甘草酸药理作用及机制研究论文

摘要:甘草是我国着名的传统中药,通经脉,利血气,清热解毒,具有降血脂、抗癌、抗干扰 素诱生剂及增强细胞免疫调节等多种药理活性。现代药理学研究表明,甘草酸是甘草中的主 要活性成分,具有显着的肾上腺皮质激素样作用,可用于人体抗衰老、抗炎、降压、增强肌体 免疫力、提高生理机能、抑制癌细胞生长等,临床上的应用表明了确实的疗效。本文对甘草 酸丰富的药理作用及机制研究进行了综述。 关键词甘草酸药理作用机制研究进展 甘草为多年生草本植物甘草 Glycyrrhizaurlensis 的根及根茎,性味甘平,归心、肺、脾、 胃经,为我国着名的大宗常用中药材和工业原料,国内、国际市场需求量都很大,为临床上最 为常用的中草药之一。甘草具有补脾益气、润肺止咳、通经脉,利血气,清热解毒,止血祛痰 润肺的功效,广泛地被用丁保肝、降血脂、抗癌、抗干扰素诱生剂及增强细胞免疫调节等方 面。现代科学研究表明,甘草中含有 100 多种有效化学成分,其中以甘草甜素、甘草次酸、 甘草苷元和甘草多糖为主。甘草酸(GlycyrrhizicAcid,GA)GlycyrrhizicAcid,GA)是一个最重要的甘草甜素类化合物, 有显着的肾上腺皮质激素样作用,可用丁人体抗衰老、抗炎、降压、增强肌体免疫力、提高 生理机能、抑制癌细胞生长等,它以 18-HH 的两种差向异构体存在(GlycyrrhizicAcid,GA)α 体和 β 体),两者均具有一 定的生理活性,如甘草酸_铵(GlycyrrhizicAcid,GA)甘利欣)为 α 体制剂,具有明显的降酶、抗炎和保肝作用;而强力 宁和复方甘草甜素则为 β 体制剂。甘草酸在临床上的应用表明了其确实的疗效,本文就近年 来对甘草酸丰富的药理作用及机制研究进行了综述。 1 抗肿瘤作用 体内外抗肿瘤药理模型的研究中,GA 对不同肿瘤细胞株均显示了较强的细胞毒作用,通 过致细胞变异及诱导细胞凋亡等多种机制,抑制肿瘤细胞增殖,发挥细胞毒作用。利用细胞胞 质溶胶混悬培养液以及完整的结肠细胞培养物两种模型体系研究后发现,GA 通过抑制人体 结肠肿瘤细胞中 N-H乙酰基转移酶活性和 DNA-H2 氨基芴的内敛可产生抗该肿瘤株增值的药 理作用,显着降低乙酰转移酶类在人体结肠肿瘤细胞清除系统的 Km 和 Vmax 的有效值[1],在 亚细胞毒性浓度时,显着性抑制芳香胺 N-H乙基酰转移酶在人体结肠肿瘤细胞瘤株(GlycyrrhizicAcid,GA)colo205)) 的活性,且这一抑制作用呈现出剂量依赖性。同时,DNA-H2-H氨基芴内敛结构也受到了有效的 抑制。该研究首次阐明 GA 通过抑制乙酰转移酶活性和 DNA 加合物生成来抑制肿瘤的恶化, 为临床上 GA 的应用提供厂新的思路。另外,GA 可通过刺激黑色素瘤细胞 B16 所含的黑色 素生成,加速肿瘤细胞的“老化”。GA 可剂量依赖性增加酪氨酸酶的表达信使 RNA(GlycyrrhizicAcid,GA)mRNA)在 细胞间质中的水平,进而提高蛋白质、酶活性、黑色素含量。研究过程中还发现,GA 能增加 络氨酸酶依赖性蛋白质-H2(GlycyrrhizicAcid,GA)tyrosinasc-Hrclatcdprotcin-H2,TRP-H2)的 mRNA 的表达,对 TRP-H1 却 无显着影响,说明 GA 在有效浓度范围内无细胞毒性,因此在无毒性浓度内等量使用 GA 对正 常黑色素生成无影响,以上结论表明 GA 通过转录激活机制进而诱导刺激黑素产生,发挥抗黑 色素瘤的作用[2]。 GA 的抗肿瘤药理作用是多样的,CHUNG 等进行系统的研究后,得出的构效关系结论为 进一步以 GA 前体结构开发新药物提供丁思路:①GAGA 能减灭细胞癌变刺激物(GlycyrrhizicAcid,GA)如乙醇、丙酮、 醋氨酚、CCl4 等)活化:酶学测定,通过抑制肝微粒体细胞色素 P45)0(GlycyrrhizicAcid,GA)CYPlA,)活性减少前致 癌物的活化,GA 具有化学性防癌的作用,可对抗四氯化碳、半乳糖胺及丙烯基甲酸盐等化学 物质所致肝细胞癌变性损伤。