药用石斛多糖的含有量测评探究论文

【摘要】目的测定不同种石斛及金钗石斛、马鞭石斛、叠鞘石斛、鼓槌石斛的不同药 用部位中多糖的含量。方法采用紫外-可见分光光度法。结果不同种石斛茎中多糖含量为： 球花石斛 18.96%，马鞭石斛 24.89%，金钗石斛 20.49%，报春石斛 15.83%，肿节石 斛 8.27%，叠鞘石斛 16.32%，鼓槌石斛 15.33%，美花石斛 28.28%，兜唇石斛 9.26%；4 种石斛不同药用部位多糖的含量：金钗石斛根 15.36%，茎 20.49%，叶 22.30%；马鞭石斛根 17.56%，茎 24.89%，叶 20.88%；叠鞘石斛根 9.48%，茎 16.32%，叶 17.42%；鼓槌石斛根 10.06%，茎 15.33%，叶 19.81%。结论该实验方 法简便、快速、准确。各种石斛及其根茎叶中多糖含量均比较高，从资源的综合和可持续 利用的角度考虑，建议可以全草入药；美花石斛、球花石斛、报春石斛、叠鞘石斛、鼓槌 石斛、肿节石斛茎在进行药效研究的提前下，确认是否可以替代当前《中国药典》品种入 药。 【关键词】石斛多糖紫外-可见分光光度法 石斛属 Dendrobium 为兰科最大的属之一，全世界共有一千五百多种，广泛分布于 亚洲、欧洲及大洋洲等热带及亚热带地区。我国约有 76 种，主要分布于西南、华东及华 南地区。石斛首先记载于《神农本草经》，并列为上品。《本草纲目》言：“俗方最以补虚， 主治伤中，除痹下气，补五脏虚劳羸瘦，强阴益精；厚肠胃，补内绝不足，逐皮肤邪热痒 气，治男子腰脚软弱，健阳，补肾益力，壮筋骨，暖水脏，轻身延年等”在我国传统医学中 经历了 2000 年以上的应用历史。《中国药典》2005 年版收载金钗石斛 DendrobiumnobileLindl、铁皮石斛 DendrobiumcandidumWall.ex.Lindl、马鞭石斛 DendrobiumfimbriatumHook。石斛具有滋阴清热、益胃生津和润肺止咳等功效，常用 于治疗热病伤津、口干烦渴、病后虚热等多种病症。现代药理研究证明石斛中多糖类成分 是石斛具有免疫增强作用和抗肿瘤作用的活性成分。 石斛为我国常用贵重药材，野生资源匮乏，而种植石斛规模较小，不能满足临床和新 药开发的需要；而且民间药用石斛品种较复杂且规格不统一，它们能否替代药典品种入药， 是迫切需要解决的问题。因此，本文对 9 种石斛茎中多糖、4 种石斛的不同部位中多糖含 量进行了测定，以期能寻找到石斛新的药用资源和新的药用部位，为科学、合理和正确使 用该类药材提供实验数据。 一、材料与仪器 1.1 仪器 UV 一 752 分光光度计(上海第三分析仪器厂)；SHB-3 循环多用真空泵（郑 州杜甫仪器厂）；hh-2 数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）；hctp11b5 托盘天平（北 京医用天平厂）；正德牌远红外可控调温电炉（成都市聚焱电器厂）；DHG-9240A 型电 热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司；KQ-250B 型超声波清洗器（昆山市超 声仪器有限公司）。 1.2 药材石斛药材收集于云南各地、四川夹江县歇马乡及成都五块石药材市场，所有 药材均经刘圆教授鉴定。 二、方法与结果 2.1 多糖的提取与精制称取各石斛药材粉末（过 2 号筛）100g，精密称定，分别至圆 底烧瓶中，各加入石油醚（60～90℃)400ml，脱脂 30min，过滤，通风橱中挥去溶剂。 滤渣以 80％乙醇 100ml 回流提取 30min，趁热过滤。滤渣用 80％热乙醇充分洗涤，再 于通风橱中挥去溶剂。取各残渣分别再用 500ml 蒸馏水回流 2h，提取 3 次，趁热过滤， 用热水洗涤药渣和烧瓶，合并滤液。滤液浓缩至 150ml，加入等容积的 sevag 试剂(按正 丁醇∶氯仿=4∶1 配制而成)，分液漏斗萃取。取上层液体，反复操作。紫外分光光度计扫描， 无蛋白吸收峰。逐滴加入乙醇(95％)至整个溶液中含醇量达到 80％，滴加过程中用磁力搅 拌器搅拌，静置过夜。