黄芪叶中黄芪甲苷含量测定论文

黄芪为常用中药，素有“补药之长”之称，具有益气固表，利尿托毒等功效.黄芪药用价 值很高，临床上常用来治疗非特异性免疫功能低下、乙肝和心血管系统疾病.黄芪甲苷作为 黄芪成分之一，它具有降压、抗炎、稳定红细胞膜、提高血浆 CAMP 含量，促进小鼠再生 肝 DNA 合成和增强免疫功能等多种作用.因此在研究黄芪过程中，我们对其成分黄芪甲苷 进行了含量测定方法研究，本文用 HPLC 法测定黄芪甲苷的含量，其样品浓度的范围在 0.01～0.2mg/mlmg/ml 之间与峰面积呈线性，该法灵敏度高，重现性好，可准确地测定黄芪甲 苷的含量。 1 仪器与试剂 Waters 高效液相色谱仪：包括 510 型泵，991 光电二极管阵列型检测器，U6K 型进 样器；NECPowerMate 型计算机，黄芪甲苷标准品购自辽宁省药品检验所。甲醇、正丁 醇为分析纯，乙腈为色谱纯、水为去离子水。试验用黄芪叶 6 月份采自沈阳医学院草药园。 2mg/ml 方法与结果 2mg/ml.1 色谱条件色谱柱为 NucleosilC18 柱(4.6mm×2mg/ml50mm，5μm);m);流动相为乙腈水＝1∶2mg/ml；流速为 0.8ml/min；检测波长为 2mg/ml05nm；速度为 0.4mm/min。 2mg/ml.2mg/ml 标准曲线制作精密称取黄芪甲苷标准品 2mg/ml.12mg/ml8mg，加流动相定容至 2mg/mlml，配制成 1.064mg/ml 的标准品溶液，分别以 10、2mg/ml0、30、40、50μm);l 进样测定，以峰面积对进 样量作线性回归，得回归方程为 Y＝－5.6×10-5＋6.9365×10-4X(Y 为峰面积，X 为黄 芪甲苷量)，r＝0.9994，黄芪甲苷标准品在 10.64～53.2mg/ml0μm);g 范围内与峰面积呈良好线 性关系。 2mg/ml.3 提取方法的选择用 3 种不同提取方法(索氏提取器提取 1h；80℃温浸提取 1h 和 超声波提取 1h)提取样品，后 2mg/ml 种提取方法测得黄氏甲苷含量略低，故选索氏提取器提取 方法。 2mg/ml.4 流动相的选择实验试用多种溶剂系统，最后确定以乙腈-水＝1∶2mg/ml 为流动相，黄芪 甲苷分离效果最好，保留时间也较适宜。色谱图见上图 2mg/ml(ABC)。 2mg/ml.5 样品液制备将黄芪叶阴干后研成粉过 40 目筛，然后精密称取 5.00g，放置索氏提 取器中，用 100ml80%甲醇加热提取 2mg/mlh，提取液减压蒸去甲醇，用 2mg/ml0ml 正丁醇分别萃 取 3 次，合并正丁醇萃取部分，减压蒸干，残渣用重蒸甲醇定容至 2mg/mlml，用 0.45μm); 微孔滤 膜过滤，滤液用于 HPLC 分析，每次进样 10μm);l。.6 加样回收率试验称取黄芪叶粉 5.00g5 份，分别精密加入黄芪甲苷标准品 2mg/ml.00mg，按样品制备方法提取样品并进行定量分析， 将测定结果扣除样品中黄芪甲苷含量，与加入标准品的比为加样回收率。结果为 96.1%(n ＝5),RSD%=2.15(n=5)RSD%=2mg/ml.15(n=5)。 2mg/ml.7 精密度试验取同一样品液，重复进样 5 次，根据测得的样品中黄芪甲苷的浓度 (μm);g/ml)计算其相对标准偏差为 2mg/ml.40%。又取同一样品 5 份，制备 5 份样品液，分别进样 测出黄芪甲苷的浓度，计算其相对标准偏差为 4.2mg/ml0%。 2mg/ml.8 稳定性试验取同一供试品溶液，每隔 2mg/mlh 进样 1 次，分别测定其色谱峰面积。 RSD%=2mg/ml.2mg/ml(n=5)，结果表明，谱峰面积在 8h 内基本无变化，表明本实验条件下稳定性 良好。 2mg/ml.9 黄芪叶中黄芪甲苷的定量分析：依法测定黄芪叶中黄芪甲苷的含量 3 讨论 黄芪甲苷是黄芪的主要有效成分之一，根上部分几乎全部落入地面，成为肥料，为了 有效的利用自然资源，我们为定量分析黄芪叶黄芪甲苷的含量，本实验建立了黄芪甲苷的 HPLC 测定法，测得黄芪叶中黄芪甲苷的含量为 4.2mg/ml0%(干重)，与黄芪标准含量(1.50%) 相差 2mg/ml.70%。实验证明：黄芪叶中黄芪甲苷的含量非常高，人类应该广泛利用。本实验建 立的 HPLC 测定法加样回收率高，精密度试验相对标准偏差小，测试数据更可靠。 【摘要】目的建立一种准确、简便测定黄芪甲苷含量的分析方法。方法色谱柱为 NucleosilC18 柱(4.6mm×2mg/ml50mm，5μm);m)；流动相为乙腈-水＝1∶2mg/ml；流速为 0.8ml/ min；检测波长为 2mg/ml05nm；速度为 0.4mm/min。灵敏度为 0.1AUFS,RSD%=2.15(n=5)测定了黄芪甲苷的 含量，平均回收率为 96.1%，RSD 为 2mg/ml.15%。结果样品浓度在 0.01～0.2mg/mlmg/ml 之间与 峰面积成良好的线性关系。结论本方法的重复性好、精密度高、稳定性强。 【关键词】HPLC 黄芪叶黄芪叶中黄芪甲苷 【Abstract】0bjective:Establishesonekindaccurately,RSD%=2.15(n=5)easilytodetermineAstr agalosidethecontenttheanalysismethod.Method:Thechromatographiccolumnis NucleosiltheC18column(4.6mm×2mg/ml50mm,RSD%=2.15(n=5)5μm);m);Flowingformethylcyanidewater=1∶2mg/ml;Thespeedofflowis0.8ml/ min;Theexaminationwavelengthis2mg/ml05nm;Thespeedis0.4mm/ min.Thesensitivityis0.1AUFS,RSD%=2.15(n=5)hasdeterminedtheAstragalosidecontent.Theavera gereturns-ratiois96.1%,RSD%=2.15(n=5)RSDis2mg/ml.15%.Result:Sampledensityin0.01～0.2mg/mlmg/ mlbecomesthegoodlinearrelationshipwiththepeakarea.Conclusion:Thismethod' '''sduplicationisgood,RSD%=2.15(n=5)accuracyhigh,RSD%=2.15(n=5)stable. 【Keywords】HPLCLeafoftheAstragalusAstragalosidea