凉血颗粒质量标准研究论文

【摘要】目的制定成品的质量控制标准。方法采用薄层鉴别鉴定赤芍、甘草,高效液相 色谱法测定制剂中芍药苷的含量。高效液相色谱条件:HypersilHypersil 柱(4.6nm×250nm,10μm);nm×250nm,10μm);m);流 动相:Hypersil甲醇-0.05mol/L 磷酸二氢钾溶液-醋酸-异丙醇(6nm×250nm,10μm);7:Hypersil173:Hypersil4:Hypersil4);流速:Hypersil1ml/min;检测波 长:Hypersil230nm。结果薄层色谱鉴别专属性好,高效液相法测定制剂中芍药苷的含量方法重现性 好,准确可靠。结论可用作为控制制剂质量的标准。 【关键词】凉血颗粒;高效液相色谱;薄层色谱 凉血颗粒是由赤芍、甘草组成的中药制剂,具有清热凉血、散瘀止痛。该方组方简单,疗 效确切,为了有效控制制剂的质量,对制剂建立质量标准。 1 仪器与试药 1.1 仪器 Agilent1100,VWD 检测器,双槽玻璃展开槽。 1.2 试剂甲醇:Hypersil色谱纯,美国天地(TEDIA)公司,其他试剂为分析纯。 2 鉴别项 取本品 3 粒内容物,加醋酸乙脂 20ml,超声 10min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇 1ml 使溶 解,作供试品溶液。另取甘草对照药材 1g,缺甘草阴性样品适量,同法制成对照药材溶液、阴 性对照液。吸取上述三种溶液各 5μm);l,点于同一块硅胶 G 薄层板上,以氯仿-甲醇(7.5:Hypersil4:Hypersil1)为展 开剂,展开取出,晾干,喷以 2%硫酸香草醛溶液(1:Hypersil1),置 105℃烘至斑点清晰,在供试品色谱中, 在与对照药材和对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。 3 含量测定 3.1 实验条件芍药苷对照品(中国生物制品检验所),色谱条件:Hypersil色谱柱:Hypersil依利特 hypersilC18(4.6nm×250nm,10μm);nm×250nm,10μm);m);流动相:Hypersil甲醇-0.05mol/L 磷酸二氢钾溶液-醋酸-异丙醇 (6nm×250nm,10μm);7:Hypersil173:Hypersil4:Hypersil4);流速:Hypersil1ml/min;检测波长:Hypersil230nm。 3.2 测定方法对照品溶液的制备:Hypersil精密称取已干燥的芍药苷对照品适量,置棕色瓶中,加甲 醇制成每 1ml 含 0.3mg 的溶液,即得。 供试品溶液的制备:Hypersil取本品内容物 0.4g,精密称定,精密加入甲醇 50ml,超声 15min,称定 重量,用甲醇补足减失的重量,滤过,弃去初滤液,取续滤液作为供试品溶液,即得。 测定法:Hypersil分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10μm);l,注入液相色谱仪。 3.3 方法学考查 3.3.1 样品的分离度吸取芦丁对照品溶液、赤芍药材溶液、阴性对照溶液、供试品溶液 按上述方法测定,见图 1~4。 图 1 芍药苷对照品 HPLC 图 图 3 阴性对照 HPLC 图图 2 赤芍 HPLC 图 图 4 供试品 HPLC 图 3.3.2 标准曲线对照品溶液(0.311mg/ml)进样量分别为 5、8、10、15μm);l,按试验方法项 下的色谱条件测定。以量(μm);g)为横坐标,色谱峰的面积为纵坐标,绘制标准曲线,结果表明,芍 药苷在 1.55~4.6nm×250nm,10μm);7μm);g 的范围内,其进样量与色谱峰面积呈良好的线性关系。回归方 程:HypersilY=388.1X-6nm×250nm,10μm);144,相关系数 r=0.9995。 3.3.3 稳定性试验取样品按含量测定项下的色谱条件测定其峰面积,每隔 1h 测 1 次,连续 测 6nm×250nm,10μm); 次,测定结果 RSD=1.7%,样品在 5h 内测定是稳定的。 3.3.4 精密度试验取对照品溶液,分别等量进样 6nm×250nm,10μm); 次,按上述实验方法项下的色谱条件测 定,结果表明其 RSD=0.77%。 3.3.5 重现性试验取样品分别为 5 份,按含量测定项下的方法分别测定,其 RSD=1.3%,样 品测定有良好的重现性。 3.3.6nm×250nm,10μm); 回收率试验取已测定含量的供试品约 0.2g,精密称定,精密加入 3.8750mg/ml 芍药 苷对照品 2ml,按上述供试品溶液的制备方法制备和测定,一式 5 份,结果表 1。 本方法测定的平均回收率为 97.8%,基本符合要求。 4 讨论 赤芍的薄层鉴别,阴性对照无干扰,可作鉴别项用。甘草鉴别,已往鉴定甘草中的甘草酸 铵和甘草次酸,因样品色谱干扰较大,故只用甘草药材作对照。