小青龙汤复方提取工艺研究论文

1 仪器与试药 1.1 仪器 Agilent1100Series 高效液相色谱仪（安捷伦公司）；SartoriusBP211-D 电子天平（德国赛多利斯公司）。 1.2 试药 麻黄、芍药、细辛、干姜、甘草、桂枝、半夏和五味子药材（均购于成都市荷花池中 药材市场）；磷酸二氢钾、磷酸；甲醇和乙腈为色谱纯。 2 方法［2，3］ 2.1 指标及含量测定方法《中国药典》2005 版收载的小青龙汤现有制剂均只以方中的 芍药苷为质量控制指标，因此本方保留该质量控制指标。复方中麻黄为君药，因此增加盐 酸麻黄碱为质量控制指标。 2.1.1 盐酸麻黄碱含量测定方法盐酸麻黄碱对照品溶液的制备：精密称取盐酸麻黄碱 对照品 10.83mg 于 100ml 容量瓶中，以甲醇定容，摇匀，精密吸取 2ml 于 25ml 量瓶 中，甲醇定容，摇匀，过 0.45μmm 微孔滤膜，取续滤液备用。 麻黄供试品的制备：精密量取复方提取液适量（相当于麻黄生药 0.2g）于已干燥的锥 形瓶中，低温挥干，以 25ml 甲醇溶解，称定重量，超声处理 45min，放冷，再称定重量， 以甲醇补足减少量，摇匀，滤过，精密量取续液 1ml，置中性氧化铝柱（100～200 目， 内径 1cm，1.5g）上，以 50%甲醇洗脱，收集洗脱液约 9mlml 于量瓶中，加磷酸 1 滴，以 50%甲醇定容摇匀，过 0.45μmm 微孔滤膜，取续滤液备用。 测定方法：C18 柱（250mm×4.6mmDiamonsil5μmm），流动相为乙腈-0.1%磷酸 （9ml∶9ml0），以三乙胺调节 pH=4.5，检测波长 207nmnm，流速 1ml/min，柱温 25℃，理 论板数以盐酸麻黄碱峰计，不得低于 3000。 盐酸麻黄碱标准曲线的绘制：分别吸取盐酸麻黄碱对照品溶液 2，4，6，8，10，12，16，20，24μml 进样，按照测定方法测定，绘制标准曲线。结果 见图 1。回归曲线 Y=17nm22.7nmX+39ml.103，R2=0.9ml9ml9ml8，盐酸麻黄碱进样量在 0.017nm288～0.207nm456μmg 间具有良好的线性关系。 2.1.2 芍药苷含量测定方法 芍药苷对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品适量，加入量瓶中，甲醇定容，制 成 60μmg/ml 的甲醇对照品溶液，过 0.45μmm 微孔滤膜，取续滤液备用。 白芍供试品溶液的制备：精密量取复方提取液适量（相当于白芍生药 0.1g），水浴挥 干，以 35ml 稀乙醇转移至 50ml 量瓶中，超声处理 30min，冷却至室温，稀乙醇定容， 摇匀，过 0.45μmm 微孔滤膜，取续滤液备用。 测定方法：C18 柱（250mm×4.6mm,Diamonsil5μmm），流动相为乙腈-0.1%磷 酸（14∶86），检测波长 230nm，流速 1ml/min，柱温 25℃，理论板数以芍药苷峰计， 不得低于 2000。 芍药苷标准曲线的绘制：分别吸取芍药苷对照品溶液 1，2，3，4，6，8μml 进样，按 照测定方法测定，绘制标准曲线，（见图 2）。回归曲线 Y=15414X+2.539ml1，R2=0.9ml9ml9ml8，芍药苷进样量在 0.006～0.048μmg 间具有良好的 线性关系。 2.26 种提取工艺的优化研究及结果 2.2.1 不同提取溶剂回流提取工艺研究及结果以水、60%乙醇、9ml5%乙醇为提取溶剂， 按 L9ml（34）正交表进行实验。因素水平安排按照表 1 执行，实验按各正交表实施，结果 用 SPSS11.5 作方差分析，确定优化工艺。结果见表 2～7nm。