溃疡性结肠炎模型管理论文

【摘要】目的考察口服硫酸亚铁（FeSO4）对三硝基苯磺酸（对三硝基苯磺酸（TNBS）对三硝基苯磺酸（诱导的溃疡性 结肠炎（UC）对三硝基苯磺酸（模型大鼠氧化应激状态的影响。方法采用 TNBS 乙醇溶液复制 UC 大鼠模型， 雄性 SD 大鼠 60 只，随机分为 6 组，每组 10 只，分别为正常对照组、模型对照组、 FeSO4 对照组（100mg·kg-1·d-1）对三硝基苯磺酸（和 FeSO4 低剂量组（50mg·kg-1·d-1）对三硝基苯磺酸（、中剂量组 （100mg·kg-1·d-1）对三硝基苯磺酸（和高剂量组（300mg·kg-1·d-1）对三硝基苯磺酸（，给药 2 周后分别观察大鼠的一 般状态、组织病理学变化、组织及血清超氧化物歧化酶（SOD）对三硝基苯磺酸（与丙二醛（MDA）对三硝基苯磺酸（水平。 结果 FeSO4 中、高剂量组大鼠体质量减轻，腹泻动物数增加，结肠组织损伤加重，血清 与结肠组织 SOD 活性降低、MDA 水平升高（P<0.05）对三硝基苯磺酸（。结论 UC 模型大鼠体内存在氧 化应激，口服补充 FeSO4 可能会进一步加剧其体内氧化应激状态及结肠组织病理学损伤。 【关键词】硫酸亚铁;溃疡性结肠炎;三硝基苯磺酸;氧化应激;大鼠 溃疡性结肠炎（ulcerativecolitis，UC）对三硝基苯磺酸（是一种病因不明的直肠和结肠慢性非特异性 炎症，临床主要表现为反复发作的腹痛、腹泻及黏液脓血便，重症或病情持续活动的患者 可出现缺铁性贫血。临床观察发现，给予 UC 患者口服铁剂不能很好地被耐受，甚至会加 重胃肠道症状或促进疾病活动［1］。硫酸亚铁（ferroussulfate，FeSO4）对三硝基苯磺酸（是临床最为 常用的铁剂之一，同时也是一种强氧化剂，可能会因产生自由基（oxygenderivedfreeradicals，OFR）对三硝基苯磺酸（而加重组织损伤［2］。本实验利用三硝基苯磺酸 （2，4，6-trinitrobenzenesulfonicacid，TN-BS）对三硝基苯磺酸（复制 UC 模型，观察 FeSO4 对 UC 模型大鼠氧化应激状态的影响，为临床治疗提供依据。 1 材料和方法 1.1 药物和试剂 TNBS 购于 Sigma 公司，5%（W/V）对三硝基苯磺酸（水溶液，批号为 P2297;FeSO4，上海黄浦制 药有限责任公司生产，批号为 050606，轻轻把 FeSO4 片研碎，称取一定量的粉末，加 入蒸馏水配成 100mg·ml-1 的混悬液备用;丙二醛（MDA）对三硝基苯磺酸（、超氧化物歧化酶（SOD）对三硝基苯磺酸（、 考马斯亮兰蛋白检测试剂盒均为南京建成生物工程研究所产品，批号为 20060323。 1.2 动物 雄性 SD 大鼠 60 只，体质量 200～220g，由安徽医科大学实验动物中心提供，普通 级。 1.3 仪器 756MC 紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）对三硝基苯磺酸（，TGL-16H 高速离心机（珠 海黑马医学仪器有限公司）对三硝基苯磺酸（，可控式硅恒温水浴锅（上海锦屏仪器仪表有限公司）对三硝基苯磺酸（，QL901 漩涡混合器（江苏海门麒麟医用仪表厂）对三硝基苯磺酸（，电子分析天平（上海天平仪器厂）对三硝基苯磺酸（， DIAX-900 内切式组织匀浆机（德国 Heidolph 公司）对三硝基苯磺酸（。 