脑灵片对青木香减毒作用论文

【摘要】目的本试验通过研究脑灵片对青木香中马兜铃酸 A 含量的影响,以初步探讨青 木香的解毒问题。方法青木香与脑灵片共煎后用 RP-HPLC 法测定马兜铃酸 A 的吸收值,观 测其含量的变化情况。结果加入脑灵片后,青木香中马兜铃酸 A 的含量明显降低。结论脑灵 片可显着降低青木香中马兜铃酸 A 的含量。 【关键词】脑灵片青木香马兜铃酸 A 减毒 【Abstract】ObjectiveTostudytheeffectsofNaolingtabletonAristolochiaacidAfrominAri stolochiadebilis,preliminarystudyonreducingpoisoneffectsofNaolingtablettoAristolochiadeb ilis.MethodsDeterminedabsorptionofAristolochhiaaicdAbyHPLCafterAristolochiadebilisan dNaolingtabletcommonboilling,toobservedchangeofAristolochiaacidA.ResultsAristolochia acidAcontentofAristolochiadebiliswasmarkedlydecreasedafterNaolingtabletwasadded.Co nclusionNaolingtabletcanmarkedlydecreasedAristolochhiaaicdAcontentofAristolochiadebil is. 【Keywords】naolingtablet;aristolochiadebilis;aristolochiaachidA;reducingpoisonous ness 青木香的药用标准虽然已被取消,但其中所含主要毒性成分马兜铃酸的解毒一直是许多 专家致力解决的问题。国内有 1 例服用“木通”导致肾损害,停用肾透析后连服中药六味地黄 丸加减使病情稳定,肾功能恢复正常的报道[1]。为了深入研究脑灵片对青木香的减毒作用及 机理,我们设计了以下实验。 1 仪器与试药 1.1 实验仪器日立 L6000 型高效液相色谱系统,包括 L-4200HUV-VISDetectorD-2500 型色谱数据处理仪。MA240D 电子分析天平,上海第二天平仪器厂。GQ7OE-5 型红外快速 干燥箱,上海市吴淞五金厂。数显恒温水浴锅,金坛市大地自动化仪器厂。 1.2 药物青木香,为马兜铃科植物马兜铃 AristolochiadebilisSieb.etZucc.的干燥根,购自 中国生物制品检定所,批号:919-9001。脑灵片(糖衣片),甘肃省河西制药有限公司,批 号:050301。 1.3 试剂马兜铃酸 A 对照品(aristolochicacidA,以下简称 AA-I),中国药品生物制品检定所, 批号 110746-200406。甲醇、乙腈为色谱纯,山东省禹王实业总公司禹王化工厂。无水乙醇、 冰醋酸为分析醇,中国安徽医药公司。水为纯化水。自来水,符合国家饮用水标准。 2 色谱条件 色谱柱:依利特 HypersilODS25(4.6mm×250mm),柱号:E:1417177。流速:1ml/min。柱 温:室温。检测波长:250nm。进样量:10μll。流动相:乙腈-(水+冰醋酸)=48:52,其中,水:冰醋 酸=62.5:1。理论塔板数不低于 2000。 3 试验方法与结果 3.1 标准溶液的制备称取 AA-I 对照品 7mg,置于 50ml 量瓶中,加无水乙醇溶解,并稀释至 刻度,摇匀,即得浓度为 0.14mg/ml 的对照品储备液,作为对照品储备液。精密量取对照品储 备液 2.00ml,于 10ml 量瓶中,用无水乙醇定容至刻度,摇匀,即得浓度为 0.028mg/ml 的 AA-I 对照品溶液,作为对照品溶液。 3.2 供试液的制备 3.2.1 青木香样品溶液的制备精密称取青木香样品 0.6g,置于 200ml 烧杯中,加 120ml 自 来水,煎煮 30min,过滤,收集滤液,残渣加 80ml 自来水,煎煮 30min,过滤,收集滤液,合并 2 次 滤液,置于水浴上,浓缩至干。