阳性污染现象分析论文

【关键词】全自动 全自动样品处理仪已经在各大血站广泛应用，笔者在应用中发现梅毒实验出现强阳性 标本污染后排孔现象，而手工复查后排孔标本的试管和小辫均为阴性，现报告如下。 1 材料与方法 1.1 标本来源 均为无偿献血者的血清标本。 1.2 试剂 梅毒试剂为上海科华生物工程有限公司和北京华大吉比爱生物技术有限公司生产。 1.3 仪器 TECANRSP 加样器。 1.4 方法 严格按照试剂说明书要求编辑加样程序，RSP 加样仪自动形成各项实验的前后加样顺 序，不可人工改动，每板检测 88 份标本。初检加样顺序为 HBsAg、抗抗-HCVHCV、抗ALT、抗抗-HCV HIV、抗TP（上海科华上海科华 ELISA），复检加样顺序为抗-HCVHIV、抗抗-HCVHCV、抗HBsAg、抗TP（上海科华北京吉 比爱 ELISA）、抗ALT，八根加样针先吸入第一排足量标本血清，依次加入五项实验酶标板 中，加样针内外冲洗两遍后，再加第二排标本，依次类推。加完样品后，酶标板放入 FAME 全自动分析系统进行检测。出现阳性后，对阳性标本再用手工复查小辫和试管。 收集出院污染 23 份标本，共 10 组，把这些标本按组混入正常标本中组成一板 88 份， 每组内各标本在酶标板中的前后顺序不变，用 TECANRSP 加样器每次只加一项梅毒实验， 分别做科华 TP 和吉比爱 TP 实验。 2 结果 2.110 组出现阳性污染现象标本的位置号及 OD 值 见表 1。从表 1 中可看出，每组标本都是两个或三个阳性前后相邻，而且大部分是前 排阳性标本 OD 值要强于后面的，手工复查试管和小辫，位置在前的阳性标本均为阳性， 位置在后的标本试管和小辫均为阴性。表 110 组出现阳性污染现象标本的位置号及 OD 值 （上海科华略） 2.210 组污染标本的试管结果 把 10 组出现污染的标本按每组原来各标本的先后顺序排列，放在一块酶标板中做梅 毒实验，用 RSP 加样仪单独只加一项梅毒实验酶标板，其位置号及结果见表 2。从表中可 看出，每组中第一个标本仍为阳性，第二个标本为阴性。表 210 组污染标本的试管结果 （上海科华略） 3 讨论 在四项常规实验中仅有梅毒实验出现前排孔阳性污染后排孔现象，而敏感度较高的 HBsAg 实验很少出现这种情况，而且新仪器出现污染现象的次数少，当仪器使用时间长后 出现的次数逐渐增多。由于加样仪设有系统气隙［1］，可排除通过蒸馏水污染的情况。 我们分析原因发现这与加样针保护膜被腐蚀有关。RSP 全自动加样仪采用的是永久性金属 加样器，仪器自动冲洗，针可长期使用，但仪器保养要求定期酸洗，使用时间久了会对加 样针表面的保护膜造成腐蚀，导致加样针内壁不光滑。当遇到标本抗凝不好时，血浆中的 纤维蛋白就会黏附在加样针内壁，不易冲洗干净，当加样针吸完阳性标本后再吸第二个标 本，由于梅毒实验在加样顺序中被排在最后一个或倒数第二个，血清在加样针中停留的时 间和在下降过程中经过的加样针长度相对其他三项 ELISA 实验都要长，因此被污染的机会 就要大。当单独只加一块梅毒实验板时，没有出现污染情况，证明了这一点。由此可见污 染现象与实验在加样程序中的先后顺序有关。在刚发现污染现象时，我们加大了酸洗的次 数和浸泡时间，发现污染的次数反而有所增加，分析原因，可能为酸对已被破坏的保护膜 腐蚀加重，从而导致污染现象的加重。通过长期的工作，我们认为各单位应根据自己的工 作量定期更换 RSP 加样仪的加样针，酸洗时酸的浓度不能太大，每周酸洗一次即可。 【关键词】试剂排序 【摘要】目的探讨全自动生化分析仪的试剂的合理排序，以提高检测的准确度。方法 终点法、抗酶法在不同条件下测定结果的比较。