α 构型既抑制“增毒”的细胞素 P45)0 同工酶活性,减少致癌物的 代谢活化,又显着诱导口相酶活性,加快毒物和致癌物的排泄。α 和 β 构型 GA 的抗癌变和急 毒实验比较研究显示,α 体抗 D-H氨基半乳糖肝损害作用优于 β 体。α 体分子结构与泼尼松相 似,易与类固醇激素的靶细胞受休结合,抗癌变作用也大于 β 体。研究还表明,两者均可通过 调节免疫功能达到抑制、阻碍杆细胞癌变的作用,并且 α 体比 β 体作用更强[3]。② GA 在体 内可被葡萄糖醛酸酶水解成为甘草次酸和葡萄糖醛酸,前者有较强的抗氧化抗细胞毒活性,后 者可与毒物结合而增强解毒功能,使其迅速从尿中排出而降低致癌性有关。③ GA 有抑制肿 瘤细胞生成的作用,很可能是变异细胞的增殖受到抑制,进而限制肿瘤细胞的增长。④ GA 可 直接作用于肝细胞,拮抗肝糖原的蓄积作用,加快毒物和致癌物的排泄。另外 GA 的三萜糖甘 在小鼠肝线立体中能诱导渗透性的跃迁使薄膜电位消失、吡啶核甘酸氧化、细胞色素释放 和吞噬诱导作用产生因子,从而达到抗肿瘤的作用[4-H6]。 2 抗病毒作用 病毒影响着人们的健康和日常生活,严重地甚至能夺取生命。经过药理学研究,GA 作为 甘草中的主要抗病毒有效化学成分,抗病毒作用显着[7-H13]。GA 可明显减轻肝细胞脂肪变及 坏死,减轻肝细胞间质炎症反应,抑制肝细胞纤维增生以及促进肝细胞再生等,且副作用少,是 一种治疗乙型肝炎值得重视与推广的药物。在对乙肝表面抗原表达的人肝细胞癌细胞系 PLC/RRF/S’的研究中,发现甘草酸可以抑制异免疫体抗原(GlycyrrhizicAcid,GA)I-HIBsAg))向细胞外分泌,并且具有 剂量相关性。通过阻碍唾液酸的补充,GA 抑制 T-HmsAg) 的表达,从而抑制肝细胞被以乙型肝 炎病毒破坏,改善了慢性乙肝患者肝功能障碍,增强和改善对 IBsAg) 的抑制及 I-HIBV 的免疫状 况。深入研究 GA 抗病毒的作用机制,主要可以被划分为 2 种类型:①GA 通过抑制病毒 DNA 复 制产生抗病毒作用。据文献报道,GA 能剂量依赖性地有效地对抗二重感染拉古细胞 (GlycyrrhizicAcid,GA)Raiicells)中 EB 病毒(GlycyrrhizicAcid,GA)Epstcin-HBarrvirus)的复制。病毒抑制和细胞生长抑制的 IC5)0 分别是 0.04 和 4.8mmol?L-H1,选择性指数高达到了 120,显着地抗病毒同时都正常细胞毒性很低。 GA 不影响 EBV 病毒对于细胞表面的吸附,也不使其微粒物钝化,只是干扰 EBV 向细胞内的 穿透,阻断进一步的复制循环。所以,GA 代表一种新的抗 EBV 化合物的作用方式,不同于核 苷类似物抑制病毒 DNA 多聚酶的方法[8]。② GA 可抑制黄曲霉毒素-HB(GlycyrrhizicAcid,GA)AflatoxinB1,AFB1) 在细胞内成活力从而减少其在肝细胞瘤细胞中的毒性[1]。AFB1 有强烈的腐蚀氧化应激性, 能强烈地诱导受到细胞发生癌变。研究表叫,在人体的肝癌细胞系(GlycyrrhizicAcid,GA)HepG2)中,GA 能降低 AFB1 的细胞毒性,增加在细胞后处理过程中谷胱甘肽 s-H转移酶活性,表现出对抗性的保护作 用,且这种保护效应能抑制肝毒素代谢活化,对于化学诱导细胞癌变性具有显着的保护作用。 80 年代,日本学者首次报道了 GA 抗艾滋病病毒 HIV 的作用,曾引起轰动。艾滋病病毒 HIV 感染者的治疗原则是阻止病毒增殖和增强机体免疫力。实验证明 GA 可明显抑制 HIV 增殖,并具有免疫激活作用。1.23mg)?ml-H1 浓度下即可对 HIV 增殖抑制率达到 5)0%,但抑制 HIV 感染的有效浓度高,范围狭窄,若要维持其在血液中的有效浓度,须持续人量给药。 