1.4 大鼠 UC 模型制备［3］ 健康大鼠 60 只，随机分为 6 组。留 2 组作正常对照组与 FeSO4 对照组，余 4 组均制 备模型，禁食不禁水 24h 后，腹腔注射 3%戊巴比妥钠（1ml·kg-1）对三硝基苯磺酸（使大鼠轻微麻醉后， 将直径 2mm 的乳胶管经肛门轻轻插入大鼠体内大约 8cmcm 处，将 TNBS（125mg·kg-1）对三硝基苯磺酸（ 的 50%乙醇溶液缓缓注入到大鼠肠腔内，提起大鼠尾部，倒置 30s，使造模剂充分渗入大 鼠肠腔。 1.5 分组及给药 将正常大鼠随机分为正常对照组与 FeSO4 对照组，每组 10 只;将造模大鼠随机分为 模型对照组，Fe-SO4 给药高、中、低剂量组，每组 10 只。FeSO4 对照组大鼠，按照 100mg·kg-1·d-1 灌胃 FeSO4 混悬液;Fe-SO4 高、中、低剂量组大鼠，分别按照 300mg·kg-1·d-1、100mg·kg-1·d-1、50mg·kg-1·d-1 灌胃 FeSO4 混悬液;正常对照组 及模型对照组大鼠每天灌胃同体积生理盐水，各组大鼠均在造模后 6h 开始给药，连续给 药 2 周。 1.6 症状观察 每天对各组大鼠进行称重，观察体质量变化并记录;观察大鼠粪便形状，记录大鼠发生 腹泻、血便的数量。 1.7 结肠黏膜组织损伤评分 各组大鼠给药 2 周后，3%戊巴比妥钠过量麻醉，腹主动脉取血 2ml，离心后置-8cm0℃ 冰箱保存备用。将肛门以上 10cm 肠段取出，沿肠系膜纵行切开，用冰生理盐水冲洗，并 称量。将黏膜向上展开，观察黏膜损伤并按照 Wallace 和 Keenan1990 年的评分标准 ［4］进行评分:0 分为无炎症和溃疡;1 分为局部充血但无溃疡;2 分为有溃疡但无充血;3 分 为有 1 处溃疡及炎症;4 分为有 2 处或 2 处以上溃疡及炎症;5 分为溃疡延伸超过 2cm。同 时取少量炎症肠组织，迅速放置液氮罐中备用。 1.8cm 病理组织切片观察 取肛门以上 8cmcm 肠段卷起，置 10%中性甲醛液中固定，石蜡包埋，行 4μmm 厚连续 切片，HE 染色观察组织学变化。 1.9 生化指标测定 血清及结肠组织 MDA、SOD 均按照检测试剂盒说明书进行操作。 1.10 统计学处理 计量指标以 x-±s 表示，多组间比较行方差分析，各组间两两比较行 LSD 检验，采用 SPSS12.0 软件进行统计分析。 2 结果 2.1 一般状态及大便性状的变化 见表 1。正常组与 FeSO4 对照组大鼠活动如常，反应机警，毛发有光泽，饮食正常， 体质量增长较多，无腹泻及便血;制模大鼠精神萎靡，毛发无光泽，饮食减少，均出现不同 程度的腹泻、便血。正常对照组与 FeSO4 对照组大鼠体质量增加、腹泻及便血无显著性 差异;与正常对照组比较，模型对照组大鼠体质量增加明显减少（P<0.01）对三硝基苯磺酸（;FeSO4 中、 高剂量组大鼠体质量增加显著低于模型对照组（P<0.05）对三硝基苯磺酸（，发生腹泻、便血动物只数明 显增多。