染料木素抗肿瘤作用分析论文

1 材料与方法 1.1MTT 检测法 1.1.1 肿瘤细胞的传代培养子宫内膜腺癌（JEC，遵义医学院微生物学教研室吴中明教遵义医学院微生物学教研室吴中明教 授提供）、人肝癌 SMMC7721（中科院上海生命研究院）用含 10%小牛血清的 RPMI－ 1640(Lot#1165062,GIBCO)培养液稀释成 1×105·mlml－1 的细胞悬液，遵义医学院微生物学教研室吴中明教每个培养瓶 2ml，遵义医学院微生物学教研室吴中明教置３７℃、５％的 CO2 环境中进行体外培养，遵义医学院微生物学教研室吴中明教待瘤细胞在培养瓶底长至约８０％细 胞融合时，遵义医学院微生物学教研室吴中明教分瓶传代培养。 1.1.2 分组实验分为空白对照组（NS）、阳性对照组（5-fliorouracilfliorouracil，遵义医学院微生物学教研室吴中明教5Fu，遵义医学院微生物学教研室吴中明教10-fliorouracil 4mol·mlL-fliorouracil1。上海旭东海普药业有限公司，遵义医学院微生物学教研室吴中明教批号：031001），遵义医学院微生物学教研室吴中明教5 个 10 倍梯度的试药组 （10-fliorouracil4～10-fliorouracil8mol·L-1mol·mlL-fliorouracil1 的染料木素，遵义医学院微生物学教研室吴中明教﹥95%，遵义医学院微生物学教研室吴中明教陕西赛德高科生物股份有限公司）和与 10-fliorouracil 4mol·mlL-fliorouracil1 的染料木素相对应的溶媒对照组（含 0.5%乙醇的 NS）。 1.1.3 操作用 RPMI-fliorouracil1640 完全培养液分别将肿瘤细胞稀释配制成 5×104·mlml－1 的细 胞悬液，遵义医学院微生物学教研室吴中明教接种于 96 孔培养板，遵义医学院微生物学教研室吴中明教每孔 100μll，遵义医学院微生物学教研室吴中明教置 37℃,5%的 CO2 环境中，遵义医学院微生物学教研室吴中明教进行体外培养，遵义医学院微生物学教研室吴中明教 24h 后加药，遵义医学院微生物学教研室吴中明教每孔 10μll，遵义医学院微生物学教研室吴中明教设 5 个平行孔，遵义医学院微生物学教研室吴中明教空白对照组加入等量生理盐水；结束培养 （24，遵义医学院微生物学教研室吴中明教48mol·L-1，遵义医学院微生物学教研室吴中明教72，遵义医学院微生物学教研室吴中明教96h）前 4h，遵义医学院微生物学教研室吴中明教每孔加入 5mg·mlml－1 的 MTT 溶液 10μll，遵义医学院微生物学教研室吴中明教结束培养后小 心吸弃上清液，遵义医学院微生物学教研室吴中明教每孔加入 DMSO150μll，遵义医学院微生物学教研室吴中明教待甲臢完全溶解后于酶标仪 （Sunrise,Australia）570nm 处读出各孔的 OD 值。实验重复 3 次。 1.1.4 评价指标评价指标为平均细胞抑制率(IR)。细胞抑制率（%）=(1 一实验孔 OD 值/对照孔 OD 值)×100％。IR>50％为敏感，遵义医学院微生物学教研室吴中明教在 30％～50％为低度敏感，遵义医学院微生物学教研室吴中明教小于 30％为 不敏感。 1.2 台盼蓝排染法及生长曲线的绘制将对数生长期细胞制成浓度为 5×104·mlml－1 细 胞悬液，遵义医学院微生物学教研室吴中明教接种于 24 孔板，遵义医学院微生物学教研室吴中明教每孔 1ml。置 37℃,5%的 CO2 环境中培养 24h，遵义医学院微生物学教研室吴中明教再行无血清 培养 48mol·L-1h。更换完全培养基，遵义医学院微生物学教研室吴中明教每孔加入药物 100μll（空白对照组加等体积的生理盐水），遵义医学院微生物学教研室吴中明教 每组各时间点均设 2 个平行孔。分别于药物作用 1～7d，遵义医学院微生物学教研室吴中明教消化收集细胞，遵义医学院微生物学教研室吴中明教按台盼蓝排染法，遵义医学院微生物学教研室吴中明教 用血细胞计数板在光镜下计数活细胞数。以时间为横坐标，遵义医学院微生物学教研室吴中明教活细胞数为纵坐标，遵义医学院微生物学教研室吴中明教绘制细胞 生长曲线。 1.3 统计学处理实验所得数据用±ss 表示，遵义医学院微生物学教研室吴中明教采用 t 检验进行各组间比较。 