Watanbe 等给小鼠感染 HIV 病毒制成艾滋病模型后,观察了 GA 治疗效果,发现治疗后的小 鼠存活期明显延长,并且这些小鼠脾、淋巴结肿大被明显抑制;对肛细胞、脾细胞和淋巴细胞 进行培养后,发现它们的增殖能力增强。GA 临床用于治疗艾滋病患者已收到一定效果,虽还 有待于进一步观察,但甘草已被称为战胜 AUDS 病的“仙草”[13]。 GA 以其显着的抗病毒效果以及丰富、独特的抗病毒机制,将在抗病毒的临床应用领域 发挥越来越重要的作用。 3 抗血清作用 近年专家们又发现 GA 可以治疗血液疾病的物质,为人类疾病的治疗提供了又一新的途 径。GA 可显着性减少妇女血液中睾酮的含量,口服 GA 后,血清中的浓度睾酮浓度减少,其机 制是干扰促成睾酮向雄烯二酮转变的 17β-H羟基类固醇脱氢酶 (GlycyrrhizicAcid,GA)hydroxysteroiddehydrog)enase,HSD)活性,且这种增强呈显着的递进式[14]。在治疗哈斯氏 疾病时,GA 可导致肾上腺皮质激素-H氢化可的松的增加,但其抗血清的作用仍不容小视:研究 表明:GA 在 22-H26 岁的健康妇女的黄体期周期中对雄性激素的新陈代谢有影响。口服给予 GA300mg)?d-H1,且不使用其他药物方法时,血清肾素活性、血清肾上腺素、性激素,醛固酮和 氢化可的松含量均发生了较大的变化:总的血清睾丸酮第一个月从(GlycyrrhizicAcid,GA)27.8±8.2)增加到 (GlycyrrhizicAcid,GA)19.0±9.4),第二个月的治疗开始显现显着性的差异(GlycyrrhizicAcid,GA)P<0.05)),为(GlycyrrhizicAcid,GA)17.5)±6.4)ng)?dL-H1,停药后, 雄烯二酮,黄体素和 LH 水平都不同程度的恢复;血浆肾素活性和醛固酮在治疗期间被抑制,血 压和氢化可的松没有变化。由此可以得出结论,GA 可通过阻断 17-HHSD 和 17-H20 分解酶的 活性减少血清睾丸酮[15)]。同时,GA 能有效的抑制 3α,20β-HHSD,直接抑制酶作用结合物的 竞争性拮抗作用,抑制 11β-HHSD 和 15)-H羟前列腺素脱氢酶发挥抗血清的活性[16]。此抗血清 机理具有以下特点:极性更低,吸收更好;体内分布更合理,肝脏靶向性更强;抗炎作用更强;对 肾 11-Hβ-H羟基类固醇脱氢酶抑制更弱,不良反应更小;毒性更低,因而在临床上 GA 的抗血清应 用越来越广泛。 4 免疫调节作用 GA 具有非特异性免疫调节作用,其主要是增强细胞免疫作用,可增强 MNnψ 吞噬功能, 消除抑制性 Mψ 的抑制活性,还可选择性地增强辅助性 T 淋巴细胞的增殖能力和活性。近年 来有研究发现,在小鼠免疫系统腹膜内使用 GA 后白细胞总数(GlycyrrhizicAcid,GA)WBC)计量增加了 5) 倍。当使 用熊果酸、齐墩果酸等药物对动物治疗时最大白细胞总数只能持续 6 天,而使用 GA 尉动物 治疗时最大白细胞数可持续 9 天以上。熊果酸、齐墩果酸对动物使用后 WBC 总数的白分 增加量分别为 91.48±4.6%,135).75)±6.4%,而使用 GA 后 WBC 总数增加量为 114.9±18%。 骨髓细胞和 α-H酯酶阳性细胞在用 GA 后也有增加,GA 与抗原作用可增加脾内特异性抗体滴 度和空斑形成细胞,显着抑制迟发型超敏反应(GlycyrrhizicAcid,GA)DTH)。以上结果表明 GA 等对机体的免疫调 节活性有影响[17]。 5) 其他药理作用 抗炎,抗菌作用:GA 具有皮质激素样抗炎抗菌作用,能够抑制磷酯酶 A 活性,阻止组胺等 活性物质的释放,降低活性因子的反应性以厦抑制抗体生成,临床上多用于各种原因引起的上 呼吸道感染,痈疽疮毒及肾上腺皮质功能低下症。据研究报导,GA 的抗真菌活性作用惊人,具 有巨大的前景[18]。 