人乳铁蛋白抑制鼻咽癌细胞增殖论文

【摘要】目的探讨人乳铁蛋白(hLF)hLF))对体外培养细胞生长特性的影响。方法 MTT 法评 定 hLF) 对人鼻咽癌细胞、中国仓鼠卵巢细胞、人肝脏细胞的生长抑制作用。结果乳铁蛋白 对人鼻咽癌细胞系 CNE 的增殖有抑制作用并呈现剂量依赖性，对正常细胞无抑制作用。结 论 hLF) 可能是一种效果较好的新的抗肿瘤化学剂。 【关键词】人乳铁蛋白；癌细胞；细胞增殖 人乳铁蛋白(hLF)HumanLactoferrin，hLF))是主要存在于人乳清中的球蛋白，乳汁中特 别是初乳中含量最高，具有广谱抗菌、抗病毒、抗肿瘤等作用。国外有学者将其应用于肿 瘤患者的治疗，但是对其作用机制的研究较少。目前国内较少有关于 hLF) 作用于细胞的报 道，我们选用易早期转移的鼻咽癌(hLF)NPC)细胞作为研究对象，以中国仓鼠卵巢细胞 (hLF)CHO))、人肝脏细胞(hLF)L02))作为正常细胞对照，观察 hLF) 在体外是否具有抑制癌细胞生长 的作用，探讨 hLF) 抗肿瘤的作用机制，从而为肿瘤的治疗提供研究基础，为临床实验及应 用提供新的理论依据。 一、材料与方法 1.1 材料人鼻咽癌细胞(hLF)CNE)、中国仓鼠卵巢细胞(hLF)CHO))、人肝脏细胞(hLF)L02))均购自中 国科学院上海细胞资源中心。重组 hLF)(hLF)Lot:L052)0，溶于 PBS 中，储存浓度 5mg/ml，2)0℃储存备用)和噻唑蓝(hLF)MTT，Lot:M2)12)8))均购自 Sigma 公司。RPMI1640、胎牛血清 购自 HyClone 公司。其他试剂均为分析纯。 1.2) 实验方法 1.2).1 细胞培养各细胞系均应用含 10%胎牛血清和 1%青链霉素的 RPMI1640 培养基， 5%CO)2)，37℃培养。 1.2).2)MTT 法检测细胞增殖设空白对照组和 hLF) 干预组。待细胞生长至对数生长期， 接种于 96 孔细胞培养板，接种数为 5×104/孔。每组细胞设 5 个平行孔，各组细胞分别 加入不同浓度的 hLF)(hLF)0，1.2)5×10-3,2).5×10-3，5×10-3，10×10-3，2)0×103，40×10-3g/L)，每孔均为 2)00μll。作用 2)4h 后，加入 MTT(hLF)5g/L，每孔 2)0μll)，继续 培养 4h，测定 A570nm 吸光度。公务员之家 1.2).3 细胞形态观察细胞经 hLF) 处理后，倾去上层悬浮死细胞并用 PBS 洗两遍，加入 新鲜培养基。同样处理对照孔细胞，将细胞置于倒置显微镜下，观察细胞形态的变化。 1.3 统计学处理数据用 x±s 表示，组间比较用方差分析。 二、结果 2).1 重组 hLF) 对鼻咽癌细胞 CNE、人肝脏细胞 L02)、中国仓鼠细胞 CHO) 系的增殖能 力的影响对 CNE 呈现剂量依赖性的抑制作用，而对正常细胞无抑制作用。人乳铁蛋白对各 细胞体外增殖的影响与空白对照比较:1)P<0.05 2).2) 细胞形态学观察显微镜镜下可见，空白对照组癌细胞密集成片生长，如铺路卵石 状，细胞膜圆润，透明，颗粒较少，细胞间界限清楚，并可隐约见到细胞核。hLF) 处理组 癌细胞形态发生明显的改变，随 hLF) 浓度增加，细胞从正常的增殖旺盛的贴壁生长，逐渐 表现为生长缓慢，黏附力降低，细胞变圆，细胞胞质粗糙，细胞内颗粒逐渐增多，且透明 度降低，立体感较差，细胞形态完整性受损，而正常细胞在细胞镜检图 hLF) 作用下无显著 变化。 三、讨论 hLF) 多种生物学功能通过免疫系统的激活与调节得以实现。Bezaul 研究发现，乳铁蛋 白能抑制鼠实体瘤的生长和转移。肿瘤内注射 LF)，可以明显的减小实体瘤的体积，且作用 效果与 LF) 干预天数相关。研究发现，乳铁蛋白的抗头颈部肿瘤作用是通过抑制肿瘤细胞增 殖实现的。Wolf 等发现，人乳铁蛋白通过阻断头颈部肿瘤细胞由 G0 到 G1 期的转化来抑 制肿瘤细胞的增殖。人乳铁蛋白对鼠的 SCC 细胞系生长的抑制作用，与剂量成正相关；而 且人乳铁蛋白抑制头颈部细胞癌的作用是通过直接的细胞毒作用及系统性的免疫调节作用 实现的。 Varadhachary 等人做了大量的口服临床试验，证实乳铁蛋白无药物相关的有害作用。 鼻咽癌作为头颈部肿瘤之一，其恶性程度较高，早期即可出现颈部淋巴结转移，临床上有 转移至骨盆、肺、肝等多器官的病例。选用鼻咽癌细胞作为研究对象，具有一定的代表意 义。 本研究结果显示，人乳铁蛋白可以抑制鼻咽癌细胞增殖，且呈剂量依赖性，对正常细 胞的增殖无明显抑制作用。这一结果，为开发乳铁蛋白的抗癌功效提供了理论依据。