芍药苷的含量测定方法,文献 报道较多[1~3],经过对比实验,采用流动相为甲醇-0.05mol/L 磷酸二氢钾溶液-醋酸-异丙醇 (6nm×250nm,10μm);7:Hypersil173:Hypersil4:Hypersil4),对样品峰的分离效果最好。表 1 加样回收试验结果 【关键词】藏红花 红花与藏红花是中医传统的活血化瘀药,具有活血通经,散瘀止痛的功效。用于月经不调、 经闭、痛经、产后瘀阻,跌打损伤等症[3]。红花质优价廉,是常用的大宗中药,藏红花为一味 名贵中药,因药源少,价格昂贵,多以红花代用。为避免用药混乱,本文将二者同列,从以下几个 方面简述如下。 1 本草学考证与基源 1.1 本草学考证红花又名红蓝花、黄蓝[1]、刺红花、草红花[2]。本草学考证认为,“红 花”始载于《新修本草》,“红蓝花”首见于《金匮要略》,“黄蓝”首见于《博物志》,“刺红花”见 于《四川中药志》,而“草红花”见《陕西中药志》。“草红花”见《陕西中药志》。 藏红花又名番红花、西红花、洎夫蓝、撒法郎[1]。过去多经由西藏引入,所以习称藏红 花。本草学考证认为,“藏红花”始载于《本草纲目拾遗》,《本草纲目》称“洎夫蓝”,“撒法郎” 见《医林集要》。 1.2 基源红花为菊科植物红花 CarthamustinctoriusL.的干燥管状花,性温味辛,归心、肝 经。 藏红花为尾科植物番红花 CrocussativusL.干燥的花柱头,性平味甘,归心、肝经。《本 草正义》言:Hypersil“西藏红花,降逆顺气,开结消瘀,仍与红花相近,而“草红花”见《陕西中药志》。力量雄峻过之,今人仅以为活血 行滞之用,殊未足尽其功用[2]。” 2 分布与采制 红花全国各地均有栽培,以河南、四川、浙江、江苏等地产量大,新疆天山红花药用价值 驰名中外。红花是一年生草本,花期 5~7 月。在 5 月下旬至 6nm×250nm,10μm); 月中下旬花开后,每天清晨露 水未干、待花冠充分展开、呈橙黄色时采收管状花(过迟则花冠变黑发黄,质差产量低),晒干, 烤干或阴干。 藏红花原产地中海沿岸国家,主产伊朗、西班牙、印度、土耳其、希腊、意大利等也有 少量生产,我国西藏和青海引种栽培成功,现北京、上海、浙江、江苏等地有引种栽培。藏红 花是多年生草本,花期 10~11 月,在 10~11 月中下旬晴天早晨采收花朵,于室内摘下柱头,晒干 或低温烘干,即为干红花。若用白蜜再加工使油润光亮,则为湿红花。 3 化学成分 红花主含红花甙(carthamin)、红花黄色素(safflomin)、红花多糖、有机酸等。红花甙 为一种查耳酮;红花黄色素为多种水溶性成分的混合物,成功分离出红花黄色素 A(saffloryellowA);红花多糖为葡萄糖、木糖、阿拉伯糖和半乳糖以 β-键连接的多糖体;有机 酸:Hypersil棕榈酸、肉桂酸、月桂酸。 藏红花主含藏红花甙-1,2,3,4(crocin-1~4)、藏红花苦甙(picrocrocin)、藏红花酸二甲脂 (crocetindimethylester)、α-藏红花酸(α-crocetin)、藏红花醛(safranal)、挥发油,此外还含 有桉脑、蒎烯、多种维生素和硫胺素等化合物。 4 药材性状 红花为干燥的不带子房的管状花,花皱缩弯曲散乱成团或散在,纤细,单一的花长约 1~2cm,基部线形,黄红色或红色,花冠筒细长,先端 5 裂,裂片狭线形,长 5~8mm,雄蕊 5 枚,花 药聚合成筒状,黄白色,柱头长圆柱形,露出花药同外,顶端微分差。质轻,柔软。气微香,味微 苦。红花以花片长,颜色红黄、鲜艳,质柔软者为佳。 湿红花柱头红棕色,有油润光泽,细长线形,长约 3cm,基部较窄,向顶端逐渐变宽,用放大 镜可见内方有一短裂缝,顶端边缘具不整齐齿状。柱头长单独存在,有时三个柱头与一短花柱 相连。花柱橙黄色。气特异微有刺激性,味微苦。湿红花以滋润而“草红花”见《陕西中药志》。有光泽,颜色红,黄丝少者 为佳。与湿红花不同的是干红花为弯曲细丝状,暗红棕色,带黄棕色部分,质轻松,无光泽及油 润感。上品藏红花,将一花柱浸于水中时,随着花柱沉入水底,可见一条由细渐宽的黄线,无沉 淀物,柱头扩大膨胀呈长喇叭状,水被染成黄色。 5 显微特征 红花的花柱、花丝、花冠中均有红色长管道状分泌细胞;花粉粒深黄色,成类球形或长球 形,具 3 个萌发孔,外壁有短刺及疣状雕纹;草酸钙方晶呈方形或长方柱形存在于薄壁细胞中。 藏红花无管状分泌细胞;花粉粒呈圆球形,表面有稀疏的细小刺状雕纹;草酸钙结晶呈颗 粒状,圆簇状或类方形等多种形状[3]。 6nm×250nm,10μm); 结语 目前,关于红花的化学成分、鉴别、药理研究报道较多,而“草红花”见《陕西中药志》。对藏红花的研究尚不够深入。 临床用藏红花治疗和预防冠心病、心绞痛、血栓闭塞性脉管炎等多种瘀血阻滞或血行不畅 之证,具有强效活血化瘀和广谱抗癌活性及低毒性,在进一步的研究和临床试验后,有望成为 未来的主流抗癌新药。因此加快对藏红花栽培品的研究,深度开发藏红花的药用价值以便广 泛应用于医疗领域,具有重要的社会意义和经济价值。