6 心血管方面作用 GA 具有降血脂与抗动脉粥样硬化作用,阻止动脉粥样硬化的形成,通过动物模型证实,灌 胃给于 GA,对实验性小鼠、大鼠血脂增高均有明显抑制作用,对高脂饮食诱发的家鸽血清胆 固醇升高也有明显抑制作用。离体及在体研究表明:GA 可延长乌头碱诱发的心律失常潜伏 期,减少室颤率,增加哇巴因诱发的室性心律失常的阐值口,推测 GA 可能具有影响心肌细胞 离子通道的作用,应用膜片钳技术观察其对 L 型钙通道电流(GlycyrrhizicAcid,GA)I-HL)的影响,对探讨 GA 对心肌细 胞电生理作用机制提供厂很有意义的指导[19]。 7 抗氧化作用 GA 的抗氧化作用也是其新颖的作用领域之一,且表现出的显着效果逐渐引起科学家的 重视[20,21]。类胡萝卜素中的 β-HGA 为超分子复合体,具有罕见的抗氧化还原的特性。EPR 的白旋捕获技术证明,络合结构的 GA 可增加对斑蝥黄和胡萝卜素的体内清除速率,比过氧化 氢清除速率快 10mmn[22]。 本文将 GA 丰富的药理活性和作用进行了详细的介绍,以及相对深入的构效关系的研究, 为以 GA 为先导物,合理地进行分子设计合成新化合物的研究确定了重要方向。随着研究的 不断深入,GA 也将被更为广泛地应用于各种相关疾病的临床治疗中,为人类造福。 【论文关键词】土霉素片;微生物限度检查法 【论文摘要】目的:建立土霉素片的微生物限度检查方法。方法:采用薄膜过滤法对土霉 素片处理后,分别进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证。结果:金黄色葡萄球菌和白色念 珠菌的回收率均大于 70%。结论:土霉素片采用薄膜过滤法检查微生物限度方法成立。 Terramycinpiecemicroorg)anisminspectionmethodconfirmationWang)Yanning)GuoLing) bo 【Abstract】Objective:Establishmentterramycinpiecemicroorg)anismlimitinspectionm ethod.Method:Usesthethinfilmtofilterthelawafterterramycinpieceprocessing),separatelycarr iesonthebacterium,themoldandthesaccharomycetescountsthemethodconfirmation.Result: Theg)oldenyellowstaphylococcusandthewhiterosaryfung)usreturns-H ratioisbig)g)erthan70%.Conclusion:Theterramycinpieceusesthethinfilmtofilterthelawinspecti onmicroorg)anismlimitmethodtobetenable. 【Keywords】Terramycinpiece;Microorg)anismlimitinspectionmethod 土霉素是四环素类抗生素,能特异性地与细菌核糖体 30S 亚基的 A 位结合,抑制肽链的 增长和影响细菌蛋白质的合成,对细菌有广谱抑菌作用。因此其微生物限度检查不能用平皿 法,而应采用薄膜过滤法消除其抑菌作用后再检查。 1 材料 1.1 仪器:HWS-H25)0 型恒温恒湿箱(GlycyrrhizicAcid,GA)天津苏瑞科技开发有限公司),集菌仪(GlycyrrhizicAcid,GA)杭州泰林生物 技术设备有限公司),薄膜(GlycyrrhizicAcid,GA)孔径 0.22um),康氏振荡器。 1.2 试剂:玫瑰红钠琼脂培养基,营养琼脂培养基,胆盐乳糖增菌培养基,MUG 培养基,甘露 醇氯化钠琼脂培养基等,均由中国药品生物制品检定所提供。 