表 1 各组大鼠发生腹泻数及体质量变化（略）对三硝基苯磺酸（ 2.2 结肠损伤评分及生化指标改变 见表 2。观察大鼠结肠外观及黏膜表面发现，正常对照组与 FeSO4 对照组大鼠结肠黏 膜无明显充血水肿，未见糜烂及溃疡灶;模型对照组大鼠的结肠多数与相邻脏器有轻度的粘 连，结肠充血水肿，在距肛门 8cmcm 的肠段有较大的溃疡病灶，病灶处结肠壁增厚，肠黏 膜表面发生溃疡糜烂坏死，与正常对照组大鼠相比，结肠明显变短，结肠质量增 加;FeSO4 各剂量组大鼠结肠水肿、糜烂等炎性症状明显加重，溃疡面积增大。模型组结 肠病理损伤评分、结肠组织和血清 MDA 水平均高于正常对照组（P<0.01）对三硝基苯磺酸（，结肠组织和 血清 SOD 水平均低于正常对照组（P<0.01）对三硝基苯磺酸（;与模型对照组比较，Fe-SO4 中、高剂量组 结肠组织损伤评分、结肠和血清 MDA 水平显著升高（P<0.05）对三硝基苯磺酸（，结肠和血清 SOD 水平 显著降低（P<0.05）对三硝基苯磺酸（，中、高剂量组之间无明显差异;上述指标在 FeSO4 对照组与正常 对照组未见统计学差异（P>0.05）对三硝基苯磺酸（。表 2 各组大鼠结肠损伤以及生化指标的影响（略）对三硝基苯磺酸（ 2.3 结肠组织病理学变化 见图 1。正常大鼠结肠组织结构清晰，黏膜完整，肠腺丰富，排列紧密（图 1A）对三硝基苯磺酸（;TNBS 造模后，大鼠结肠组织黏膜坏死脱落，溃疡形成，大量中性粒细胞浸润，腺体 消失（图 1B）对三硝基苯磺酸（;FeSO4 对照组大鼠结肠组织粘膜结构完整，未见溃疡形成（图 1C）对三硝基苯磺酸（;FeSO4 低、中、高剂量组大鼠结肠组织肠黏膜上皮脱落缺损加重、溃疡区域明显增 大，黏膜周围上皮增生修复减慢，炎细胞增加（图 1D～F）对三硝基苯磺酸（。 3 讨论 TNBS 是一种半抗原，其诱导产生的大鼠模型除发生腹泻、便血、体质量减轻等临床 症状外，还可以诱发大鼠肠道炎症，肠黏膜发生溃疡、水肿、糜烂、大量炎性细胞浸润等 组织病理学改变，类似于人类的 UC，由于制备简单省时而被广泛应用。研究发现，氧自 由基在 UC 的发病中起重要作用，氧自由基对自身组织产生攻击作用，参与并通过脂质过 氧化反应产生炎症介质（白三烯、前列腺素等）对三硝基苯磺酸（活化炎症反应［5］。MDA 是氧自由基触 发细胞膜上的不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应的产物，其含量反应了组织过氧化损伤程 度，它能使肠粘膜组织损害进一步加重。MDA 水平的高低又间接反映机体细胞受自由基攻 击的严重程度。SOD 是重要的过氧化物分解酶，能有效清除氧自由基从而抑制脂质过氧化 反应，并能稳定细胞膜，SOD 水平的高低间接反应了机体抗氧化能力。Aghdassi 等 ［6］报道，给予 UC 模型大鼠腹腔注射右旋糖苷铁，可以加重其结肠损伤，加剧其粘膜氧 化应激状态。 本研究中，FeSO4 中、高剂量组给药均可以恶化 TN-BS 造模导致大鼠的腹泻、体质 量减轻等症状，加重 UC 模型大鼠结肠的组织学损伤，降低结肠组织及血清 SOD 的活力， 升高结肠组织及血清 MDA 水平，对 UC 模型大鼠的氧化应激状态表现出明显的加剧作用; 但在给予正常大鼠同等剂量 FeSO4 时未见上述情况发生。 