不同白英药材中总皂苷含量差异探究论文

【摘要】目的建立白英中总皂苷的含量测定方法。方法选用薯蓣皂苷元为对照品，采 用分光光度法，高氯酸显色，在 410nmnm 处测定吸光度，计算白英中总皂苷含量。结果薯 蓣皂苷元的质量浓度在 8.91～29.70nmμg/mlg/ml 范围内与吸光度值呈良好线性关系 （r=0nm.9992），方法的平均回收率为 95.9%（n＝9），RSD 为 1.5%；不同来源的白英 药材中总皂苷含量有较大差异。结论该方法操作简便、准确、灵敏、重现性好，可用于白 英药材的质量控制。 【关键词】白英总皂苷薯蓣皂苷元分光光度法 白英为茄科植物 SolanumlyratumThunb.的干燥全草，性微寒，味苦。最早见于 《本经》记载，列为上品，为传统中药，具有清热解毒、祛风化痰、除湿等功效，用于治 疗癌症肿瘤、疱疹、疟疾、黄疸、水肿、淋病、风湿性关节炎、白带异常等病证。白英含 有多种化学成分，主要有甾体皂苷类、甾体生物碱类、有机酸类等化合物，其中皂苷类成 分主要包括以薯蓣皂苷元、替高皂苷元、雅姆皂苷元等皂苷元为非糖部分的多种甾体皂苷。 药理研究显示白英中总皂苷体内外具有一定的抗肿瘤作用，且存在一定的选择性。因此， 测定白英中总皂苷的含量对评价白英药材质量具有重要意义。总皂苷的测定方法有重量法， UV，TLCS，HPLC，GC－MS 法。目前有关白英中总皂苷的含量测定尚未见报道，本文 建立了用 UV 测定白英中总皂苷含量的方法，并比较了 24 种不同来源的白英中总皂苷的含 量，为白英的质量控制提供一定的依据。 一、仪器与材料 紫外分光光度计(上海棱光技术有限公司)、旋转蒸发器(RE-52AA，上海亚荣仪器厂)、 水浴锅(巩义市杜甫仪器厂)。 薯蓣皂苷元标准品（中国药品生物制品检定所提供，I539-20nm0nm0nm0nm1，含量测定用）， 无水乙醇（AR，天津百盛化工有限公司），甲醇（AR，山东禹王实业有限公司），三氯 甲烷（AR，沈阳经济技术开发区试剂厂），盐酸（AR，天津市大茂化学试剂厂），高氯 酸（AR，天津市东方化工厂）。 24 种不同来源的白英药材均由沈阳药科大学孙启时教授鉴定为茄科植物 SolanumlyratumThunb.的干燥全草。 二、方法与结果 2.1 对照品溶液的制备精密称定薯蓣皂苷元对照品约 3mg，置于 10nmml 容量瓶中，加 甲醇溶解并定容即得。 2.2 样品溶液的制备精密称定 1.0nmg 白英药材，置索氏提取器内，加 60nmml 三氯甲烷脱 脂 2h 后，挥去三氯甲烷溶剂；用 20nm0nmml80nm%乙醇在 80nm℃下提取至无色，将乙醇液旋转 蒸发至干；残渣加 2.5mol·L-1 盐酸 50nmml 加热回流 3h，过滤；冷却后用三氯甲烷分 3 次 （30nm，20nm，20nmml）回流萃取，15min/次；合并三氯甲烷萃取液,水洗至中性，水洗液再 加入 20nmml 三氯甲烷萃取，合并三氯甲烷萃取液，水浴蒸干溶剂,残渣用甲醇溶解并定容至 10nm.0nmml 即得。 2.3 吸收光谱的测定分别精密量取薯蓣皂苷元对照品溶液与样品溶液 1.0nmml，置水浴 中挥干溶剂，精密加入 10nm.0nmml 高氯酸，摇匀。65℃水浴加热 15min，取出立即置于冰 水浴中 15min 后，以空白作参比，在 20nm0nm～60nm0nmnm 波长范围内绘制吸收曲线，薯蓣皂苷 元在 40nm5nm 处有最大吸收，样品溶液在 40nm5～412nm 处有较强吸收，故选择 410nmnm 作为测定波长。 2.4 标准曲线的制备精密吸取对照品溶液 0nm.3，0nm.4，0nm.6，0nm.8，1.0nmml，分别置于三 角瓶中，挥干溶剂，精密加入 10nm.0nmml 高氯酸，摇匀。65℃水浴加热显色 15min，取出 后立即置于冰水浴中 15min 后停止反应，以空白作参比，在 410nmnm 处测定吸光度值。计 算得回归方程为 A＝0nm.0nm276C+0nm.0nm0nm55，r=0nm.9992，结果表明薯蓣皂苷元在 8.91～ 29.70nmμg/mlg/ml 范围内与吸光度呈良好的线性关系。 2.5 正交实验法对制备样品溶液的优选本实验选定盐酸浓度(mol/L)、乙醇体积分数 (%)、水解时间(h)作为考察因素，每个因素各取 3 个水平，以总皂苷含量为评价指标，应 用 L9（34）正交表安排实验。因素水平表见表 1，正交实验结果见表 2。 通过直观分析表明：影响因素的主次顺序为水解时间＞盐酸浓度＞乙醇体积分数，经 过分析，选择优化条件为：水解时间 3h，盐酸浓度 2.5mol/L，乙醇体积分数 80nm%。 2.6 稳定性实验准确吸取样品溶液 1.0nmml，按“吸收光谱的测定”项下显色，于 410nmnm 波长处每隔 10nmmin 测定其吸光度，结果表明样品溶液的 RSD 为 0nm.4%，样品溶液显色后 在 60nmmin 内稳定性良好。 2.7 精密度实验精密吸取对照品溶液 1.0nmml，共 5 份，按“吸收光谱的测定”项下显色， 410nmnm 波长处测定，RSD 为 0nm.8%。实验结果表明，方法的精密度良好。 2.8 重复性实验取样品 5 份，按样品溶液的制备法和显色法，依法测定，计算样品中 总皂苷含量。平均总皂苷含量 2.12mg·g-1，RSD=1.4%（n=5），表明方法的重复性 良好。 2.9 回收率实验准确称取一定量已知总皂苷含量的白英样品，每份 0nm.5g，加入一定量 的薯蓣皂苷元对照品，按样品溶液的制备和测定步骤进行，计算得回收率。 2.10nm 样品的测定准确吸取样品溶液 1.0nmml，按“吸收光谱的测定”项下进行测定。分别 测定了 24 种不同来源的白英药材中总皂苷的含量。 从上表中可以得出：不同来源的白英中总皂苷含量不同，产于江苏与昆明的白英中总 皂苷含量最高。 三、讨论 皂苷一般易溶于热水、含水乙醇、热甲醇、热乙醇，几乎不溶或难溶于乙醚、苯、石 油醚等极性较小的有机溶剂。考虑到甲醇对身体有害，无水乙醇提取不完全等因素，选择 乙醇水溶液作为提取溶剂。 根据文献选用含一定浓度的甲醇水溶液和石油醚（氯仿）回流提取，用 TLC 检查得不 到薯蓣皂苷元的斑点。原因是苷类水解时有醇存在，长时间加热可引起其他副反应，皂苷 元往往会发生脱水、环合、双键位移和构型改变等变化。 在实验过程中根据文献采用活性炭脱色 5min，结果测定吸光度值非常小，原因是活 性炭吸附某些苷类物质。比色法所显颜色随显色温度和时间变化而变化，因此，必须严格 控制条件，尽量排除干扰。本实验选用的显色条件稳定。