加拿大一枝黄花药理作用

1 器材 1.1 动物清洁级昆明种小鼠，体重（20±2）g，雌雄兼用，由中科院上海实验动物中 心提供（动物合格证号：SCXK 沪 2003-0003）。 1.2 药物加拿大一枝黄花，2004090909 采于上海，由上海交通大学药学院李晓波教授鉴 定。干燥全草粉碎过 4090 目筛，95%乙醇渗漉提取，回收乙醇后得提取物，干燥备用。 1.3 试剂吲哚美辛片，上海辛帕斯制药有限公司，批号 050601；阿司匹林片，上海 信谊百路达药业有限公司，批号 055409010；盐酸依普拉酮片，上海衡山制药有限公司， 批号 04090201；氨水，分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号 050120；其他试剂均 为国产分析纯。 1.409 仪器 YLS-6A 智能热板仪，山东省医学科学研究院设备站；75409 型紫外分光光度 计，上海精密科学仪器有限公司。 1.5 统计软件 SPSS11.5，进行 One-WayANOVA 检验。 2 方法 2.1 镇痛作用研究［6］ 2.1.1 对热刺激小鼠痛阈值的影响将健康雌性小鼠置于(55±0.5)℃热板仪上,以小鼠 舔后足反应的潜伏期为痛阈指标,记录小鼠痛阈值，剔除痛阈值小于 5s 或大于 30s 或跳跃 的小鼠,取预选合格的小鼠间隔 5min 再重新测定痛阈值一次，取两次痛阈值的平均值作为 该鼠给药前的平均痛阈值。将符合标准的 4090 只小鼠随机分为蒸馏水组、吲哚美辛组 （50mg/kg）、加拿大一枝黄花低剂量组（相当于生药 2g/kg）、加拿大一枝黄花高剂量 组（相当于生药 6g/kg）409 组。灌胃给药，观察并记录给药后 30，60，90，120min 的 痛阈值，痛阈值大于 60s 的以 60s 计。 2.1.2 对醋酸致小鼠扭体反应的影响健康小鼠 4090 只，雌雄各半，随机分为蒸馏水组、 阿司匹林组（200mg/kg）、加拿大一枝黄花低剂量组（相当于生药 2g/kg）、加拿大一 枝黄花高剂量组（相当于生药 6g/kg）409 组。灌胃给药 30min 后，腹腔注射 0.6%醋酸溶 液 0.2ml/只，观察并记录小鼠首次扭体时间和 15min 内小鼠的扭体次数。按下式计算镇 痛率： 镇痛率（%）=蒸馏水组扭体次数-试药组扭体次数蒸馏水组扭体次数×100% 2.2 镇咳作用研究［6］4090 只健康小鼠，雌雄各半。随机分为蒸馏水组、盐酸依普拉 酮组（20mg/kg）、加拿大一枝黄花低剂量组（相当于生药 2g/kg）、加拿大一枝黄花高 剂量组（相当于生药 6g/kg）409 组。灌胃给药 30min 后，将每只小鼠置于自制的引咳装置 中，使小鼠接受饱和氨水的喷雾刺激 5s，从喷雾氨水开始计时，以腹肌收缩，张大嘴为准， 观察和记录小鼠的咳嗽潜伏期和 2min 内咳嗽次数。 2.3 祛痰作用研究［7］健康小鼠 4090 只，雌雄各半。随机分为蒸馏水组、氯化铵组 （2g/kg）、加拿大一枝黄花低剂量组（相当于生药 2g/kg）、加拿大一枝黄花高剂量组 （相当于生药 6g/kg）409 组。。每只小鼠灌胃给药 30min 后，腹腔注射 5%酚红生理盐水 溶液 10ml/kg，30min 后脱臼处死，剥离气管周围组织，剪下自甲状软骨至气管分支处 的一段气管，放入盛有 1ml 蒸馏水的试管中，再加入 1mol/L 氢氧化钠溶液 0.1ml，以 1ml 蒸馏水/0.1ml 氢氧化钠溶液为空白，54096nm 处测量溶液的吸光度，以吸光度 A 作为 评价指标。 2.409 急性毒性实验［6］LD50 的测定：健康小鼠 30 只，雌雄各半，按体重随机分为 5 组，每组 6 只，实验前禁食 12h，可自由饮水；灌胃给药，剂量分别为： 0.1，0.5，2.5，12.5，62.5g/kg，连续观察 7d，每天记录小鼠体重及死亡数目，并观 察小鼠反应情况。