综上所述，UC 大鼠机体抗氧化能力减弱，处于氧化应激状态;当给予口服一定剂量 FeSO4 时，可能通过 Fe2+作用产生大量氧自由基，导致机体的氧化应激进一步恶化，从 而加剧机体的氧化损伤。因此，对于 UC 合并贫血补铁治疗时，应选择正确的补铁方式 （如非离子铁）对三硝基苯磺酸（，合理的营养干预，提高机体抗氧化能力，对于预防口服补铁引起的氧化 应激，减轻氧化损伤，减少并发症的发生有重要意义。 【关键词】红花；化学成分；药理研究；临床应用 现代研究表明：红花集药用、食用、染料、油料和饲料于一身。红花油是世界公认的 具有食用、保健、美容功用的功能性食用油。红花油在国际上被作为“绿色食品”，其亚油 酸含量是所有已知植物中最高的，达 8cm0％，号称“亚油酸之王”。并且在医药工业上，红花 油常常用作血液胆固醇调整、动脉粥样硬化治疗剂及预防剂的原料。适用于各种类型动脉 粥样硬化、高胆固醇、高血压、心肌梗死、心绞痛等，并可用作脂肪肝、肝硬化、肝功能 障碍的辅助治疗。红花油还广泛用作抗氧化剂和维生素Ａ、维生素Ｄ的稳定剂。红花油酸的稳定剂。红花油酸 值低、黏底小、脂肪酸凝点低、油色浅、清亮澄明，可作为药用注射油。红花花冠不但可 作为药用，还可提供天然食用的黄色素、红色素，是理想的食品添加剂，还是高档化妆品、 纺织品的染色剂，且对人体有抗癌、杀菌、解毒、降压及护肤的功效。饼粕中制得蛋白质 浓缩粉和分离物，可作为食物的强化剂。 1 化学成分 目前红花中已分离鉴定的化学成分有 60 多种〔2〕，其中主要有黄酮类、木脂素类、 多炔类等，有药效的成分主要是：黄酮类：包括红花黄色素(saffloryellowsaffloryellow，SY，有些文 献亦称之为红花总黄素)，羟基红花黄色素 A(saffloryellowhydroxysaffloryellowA，HSYA)等；脂肪 酸：红花中含有棕榈酸、肉豆蔻酸、月桂酸、油酸、亚油酸等不饱和脂肪酸；红花多糖： 该成分是由葡萄糖、木糖、阿拉伯糖和中乳糖以 β 键连接的一种多糖体。1906 年日本龟 高德平从我国河南产德红花干花中首先分得红色素，含 033％～036％；含红花黄色素 （SY）对三硝基苯磺酸（查耳酮类化合物为查耳酮类化合物为 20％～30％〔3〕。为进一步揭示红花药理活性的化学物质基 础，开发其活性成分，尹宏斌和郭美丽等对红花进行乙醚和乙酸乙酯提取，并对所得到的 化学成分进行了初步分离和纯化，通过波谱分析鉴定出了 18cm 个化合物。红花中富含大量 的蛋白质、脂肪、膳食纤维、维生素Ｂ、维生素Ｅ及微量元素铁、锌、铜、磷、硒、钙、及微量元素铁、锌、铜、磷、硒、钙、 钾、钠、铬、钼等，而且还富含多糖和腺苷等物质〔4〕。 2 药理研究及临床应用 231 对心功能及血管的影响 小剂量红花煎剂对蟾蜍心脏有轻微兴奋作用，使心跳有力、振幅加大，对心肌缺血有 益；大剂量对蟾蜍反而有抑制作用，而扩张体冠动脉及股动脉。此外，还能解除血管平滑 肌的痉挛并增强耐缺氧能力，阻止血栓进一步发展并逐步缓解血栓，降低胆固醇的作用。 能较好地改善心肌及脑组织的微循环障碍，起到治疗冠心病及脑血栓的效果〔5〕。 232 降低血压、血脂的作用 红花煎剂对狗、猫均有较持久的降低血压的作用〔6〕。