抽滤，沉淀用无水乙醇反复洗涤，60℃真空干燥，得各石斛精制多 糖，封装备用。 2.2 对照品溶液的制备称取葡萄糖约 0.08g 于小烧杯中，精密称定，用蒸馏水溶解后， 移至 100ml 棕色容量瓶中，用蒸馏水定容，摇匀，得对照品溶液。 2.3 标准曲线的制备精密取葡萄糖标准液 1，1.5，2，2.5，3，3.5ml，分别置 50ml 棕色容量瓶中，各加蒸馏水至刻度。精密量取上述各浓度的标准溶液 0.5ml 于 10ml 棕色容量瓶中，各精密加入 5%苯酚溶液 1.0ml，摇匀，迅速加入 5.0ml 浓硫酸， 在沸水浴中加热 20min，冷却至室温。在波长 490nm 下测定吸光度，同时做一空白，以 标准溶液浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。对所测数据采用回归法计算出 标准曲线的回归方程为 Y=4.9949X－0.0252（r=0.9994），结果表明在 0.016～ 0.294mg/ml 之间，葡萄糖浓度与吸光度值具有良好的线性关系。 2.4 稳定性实验取葡萄糖标准液 0.5ml，置 10ml 容量瓶中，按标准曲线制备项下的 方法，自“加入 5%苯酚溶液 1ml”起，依法每隔 0.5h 测定吸光度值，连续 4h，结果吸光 度基本无变化，样品溶液的稳定性良好。 2.5 精密度实验精密量取葡萄糖标准溶液 0.5ml，置 10ml 容量瓶中，按标准曲线制 备项下的方法，自“加入 5%苯酚溶液 1ml”起，依法重复测定吸光度，RSD 为 1.06% （n=6）。结果表明精密度良好。 2.6 加样回收率实验分别取相应石斛粉末各 0.25g，分别精密加人葡萄糖储备液适量， 按样品制备和含量测定方法测定，平均回收率 98.62％，RSD 为 1.27％（n=9），符合 测定要求。 2.7 换算因子的实验称取 6O℃干燥至恒重的相应石斛多糖各 10mg，精密称定。分 别配制成 0.1mg／ml 溶液。各取 0.5ml 按标准曲线的制备方法，测定吸收度，另取葡萄 糖标准液，同法操作，求出相应石斛中葡萄糖浓度，按下列公式计算换算因素 11 种石斛 多糖换算因子。 f=多糖重量／(多糖液的葡萄糖浓度×多糖的稀释因素) 2.8 不同种、不同药用部位多糖的含量测定精密称取 60℃恒重的上述石斛茎粉末（过 2 号筛）各 0.5g，精密称定，分别置圆底烧瓶中，加入石油醚(60～90℃)5.0ml，脱脂 30min，过滤，通风橱中挥去溶剂。滤渣以 80％乙醇 100ml 回流提取 30min，趁热过滤。 滤渣用 80％热乙醇充分洗涤，再于通风橱中挥去溶剂。取残渣再用 100ml 蒸馏水回流 2h，提取 3 次，趁热过滤，用热水洗涤药渣和烧瓶，合并滤液，冷却后在 500ml 量瓶中 蒸馏水定容。精取各石斛提取液 0.5ml，按照标准曲线项下操作，测定吸收度，按下列公 式计算样品中的多糖含量，重复 6 次，取平均值。结果见表 2，3。表 2 不同种石斛茎中多 糖的含量（略）表 34 种石斛不同部位的多糖含量（略） 多糖含量(％)=C×D×f×V/w C：样品溶液中葡萄糖浓度(μg/ml)g/ml)；D：样品溶液的稀释因素；f：换算因素；V：样 品溶液体积(ml)；W：样品溶液的重量(μg/ml)g) 三、讨论 在所测的样品中，球花石斛中多糖含量和药典中所收载石斛品种含量接近，美花石斛 中多糖的含量高于金钗石斛和马鞭石斛，因此从免疫增强作用和抗肿瘤作用的有效成分石 斛多糖的角度考虑，在进行药效研究的前提下，确认美花石斛、球花石斛、报春石斛、叠 鞘石斛、鼓槌石斛、肿节石斛茎是否可以替代当前药典品种入药。 石斛传统的入药部位是茎，但从本实验结果表明：根和叶的含量比较高，建议全草入 药。由于药材采集样品不全的原因，没有对每一种均进行根、茎、叶多糖含量的测定，实 验正在进行之中。 虽然不同种中石斛茎的多糖含量均较高，但还是有较大差异，提示各药材的品质有差 异。又由于实验所采集样品多数为野生随机采样，不能准确地确定药材的生长年限，生态 环境也不完全相同，故可考虑规范化种植后再用本方法对上述石斛进行平行比较研究，并 得出更为准确、可靠的结论。