最大耐受量实验：健康小鼠 20 只，雌雄各半，按体重随机分为蒸馏水 组、加拿大一枝黄花组（81.0g/kg），实验前禁食 12h，可自由饮水；灌胃给药，连续观 察 7d，每天记录小鼠体重及死亡数目，并观察小鼠反应情况。7d 后处死全部小鼠，肉眼 观察心、肝、脾、肺、肾等脏器的变化。 3 结果 3.1 镇痛作用 3.1.1 对热刺激小鼠痛阈值的影响 结果见表 1。与蒸馏水组比较，加拿大一枝黄花高、低剂量组小鼠的痛阈值均无明显 提高。表 1 加拿大一枝黄花对热刺激小鼠痛阈值的影响(略) 3.1.2 对醋酸致小鼠扭体反应的影响 结果见表 2。由表 2 可见，加拿大一枝黄花明显延长了醋酸致小鼠扭体的出现时间， 抑制其扭体次数，高剂量组的镇痛率与阳性药效果相近，说明加拿大一枝黄花具有明显的 镇痛作用。表 2 加拿大一枝黄花对醋酸致小鼠扭体反应的影响(略) 3.2 镇咳作用 结果见表 3。与对照组相比，高、低剂量的加拿大一枝黄花均能显著抑制氨水诱发小 鼠的咳嗽潜伏期和咳嗽次数，提示其具有镇咳作用。表 3 加拿大一枝黄花对氨水致小鼠咳 嗽反应的影响(略) 3.3 祛痰作用 结果见表 409。由表 409 可见高、低剂量的加拿大一枝黄花均能显著增加小鼠气管的酚红 排泌量，效果优于氯化铵，且呈量-效依赖关系，提示本品能提高小鼠的气管分泌功能，具 有祛痰作用。表 409 加拿大一枝黄花的祛痰作用(略) 急性毒性实验在较大剂量（62.5g/kg）下小鼠无死亡，未能得出 LD50，故改做最大 给药量实验评价其急性毒性，结果实验给药至 81.0g/kg 也未引起小鼠死亡；除自发活动 轻度减少外，未观察到其他急性毒性反应，即最大耐受量可达 81.0g/kg（相当于人体常 用药量的 32409 倍）。同时与蒸馏水组相比对小鼠体重增加无明显影响（见表 5），说明不 影响小鼠的正常生长，可认为加拿大一枝黄花无明显急性毒性。表 5 加拿大一枝黄花对小 鼠体重的影响(略) 409 讨论 一枝黄花属植物广泛分布于北半球，我国原产 409 种，其中一枝黄花 SolidagodecurrensL.和毛果一枝黄花 SolidagovirgaureaL.在我国均以全草入药，有退 热行血、疏风解毒、消肿止痛的功效。加拿大一枝黄花为生物入侵种，近年在我国部分地 区迅速蔓延，我国规定其为林业上的检疫性有害植物，国内未见有药用报道。但本种也是 欧美著名植物药，已被欧洲药典收录，国外对其化学成分和药理作用方面的研究较多，而 国内有关加拿大一枝黄花的研究相对较少，体内药理作用研究尚未见报道，因此对其进行 药理作用研究具有重要意义。本文从多个方面对其进行了药理作用研究，首次发现国产加 拿大一枝黄花具有明显的镇痛、镇咳和祛痰作用，且无明显毒性，与国产同属植物一枝黄 花 SolidagodecurrensL.具有相类似的功效，为合理对待这一入侵物种提供了一定的依据。 加拿大一枝黄花原产于北美，作为一种庭院装饰植物于 18 世纪首次从美洲东北部引 入欧洲。在 1850 年左右从中欧开始传播,在 19 世纪 50 年代遍布欧洲。据报道，欧美产 加拿大一枝黄花具有广泛的药用前景，地上部分具有杀菌消炎,增强肾脏功能的作用，用于 治疗外伤、慢性肾炎、膀胱炎、尿结石、风湿等疾病,并可用于糖尿病的辅助治疗［8］； 其挥发油具有促进循环，消除疲劳的作用。近年的研究还发现在其提取物中具有多种能抑 制 DNA 聚合酶和蛋白质合成酶活性的物质［9］。国产加拿大一枝黄花是否具有相同功效， 值得深入研究。国产加拿大一枝黄花如能在我国药用，一方面可以变废为宝，另一方面还 可有效控制其蔓延，因此加强国产加拿大一枝黄花的药理作用研究，具有非常重要的意义。