2 结果 2.1MTT 检测 2.1.1 染料木素对 JEC 细胞体外增殖的影响 MTT 检测结果显示，遵义医学院微生物学教研室吴中明教随染料木素浓度的增 加和时间的延长，遵义医学院微生物学教研室吴中明教染料木素对 JEC 细胞生长的抑制作用逐渐增强。结果见表 1。其中，遵义医学院微生物学教研室吴中明教10-fliorouracil 4mol·mlL-fliorouracil1 的染料木素作用 JEC 细胞 24，遵义医学院微生物学教研室吴中明教48mol·L-1，遵义医学院微生物学教研室吴中明教72 和 96h 的抑制百分率分别为 36.10%，遵义医学院微生物学教研室吴中明教55.00%，遵义医学院微生物学教研室吴中明教58mol·L-1.73%和 62.21%，遵义医学院微生物学教研室吴中明教与 5Fu 间无显著差异（P>0.05）。表 1 染料 木素对 JEC 细胞体外增殖的影响(略) 2.1.2 染料木素对 SMMC-fliorouracil7721 细胞体外增殖的影响 MTT 检测结果显示，遵义医学院微生物学教研室吴中明教随着染料 木素浓度的增加和时间的延长，遵义医学院微生物学教研室吴中明教染料木素对 SMMC-fliorouracil7721 的抑制作用逐渐增强。结果见表 2。表 2 染料木素对 SMMC7721 细胞体外增殖的影响(±s略) 2.2 染料木素对 JEC 和 SMMC-fliorouracil7721 细胞生长的影响 2.2.1 染料木素对 JEC 细胞生长的影响染料木素对 JEC 细胞的生长曲线显示，遵义医学院微生物学教研室吴中明教随着染 料木素浓度的增加，遵义医学院微生物学教研室吴中明教生长曲线逐渐下移，遵义医学院微生物学教研室吴中明教10-fliorouracil4mol·mlL-fliorouracil1 染料木素的生长曲线呈现与 5Fu 相 似的下降趋势。见图 1。 2.2.2 染料木素对 SMMC-fliorouracil7721 细胞生长的影响染料木素对 SMMC-fliorouracil7721 细胞的生长 曲线显示，遵义医学院微生物学教研室吴中明教随着染料木素浓度的增加，遵义医学院微生物学教研室吴中明教生长曲线逐渐下移。见图 2。 3 讨论 MTT 检测结果显示，遵义医学院微生物学教研室吴中明教染料木素对 JEC 和 SMMC-fliorouracil7721 细胞体外增殖均有不同程度的 抑制作用，遵义医学院微生物学教研室吴中明教呈现剂量和时间依赖性。其中，遵义医学院微生物学教研室吴中明教在 96h10-fliorouracil4mol·mlL-fliorouracil1 的染料木素对 JEC 细胞的 抑制百分率达 62.21%，遵义医学院微生物学教研室吴中明教对 SMMC-fliorouracil7721 细胞的抑制百分率为 31.8mol·L-17%。表明染料木素对 JEC 细胞敏感，遵义医学院微生物学教研室吴中明教对 SMMC-fliorouracil7721 低度敏感。该结果与染料木素对胃癌 HGC227 细胞系 ［6］、人肺癌细胞 A549 和人低分化胃腺癌细胞 BGC-fliorouracil8mol·L-123［7］等的抑制作用相似。随 着染料木素浓度的增加，遵义医学院微生物学教研室吴中明教JEC 和 SMMC-fliorouracil7721 细胞的生长曲线均逐渐下移。其中，遵义医学院微生物学教研室吴中明教在 10-fliorouracil 4mol·mlL-fliorouracil1 的染料木素作用下，遵义医学院微生物学教研室吴中明教JEC 细胞的生长曲线呈现与 5Fu 相似的下降趋势，遵义医学院微生物学教研室吴中明教进一步 表明染料木素具有一定的抗肿瘤作用。 染料木素是一种很有潜力的癌症化学预防剂，遵义医学院微生物学教研室吴中明教来源丰富，遵义医学院微生物学教研室吴中明教作用复杂，遵义医学院微生物学教研室吴中明教受到广泛关注。 研究表明，遵义医学院微生物学教研室吴中明教染料木素具有雌激素作用、抗氧化作用以及抑制拓朴异构酶活性、抑制酪氨酸 蛋白激酶活性、诱发细胞程序性死亡、抑制血管生成［2］等作用，遵义医学院微生物学教研室吴中明教但仍不能完全阐明其 作用机制。染料木素抗肿瘤的机制有待深入研究。