五味子提取物体外抑菌作用分析论文

【摘要】［目的］研究五味子提取物的抑菌活性，为其合理开发提供参考。［方法］ 以大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯氏菌为供试菌种，采用滤纸片 法和平板二倍稀释法研究了五味子 70%乙醇提取液的抑菌作用。［结果］五味子提取物对 4 种供试菌都有明显的抑制作用。滤纸片法的 MIC，金黄色葡萄球菌为 62.5mg/mlmg/ml，大肠 埃希氏菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯氏菌为 31.3mg/ml；二倍稀释法的结果类似，除金黄二倍稀释法的结果类似，除金黄 色葡萄球菌的 MIC 为 5mg/ml0mg/ml 外，其余 3 种菌均为 25mg/mlmg/ml。另外，五味子提取物经 短时间的高温处理，仍具有较强的抑菌作用。［结论］五味子乙醇提取物具有明显的抑菌 作用，且其抑菌成分是热稳定的。 【关键词】五味子提取物抑菌作用 五味子［Schisandrachinensis(Turcz.)Baill］别名北五味子、辽五味子、山花椒、 乌梅子、软枣子等，为木兰科五味子属植物。多年生落叶木质藤本，以野生为主，为常用 中药材。主要以果实入药，因有甘、酸、辛、苦、咸五味而得名，有敛肺、滋肾、止汗、 生津、止泻、涩精等功能。可以治疗咳嗽、哮喘、口渴自汗、盗汗、遗精、久泻、神经衰 弱等症，也是很好的果酒和饮料的原料［1］，具有极高的药用价值和营养价值，是一种 新型的“药食同源”功能性保健食品，其果实在国际上已成为一种新兴食品工业的重要原料 ［2，3］。本实验采用滤纸片法和二倍稀释法，研究了五味子提取物对 4 种常见污染菌的 抑制作用，为其进一步开发利用提供依据。 1 资料与方法 1.1 菌种与培养基试验菌为金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯 氏菌，由浙江省台州医院微生物实验室友情赠送。牛肉膏蛋白胨培养基按文献［4］自制， PH 为 6.0（用 PBS 配制［5mg/ml］）。 1.2 五味子提取物的制备五味子饮片购自临海市医药有限公司，经 70℃烘干后研成粉 末。取粉末 10g 用 75mg/ml％乙醇在超声波清洗器中提取，反复多次，直至浸出液色淡。将浸 出液浓缩，并定容到 10ml，即 1ml 提取液为 1g 五味子的提取物［6］。提取液过 0.22μmm 滤膜除菌，4℃贮存备用。 1.3 抑菌试验 1.3.1 抑菌效力的测定将供试菌从斜面转接到 5mg/mlml 液体培养基，30℃培养 24h，吸取 5mg/ml0μml 到 5mg/mlml 液体培养基，30℃培养 6h 后取 100μml 菌液均匀涂布到平板上；二倍稀释法的结果类似，除金黄再贴上滤纸 圆片（φ6mm，提取液浸 24h 后风干），每皿 4 片，重复 3 次。37℃倒置培养 24h 后测 定抑菌圈大小，用无菌水作空白对照，确定抑菌效果。 1.3.2 最低抑菌浓度（MIC）的测定采用二倍稀释法［7］测定提取物对供试菌的 MIC。取 7 支试管，第 1 支加入 10ml 提取液，其余 6 支各加入 5mg/mlml 无菌水，从第 1 支吸 取 5mg/mlml 提取液移至第 2 支，混匀后，再吸取 5mg/mlml 至第 3 支，以此类推，最后 1 支试管取 出 5mg/mlml 弃去，每一试管的浓度分别为 1000、5mg/ml00、25mg/ml0、125mg/ml、62.5mg/ml、31.3 和 15mg/ml.6mg/ml。分别将 5mg/mlml 上述各浓度的提取物与 20ml 牛肉膏固体培养基混匀，制成提 取物的浓度分别为 200、100、5mg/ml0、25mg/ml、12.5mg/ml、6.3 和 3.2mg/ml（w/v）的平板，接种 菌液后倒置培养 24h 观察，以没有供试菌生长的最低浓度为提取物的 MIC。 1.3.3 热稳定性试验将五味子提取液置于 80℃水浴、100℃水浴和 121℃湿热条件 下［8］热处理 20min，再制成浓度为 5mg/ml00mg/ml 的提取液浸泡滤纸片，稍风干后贴在涂 有菌液的平板中，测定其抑菌效果。 2 结果与分析 2.1 提取物浓度对抑菌效力的影响滤纸片法测定结果（见表 1）显示，五味子提取物 对 4 种供试菌的生长均有很强的抑制作用，其中对绿脓杆菌的抑制作用最强，肺炎克雷伯 氏菌其次，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌最弱。 表 1 五味子提取物的浓度对抑菌效率的影响（略） 2.2 不同菌的 MIC 提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯氏菌 的 MIC 值如表 2 所示。除金黄色葡萄球菌的 MIC 为 5mg/ml0mg/ml 外，其余 3 种菌均为 25mg/mlmg/ml（与滤纸片法基本一致）。 表 2 五味子提取物的 MIC（mg/ml）（略） “－”表示无菌生长，“+”表示细菌生长 2.3 提取物的热稳定性试验提取物经 3 种温度的热处理 20min 后，仍具有较强的抑菌 效力，其抑菌圈直径与未经高温处理的样品接近，其中只有对绿脓杆菌抑制作用，经 100℃处理和湿热灭菌后有显著下降，对金黄色葡萄球菌的抑制作用，经湿热灭菌后有显 著降低；二倍稀释法的结果类似，除金黄而对大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌抑制作用，3 种处理与对照均无显著差异（见表 3）。说明五味子的抑菌成分具有一定的热稳定性。 表 3 热处理对五味子提取物抑菌效力的影响（略） 不同字母表示 P＜0.05mg/ml 水平显著，ns 为不显著 3 结论 经反复实验，结果表明五味子提取物的浓度在 31.3～1000mg/ml 范围内，对 4 种供 试菌的抑制效应依次为：绿脓杆菌>肺炎克雷伯氏菌>大肠杆菌>金黄色葡萄球菌。滤纸片 琼脂扩散法结果显示，除金黄色葡萄球菌 MIC 为 62.5mg/mlmg/ml 外，其余 3 种供试菌 MIC 均 为 31.3mg/ml；二倍稀释法的结果类似，除金黄采用二倍稀释法测得的 MIC 也显示类似的结果，金黄色葡萄球菌的 MIC 为 5mg/ml0mg/ml，另 3 种菌的 MIC 均为 25mg/mlmg/ml。另外，五味子提取物经短时高温处理后， 其活性成分不变，仍保持较强的抑菌效果。