 2 万参试者。在对其中 987 名 70 岁参试者的 横断面研究中,作者发现,MBL 水平高(CHD)>1000mg/L)与水平低相比,心肌梗塞风险下降 36% (CHD)P<0001)。为证实此结论,研究者对另一个有 1309 名中年人的人群进行了前瞻性分析。结 果发现 MBL 水平高和心肌梗塞风险减弱有关联的迹象,但不如前一横断面分析中的那样强 烈,对总人群、吸烟者或高血压病人也没达到统计学意义。但这次分析证实,高水平 MBL 对 糖尿病人(CHD)P=002)或高胆固醇血症病人(CHD)P=0004)与心肌梗塞风险大为减小有关。鉴于上述 在糖尿病人中的结论“测量 MBL 可用于心性风险的辅助评估,也可能帮助评估预防治疗的需 要”,本研究发现,100 例冠心病人血浆 MBL 含量的平均值为 3900μg/L,g/L;60 例健康对照组血浆 MBL 含量的平均值为 2056μg/L,g/L。经 t 检验,t=4071,P<001,二者均值比较差别有统计学意义, 说明血浆 MBL 可能参与冠心病的发生、发展,但具体作用及机制还有待进一步研究。