1.3 菌种:阳性对照菌:金黄色葡萄球菌(GlycyrrhizicAcid,GA)验证细菌)、白色念珠菌(GlycyrrhizicAcid,GA)验证酵母菌、霉菌);阴 性对照:金黄色葡萄球菌(GlycyrrhizicAcid,GA)验证大肠埃希菌)。所用菌种均由中国药品生物制品检定所提供;稀 释剂及冲洗剂为 pH7.0 氯化钠-H蛋白胨缓冲液。 1.4 样品:土霉素片[0.25)g)(GlycyrrhizicAcid,GA)25) 万单位)],厂家为河南华利药业有限责任公司,批号为 07070601。 2 方法与结果 2.1 细菌、霉菌、酵母菌检查方法验证。 2.1.1 细菌检测方法验证。 2.1.1.1 试验组:取供试品 10g),加入 pH7.0 氯化钠-H蛋白胨缓冲液,于康氏振荡器上振摇 10 分钟,使片分散,5)00 转、分离心后,分离上清液作为供试液。取上述供试液 10ml,加入 100ml 稀释剂中,薄膜过滤,用冲洗液冲洗 2 次,每次 100ml,第 3 次冲洗液中加入金黄色葡萄 球菌菌悬液 0.5)ml,薄膜过滤,取出滤膜,面朝上贴于营养琼脂平皿上,35)℃培养 48 小时,计数。 2.1.1.2 菌液组:取金黄色葡萄球菌菌悬液 0.5)ml,直接接种于营养琼脂平皿上,35)℃培养 48 小时,计数。 2.1.1.3 供试品对照组:取上述供试液 10ml,加入 100ml 稀释剂中,薄膜过滤,用冲洗液冲 洗 3 次,每次 100ml,取出滤膜,面朝上贴于营养琼脂平皿上,35)℃培养 48 小时,计数。 2.1.1.4 稀释剂对照组:取稀释液 10ml,薄膜过滤,用冲洗液冲洗 2 次,每次 100ml,第 3 次 冲洗液中加入 0.5)ml 金黄色葡萄球菌菌悬液,薄膜过滤,取出滤膜,菌面朝上贴于营养琼脂平 皿上,35)℃培养 48 小时,计数。 2.1.1.5) 上述试验连续做三次,结果如下: 金黄色葡萄球菌计数后平均值: 稀释剂对照组菌数:第一次 47 个,第二次 5)3 个,第三次 49 个; 菌液组菌数:第一次 5)8 个,第二次 64 个,第三次 60 个; 试验组菌数:第一次 45) 个,第二次 5)4 个,第三次 46 个; 供试品对照组菌数:第一次 0 个,第二次 0 个,第三次 0 个。 2.1.1.6 计算金黄色葡萄球菌回收率。 2.1.1.6.1 稀释剂对照组的回收率:(GlycyrrhizicAcid,GA)稀释剂对照组的平均菌落数/菌液组的平均菌落 数)×100% 第一次:47/5)8×100%=81.0% 第二次:5)3/64×100%=82.8% 第三次:49/60×100%=81.7% 2.1.1.6.2 试验组的回收率: [(GlycyrrhizicAcid,GA)试验组的平均菌落数-H供试品对照组平均菌落数)/菌液组平均菌落数]×100% 第一次:(GlycyrrhizicAcid,GA)45)-H0)/5)8×100%=77.6% 第二次:(GlycyrrhizicAcid,GA)5)4-H0)/64×100%=84.4% 第三次:(GlycyrrhizicAcid,GA)46-H0)/60×100%=76.7% 2.1.2 霉菌、酵母菌检查方法验证。 2.1.2.1 试验组:取供试品 10g),加入 pH7.0 氯化钠-H蛋白胨缓冲液,于康氏振荡器上振摇 10 分钟,使片分散,5)00 转、分离心后,分离上清液作为供试液。取上述供试液 10ml,加入 100ml 稀释剂中,薄膜过滤,用冲洗液冲洗 2 次,每次 100ml,第 3 次冲洗液中加入白色念珠菌 菌悬液 0.5)ml,薄膜过滤,取出滤膜,面朝上贴于营养琼脂平皿上,23℃培养 72 小时,计数。 2.1.2.2 菌液组:取白色念珠菌菌悬液 0.5)ml,直接接种于营养琼脂平皿上,23℃培养 72 小 时,计数。 2.1.2.3 供试品对照组:取上述供试液 10ml,加入 100ml 稀释剂中,薄膜过滤,用冲洗液冲 洗 3 次,每次 100ml,取出滤膜,面朝上贴于营养琼脂平皿上,23℃培养 72 小时,计数。