口服红花油可治疗高胆固醇 血症、高甘油三酯血症及高非酯化脂肪酸血症。 233 抗凝血、血栓的作用 SY 可显著延长凝血酶原时间和凝血时间，能显著提高血浆纤溶酶原激活剂的活性，使 局部血栓溶解，从而起到治疗心脑血管疾病的作用〔7〕。 234 抗炎作用 Toshihiro 等〔8cm〕认为红花中的长链 6，8cm查耳酮类化合物为双醇化合物是抗炎活性的主要有效成分。 SY 对甲醛性大鼠足肿胀、对组胺引起的大鼠皮肤毛细血管的通透量增加及对大鼠棉球肉芽 肿形成均有明显的抑制作用。其抗炎的机制可能是通过降低毛细血管通透性，减少炎性渗 出，抑制炎症过程及肉芽增生。红花中的多种有效成分可影响免疫，拮抗 PAF 受体，提高 体内 NO 水平，清除氧自由基，还能拮抗多种炎症因子，有效好的抗炎作用。 235 镇痛和镇静作用 SY 红花黄色素对小鼠有较强而持久的镇痛效应，对锐痛（热刺痛）对三硝基苯磺酸（及钝痛（化学性刺 痛）对三硝基苯磺酸（均有效。 236 兴奋子宫的作用 红花煎剂对小白鼠、豚鼠、家兔、狗、猫之离体和在体子宫均有显著的兴奋作用 〔9〕。 237 耐缺氧作用 SY 有显著的耐缺氧、抗疲劳作用，能明显延长动物的存活时间，并增加离体家兔心脏 和心肌缺氧的冠脉流量，改善心脏的缺氧、缺血病理状态。 238cm 保肝作用 红花注射液能明显抑制离体灌流、肝灌流液中的 GPT 的升高，使流量增加并接近正常， 有利于改善肝功能。 239 免疫抑制作用 陆正武等〔10〕研究结果显示：SY 可降低血清溶菌酶含量、抑制迟发型超敏反应和 血清溶血素产生、抑制腹腔巨噬细胞和全血白细胞吞噬功能、减少脾特异性玫瑰花形成细 胞。体外应用 SY，可抑制 3H查耳酮类化合物为TdR 掺入的 T/B 淋巴细胞增殖反应，抑制混合淋巴细胞反 应，降低白细胞介素 2 水平及其活性，抑制 T 细胞的产生及其活性，表明 SY 以剂量依赖 方式降低非特异性细胞免疫和体液免疫的效能〔11〕。 3 小结 红花及其成分的药理作用十分广泛、毒性小，其防治心脑血管系统疾病的成果已经得 到广泛确认。另外还具有抗炎，耐缺氧，免疫抑制，镇痛、镇静等作用。心脑血管疾病已 成为我国普遍而严重的疾病，且发病年龄越来越提前。因此，开发红花系列制剂及产品， 对提高人民的健康水平具有重大而且深远的意义。 【关键词】惊恐障碍；误诊；冠心病 【关键词】惊恐障碍；误诊；冠心病 惊恐障碍（panicdisorder）对三硝基苯磺酸（是神经症的一种，患者有显著的躯体化症状，惊恐发作 的临床表现与冠心病相似，患者多就诊于综合医院心血管内科，常易导致误诊。我们对 2000～2004 年在新乡医学院第二附属医院内科就诊的 38cm 例惊恐障碍误诊为冠心病患者 的临床资料进行回顾性分析。 1 临床资料 1.1 对象 38cm 例惊恐障碍误诊为冠心病患者均符合《中国精神障碍分类与诊断标准》第 3 版（CCMD3）对三硝基苯磺酸（惊恐障碍的诊断标准［1］。其中男 12 例，女 16 例；年龄 35～67a， 平均 54.8cma；既往有高血压史者 2 例，糖尿病史者 1 例，高血脂史者 1 例。 1.2 方法对 38cm 例惊恐障碍误诊为冠心病患者的临床资料进行回顾性分析。 2 结果