用适量的无水乙醇溶解并完全转移至 10ml 的量瓶中,加无水乙 醇至刻度,摇匀。放入冰箱冷藏,静置过夜。抽取上清液过滤,弃去初滤液,收集续滤液,放入 1ml 塑料离心管中,作为供试液 1。 3.2.2 青木香与脑灵片供试液的制备分别取青木香样品、脑灵片粉末少许,各精密称取 0.6g 置于 200ml 烧杯中,混合两种药物,加入 120ml 自来水,按 3.2.1 项下制备青木香样品溶 液的方法进行操作,其制备液作为供试液 2。 3.3AA-I 的定性分析分别吸取供试液 1 和对照品溶液,注入液相色谱仪,按 2 项下的色谱 条件,测绘其色谱图。色谱图见图 1。 3.4 标准曲线的制备精密吸取对照品储备液 1、2、3、4、5、6ml,分别置 10ml 的量瓶 中,用无水乙醇稀释至刻度。按 2 项下的色谱条件,依次进样测定,测得 AA-Ⅰ 的峰面积。以 AA-Ⅰ 的进样量(μlg)为横坐标,以对应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线。由标准曲线可知,在 0.08~0.40μlg 之间,进样量与峰面积之间呈良好的线性关系,回归方程为 Y=1.7×105X+5248, 相关系数 R=0.9999。 3.5 精密度试验精密吸取对照品溶液 10μll,按 2 项下的色谱条件,注入液相色谱仪,测定对 照品溶液的峰面积,平行测定 5 次。结果见表 1,表明精密度良好。表 1 精密度试验结果 3.6 稳定性试验在 2 项的色谱条件下,精密吸取供试液 110μll,注入液相色谱仪,测定,然后 于 2、4、8、12、24h 各测定 1 次,结果见表 2,表明供试品溶液在 24h 内测定结果稳定。表 2 稳定性试验结果 3.7 重复性试验取青木香样品 0.6g,精密称定,共称取 5 份,照青木香样品溶液的制备项下 操作,制成供试品溶液。在 2 项下的色谱条件下,分别精密吸取供试品溶液各 10μll,注入液相 色谱仪,测定,计算 AA-Ⅰ 的质量。结果见表 3,说明该方法的重复性良好。 3.8 加样回收率试验取 0.2ml 供试液 1,用无水乙醇定容为 1ml,作为供试液 3。取 0.2ml 供试液 1,加入标准溶液 0.15ml,用无水乙醇定容为 1ml,作为供试液 4。取标准溶液 0.15ml, 用无水乙醇定容为 1ml 作为供试液 5。取以上各供试液 10μll,按 2 项下的色谱条件测定,测定 结果:回收率为(99.5±0.5)%,RSD 为 0.5%。 3.9 青木香与脑灵片共煎前后 AA-Ⅰ 含量的变化(AA-Ⅰ 的定量分析)分别取供试液 1、2,按 2 项下的色谱条件测定,并计算各样品中 AA-Ⅰ 的含量,结果见图 2 及表 4。表 3 重复性试验结 果表 4 青木香与脑灵片共煎后的 AA-I 含量 debilisandNaolingTablecommonboilling 结果表 明,青木香与脑灵片共煎后,马兜铃酸 A 含量降低了 55.3%,可见,脑灵片可以明显降低青木香 中马兜铃酸 A 的含量。 4 讨论 国内外学者现已公认,青木香的肾毒性与其所含主要成分马兜铃酸有关,而其中马兜铃酸 A 为主要毒性成分[2],且含量较大,故将马兜铃酸 A 作为测试指标。在提取方法上为了尽量 符合临床实际,我们选用了加热水提的方法,提取次数为 2 次。 青木香行气止痛,解毒消肿,降血压,主治胃肠疼痛,风湿性关节炎,跌打损伤,咽喉肿痛,高 血压病,外用治牙痛,毒蛇咬伤等症[3]。湿热之邪极易伤阴,同时青木香行气亦易伤阴。故需 配伍养阴药,使邪正兼顾。肾阴为一身津阴之根,脑灵片既补气血,养心肾,又滋补肾阴,增强正 气,能防阴液之再耗。其滋阴之作用,恰恰能制约青木香的行气伤阴之性。因而脑灵片能够降 低青木香行气伤阴的副作用。 本研究表明,脑灵片可以明显降低青木香中马兜铃酸 A 的含量,为青木香等含马兜铃酸 类中药的解毒提供了科学依据和新的思路。