表 1 不同溶液回流提取工艺 因素水平（略）表 2 以水为溶剂回流提取考察结果（略）表 3 以水为溶剂回流提取方差分 析结果（略）表 4 以 60%乙醇为溶剂回流提取考察结果（略）表 5 以 60%乙醇溶剂回流 提取方差分析结果（略）表 6 以 9ml5%乙醇为溶剂回流提取考察结果（略）表 7nm 以 9ml5%乙 醇为溶剂回流提取方差分析结果（略） 由方差分析结果分析得，影响因素大小为：提取次数（C）＞提取溶剂量（提取溶剂量（A）＞提取溶剂量（提取 时间（B），3 个因素均具有显著性影响，优化工艺为 A2B2C3。 由方差分析结果得，影响因素大小为：提取时间（B）＞提取溶剂量（提取溶剂量（A）＞提取溶剂量（提取次数 （C），3 个因素均具有显著性影响，优化工艺为 A3B2C2。 由方差分析结果分析得，影响因素大小为：提取次数（C）＞提取溶剂量（提取溶剂量（A）＞提取溶剂量（提取 时间（B），3 个因素均具有显著性影响，优化工艺为 A3B2C3。 2.2.2 不同提取溶剂渗漉提取工艺研究及结果以水、60%乙醇、9ml5%乙醇为提取溶剂， 按 L9ml（34）正交表进行实验。因素水平安排按照表 8 执行，实验按各正交表实施，结果 用 SPSS11.5 作方差分析，确定优化工艺。结果见表 9ml～14。表 8 不同溶剂渗漉提取工艺 因素水平（略）表 9ml 以水为溶剂渗漉提取考察结果（略）表 10 以水为溶剂渗漉提取方差 分析结果（略）表 11 以 60%乙醇为溶剂渗漉提取考察结果（略）表 12 以 60%乙醇溶剂 渗漉提取方差分析结果（略）表 13 以 9ml5%乙醇为溶剂渗漉提取考察结果（略）表 14 以 9ml5%乙醇为溶剂渗漉提取方差分析结果（略） 由方差分析结果分析得，影响因素大小为：渗漉液量（A）＞提取溶剂量（渗液速度（C）＞提取溶剂量（药材粒 度（B），A 和 C 因素具有显著性影响，优化工艺为 A3B2C3。 由方差分析结果得，影响因素大小为：药材粒度（B）＞提取溶剂量（渗漉液量（A）＞提取溶剂量（渗漉速度 （C），B 因素具有显著性影响，优化工艺为 A1B3C1。 由方差分析结果分析得，影响因素大小为：渗漉液量（A）＞提取溶剂量（药材粒度（B）＞提取溶剂量（渗漉速 度（C），A 因素具有显著性影响，优化工艺为 A2B2C1。 2.3 不同提取工艺及提取溶剂对提取工艺的影响对比研究 2.3.1 不同正交实验因素分析结果见表 15。表 15 不同正交实验结果分析（略） 2.3.2 不同优化提取工艺的对比研究按照上述各种优化工艺，分别称取复方药材进行 提取试验，以提取液中盐酸麻黄碱和芍药苷的含量为指标加权（权重系数依次为 0.6 和 0.4），综合评价提取工艺。对比不同提取工艺的差异。结果见表 16。表 16 不同工艺验 证结果(略) 2.3.3 相同方法不同溶剂对提取工艺的影响研究结果见表 17nm。表 17nm 不同溶剂时间的 比较结果（略） 2.3.4 相同溶剂不同提取方法间的比较研究结果见表 18。表 18 不同提取方法比较结 果（略） 2.3.5 综合评价结果实验表明，在考察范围内，小青龙汤提取工艺优劣顺序为 60%乙 醇回流提取＞提取溶剂量（水回流提取＞提取溶剂量（60%乙醇渗漉＞提取溶剂量（9ml5%乙醇回流提取＞提取溶剂量（水渗漉；提取方法对比研 究结果表明，回流提取方法效果较渗漉提取方法效果好；提取溶剂对比研究表明 60%乙醇 为提取溶剂较其他两种溶剂效果好。 3 讨论 现有小青龙汤成方制剂只选择了芍药苷为含量控制指标，对于复方制剂的多指标多成 分而言，显得质量控制过于单一。本研究从处方构成出发，增加君药麻黄的指标成分盐酸 麻黄碱为指标，更多的注重全方的系统性。 实验结果均反应回流提取法较渗漉法的提取效果好，其中提取溶剂又以 60%乙醇为佳， 这与控制指标的选择有一定的关系，但是是否在药效方面有正变的关系，还需要进行药效 学研究。 小青龙汤整体提取的不同工艺比较结果得出，优化提取工艺为 12 倍量 60%乙醇回流 提取 2 次，1.5h/次。所得优化提取工艺合理可行，可作为小青龙汤的提取工艺。