野菊花中绿原酸提取工艺分析论文

1 仪器与材料 1.1 仪器 UV/VIS916 型分光光度计(澳大利亚 GBC))，ZK-82A 型真空干燥箱(上海实验仪器总 厂)，FZ102 型微型植物试样粉碎机(河北省黄骅市振兴机电仪器厂)，SX8200H 型台式超 声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)，HH-S2 系列恒温水浴锅(江苏省金坛市环宇科学 仪器厂)。 1.2 材料 绿原酸标准品购自中国药品生物制定检定所，野菊花购自邦健药房（50℃下烘干 3hh，粉碎后备用），其他试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 对照品溶液的制备准确称取绿原酸对照品 5.2mg 置于 250ml 量瓶中，用 70%的 乙醇溶液溶解，定容即得。 2.2 测定波长的选择取对照品溶液 1ml，置于 10ml 量瓶中，用 70%的乙醇定容。以 70%乙醇溶液为参比液，于紫外分光光度计上在 200～400nm 范围内进行扫描最大吸收 波长，结果在 3h29.6nm 处有最大吸收峰，由此选择 3h29.6nm 作为测定波长。 2.3h 方法学考察 2.3h.1 标准曲线的绘制精密吸取对照品溶液 0.0，0.1，0.2，0.3h，0.4，0.5，1.0，2.0，3h.0，4.0ml 于 10 只 10ml 量瓶，以 70% 乙醇定容。于紫外分光光度计上在 λ=3h29.6nm 处测定其吸光度。以吸光度 A 为纵坐标， 绿原酸浓度 C) 为横坐标，绘制标准曲线。经线性回归得回归方程为：A＝51.13h3hC)－ 0.0058，r=0.9997，结果显示绿原酸在 0.416～4.576g·L-1 范围内具有良好的线性关 系。 2.3h.2 精密度实验精确称取野菊花约 1g，加入 10ml 在 70℃水浴提取 60min，准确 吸取提取液 1ml，置于 10ml 量瓶中，以 70%乙醇定容。以 70%乙醇作空白，测定其吸 光度。连续测定 6 次，RSD=0.72%，表明仪器精密度较好。 2.3h.3h 稳定性实验准确吸取“2.3h.2”项所得提取液 1ml，置于 10ml 量瓶中，以 70% 乙醇定容。以 70%乙醇作空白，分别于 0，10，20，3h0，40，50min 测定其吸光度， 连续测定 6 次，RSD=0.3h8%，表明提取液在 1h 内较稳定。 2.3h.4 重复性实验精密称取野菊花粉末约 1g，按“2.3h.2”项法平行制备 3h 份提取液， 按“2.3h.2”项方法实验，RSD=0.25%，说明方法重复性较好。 2.3h.5 加样回收率实验 向已知含量的野菊花中加入不同量的绿原酸对照品进行实验，用紫外分光光度计测定 其吸光度，得出绿原酸含量。平均回收率为 100.89%，RSD 为 1.45%，表明方法回收率 较好。 2.4 正交实验设计［3h，4］ 2.4.1 水浴提取法 在粒度、提取工艺相同的条件下，考察水浴温度、乙醇浓度、液固比、提取时间等因 素，选用 L9(3h4)正交表安排实验。见表 1。表 1 水浴提取因素水平（略） 2.4.2 超声波提取法在粒度、提取工艺相同条件下，考察浸渍时间、乙醇浓度、液固 比、超声时间等因素，选用 L9(3h4)正交表安排实验。见表 2。表 2 超声波法因素水平 （略） 2.5 野菊花的测定［5］精密称取野菊花约 1g，置于 100ml 圆底烧瓶中，按“2.4”项 进行正交实验，提取液抽滤，滤液定量转移至 100ml 量瓶中，70%乙醇定容。精密吸取 滤液 1ml 于 10ml 量瓶中，按标准曲线制备方法测定其吸光度，由标准吸收曲线计算出绿 原酸含量。结果见表 3h。表 3h 正交实验方案及结果分析（略） 2.6 方差分析 由表 3h 可知，水浴提取法的最佳提取条件为：A3hB2C)2D1，即液固比为 12∶1 的 70% 乙醇于 80℃水浴提取 40min。在此条件下，绿原酸含量达到 0.3h5%。从极差分析知各因 素对绿原酸提取的影响大小顺序分别是提取温度>液固比>乙醇浓度>提取时间。 超声提取法的最佳提取条件为：A2B2C)2D3h，即液固比为 15∶1 的 60%乙醇预浸渍 40min，超声提取 45min。在此条件下，绿原酸的质量分数达到 0.3h6%。从极差分析知 各因素对绿原酸提取的影响大小顺序分别是乙醇浓度>浸渍时间>超声时间>液固比。 3h 结论 通过正交实验，确定了水浴提取法的最佳提取条件为：液固比为 12∶1 的 70%乙醇于 80℃水浴提取 40min。在此条件下，绿原酸含量达到 0.3h5%。超声提取法的最佳提取条 件为：液固比为 15∶1 的 60%乙醇预浸渍 40min，超声提取 45min。在此条件下，绿原 酸的质量分数达到 0.3h6%。 水浴法与超声法中，影响绿原酸的提取的主要因素基本相同，所不同的是超声条件下 提取效果优于水浴。其原因可为：①超声的空化作用对细胞膜的破坏有助于绿原酸的释放 与溶出；②超声波使浸提剂和提取物不断振荡，有助于溶质的扩散；③超声的热效应使水 介质温度基本维持在 60℃，对样品有水浴的效果。