全自动生化试剂分析论文

【关键词】试剂排序 【摘要】目的探讨全自动生化分析仪的试剂的合理排序，以提高检测的准确度。方法 终点法、酶法在不同条件下测定结果的比较。结果试剂排序不合理影响结果准确度。结论 全自动生化分析仪的应用，应注意试剂的合理排列，以提高检测结果的准确性。 【关键词】试剂排序；误差；准确度 全自动生化分析仪的自净率是有限的，随着仪器使用周期延长及多种主客观因素的影 响，增加了试剂探针污染携带率，检测试剂排序不当，就可能出现不可逆转的误差，直接 影响检测结果的可靠性，很容易给临床造成无效数据，直接影响临床诊疗水平。通过长期 临床检测实践并参考相关文献内容，归纳出临床生化检测试剂的排列顺序，使同一份标本 在进行多项目检测时，尽量减小因试剂间相互干扰引起的误差，提高了批检测结果的准确 性。 1 材料与方法 1.1 检测标本 （1）待检血清：门诊、住院病人静脉血清；（2）质控血清：Roche 公司提供； （3）标准液：Roche 公司、北京利德曼生化技术有限公司提供。 1.2 检测试剂 Roche 原装及北京利德曼生化技术有限公司成品试剂盒。 1.3 检测仪器 RocheMODULAR2p 生化分析仪。 1.4 检测方法 各检测项目参数通过电脑输入，操作严格按照仪器使用手册及试剂说明进行。 2 结果与原则 2.1 试剂的排列顺序与方法学 见表 1。表 1 试剂的排列顺序与方法学（略） 2.2 试剂排序原则 2.2.1 按反应所需 pH （1）pH＜5 放在前。如 DBI、TBI、ALB；（2）pH≈7。如 ALT、AST、HBDH、BUN、CK-MB、CK、Cho、TG、HDL、Glu、UA；（3）pH＞ 8。如：γ-GT、ALP、LDH、Ca、GSP、Cr、TP。 2.2.2 按试剂所含成分 （1）缓冲液成分。如磷酸盐缓冲液，Tris 缓冲液；（2）辅酶种类。如 NADH、NADPH。 2.2.3 按检测反应的性质 （1）终点法，速率法，免疫比浊法；（2）双缩脲法测 TP 放于末位，利用双缩脲试 剂去蛋白去污的作用；（3）苦味酸试剂污染较重，且不易清除，尽量往后面放。 2.3 实验结果 2.3.1 终点法 见表 2、表 3。表 2pH 值的影响（略）表 3 反应物干扰（略） 2.3.2 速率法 见表 4、表 5。表 4pH 值的影响（略）表 5 反应物的影响（略） 3 结论与分析 3.1 结论 检测试剂合理有序排列，能减少探针携带误差，提高检测结果的准确度。 3.2 分析 3.2.1 终点反应 （1）pH 值改变：反应物之间，反应物缓冲液之间因携带误差而使 pH 值改变，反应 达不到终点。如双缩脲法测血清总蛋白，若其他条件相同，反应在碱性(pHpH 值 8～9)条件 时，蛋白肽键（―CONH）才都能与碱性铜溶液作用生成紫色反应，完全测出血清蛋白的 总量。若 pH＜8 时，总蛋白测定结果偏低，直接影响球蛋白、白蛋白/球蛋白的结果。 （2）缓冲液混入反应物：磷酸盐缓冲液混入无机磷试剂，会使检测结果偏高。应将含有 磷酸盐缓冲液的检测项目放于无机磷后检测。如 GOD-POP 法测 Glu。 3.2.2 速率法反应 （1）辅酶结构：辅酶参与反应时，其还原型、氧化型在 340nmnm 处曲线变化是相悖 的，由携带误差使上升反应或下降反应不彻底，导致无效值出现。（2）最适 pH 值：酶活 力测定在最适 pH 值时，反应最快，灵敏度最高，但是因为缓冲能力有限，可因携带误差 使酶促反应出现无效值。大多数酶反应 pH 值在 6.0nm～7.5 之间；ALP、γ-GT、LDH 须在 碱性条件下最适宜。 3.2.3 反应物间的作用 （1）CK 检测不应在 ALP、Ca 检测之间，因 CK 反应液中加入 EDTA-Na，能抑制 ALP 活性，结合 Ca 而使结果偏低。（2）ALT、AST 反应液中均含有 LDH，可干扰 LDH 检测结果。（3）Cho,Glu,UA,HBDH 用 PBS 缓冲液，干扰无机磷测定。（4）BUN 酶法 测定因谷氨酸脱氢酶（GLDH）消耗 NADH，不易放在底物 NADH 如 ALT、AST 项目前检 测。（5）同时测定一个项目的不同标本（血、尿、脑脊液等）：应将不同标本放入不同 通道测定。临床生化检测应注重试剂的合理排序，严格按规程操作，及时清除试剂瓶口处 结晶，以免导致试剂水平检测错误；对于稳定性差的试剂尽量减少与空气接触面积；有沉 淀、变浑浊及颜色异常改变的试剂及时更换，尽量清除无效值，提高生化检测的实效性； 为临床诊断发挥其应有的作用。