结果试剂排序不合理影响结果准确度。结论 全自动生化分析仪的应用，应注意试剂的合理排列，以提高检测结果的准确性。 【关键词】试剂排序；误差；准确度 全自动生化分析仪的自净率是有限的，随着仪器使用周期延长及多种主客观因素的影 响，增加了试剂探针污染携带率，检测试剂排序不当，就可能出现不可逆转的误差，直接 影响检测结果的可靠性，很容易给临床造成无效数据，直接影响临床诊疗水平。通过长期 临床检测实践并参考相关文献内容，归纳出临床生化检测试剂的排列顺序，使同一份标本 在进行多项目检测时，尽量减小因试剂间相互干扰引起的误差，提高了批检测结果的准确 性。 1 材料与方法 1.1 检测标本 （上海科华1）待检血清：门诊、抗住院病人静脉血清；（上海科华2）质控血清：Roche 公司提供； （上海科华3）标准液：Roche 公司、抗北京利德曼生化技术有限公司提供。 1.2 检测试剂 Roche 原装及北京利德曼生化技术有限公司成品试剂盒。 1.3 检测仪器 RocheMODULAR2p 生化分析仪。 1.4 检测方法 各检测项目参数通过电脑输入，操作严格按照仪器使用手册及试剂说明进行。 2 结果与原则 2.1 试剂的排列顺序与方法学 见表 1。表 1 试剂的排列顺序与方法学（上海科华略） 2.2 试剂排序原则 2.2.1 按反应所需 pH （上海科华1）pH＜5 放在前。如 DBI、抗TBI、抗ALB；（上海科华2）pH≈7。如 ALT、抗AST、抗HBDH、抗BUN、抗CK-HCVMB、抗CK、抗Cho、抗TG、抗HDL、抗Glu、抗UA；（上海科华3）pH＞ 8。如：γ-HCVGT、抗ALP、抗LDH、抗Ca、抗GSP、抗Cr、抗TP。 2.2.2 按试剂所含成分 （上海科华1）缓冲液成分。如磷酸盐缓冲液，Tris 缓冲液；（上海科华2）辅酶种类。如 NADH、抗NADPH。 2.2.3 按检测反应的性质 （上海科华1）终点法，速率法，免疫比浊法；（上海科华2）双缩脲法测 TP 放于末位，利用双缩脲试 剂去蛋白去污的作用；（上海科华3）苦味酸试剂污染较重，且不易清除，尽量往后面放。 2.3 实验结果 2.3.1 终点法 见表 2、抗表 3。表 2pH 值的影响（上海科华略）表 3 反应物干扰（上海科华略） 2.3.2 速率法 见表 4、抗表 5。表 4pH 值的影响（上海科华略）表 5 反应物的影响（上海科华略） 3 结论与分析 3.1 结论 检测试剂合理有序排列，能减少探针携带误差，提高检测结果的准确度。 3.2 分析 3.2.1 终点反应 （上海科华1）pH 值改变：反应物之间，反应物缓冲液之间因携带误差而使 pH 值改变，反应 达不到终点。如双缩脲法测血清总蛋白，若其他条件相同，反应在碱性(pHpH 值 8～9)条件 时，蛋白肽键（上海科华―CONH）才都能与碱性铜溶液作用生成紫色反应，完全测出血清蛋白的 总量。若 pH＜8 时，总蛋白测定结果偏低，直接影响球蛋白、抗白蛋白/球蛋白的结果。 （上海科华2）缓冲液混入反应物：磷酸盐缓冲液混入无机磷试剂，会使检测结果偏高。应将含有 磷酸盐缓冲液的检测项目放于无机磷后检测。如 GOD-HCVPOP 法测 Glu。 3.2.2 速率法反应 （上海科华1）辅酶结构：辅酶参与反应时，其还原型、抗氧化型在 340nm 处曲线变化是相悖 的，由携带误差使上升反应或下降反应不彻底，导致无效值出现。（上海科华2）最适 pH 值：酶活 力测定在最适 pH 值时，反应最快，灵敏度最高，但是因为缓冲能力有限，可因携带误差 使酶促反应出现无效值。大多数酶反应 pH 值在 6.0～7.5 之间；ALP、抗γ-HCVGT、抗LDH 须在 碱性条件下最适宜。 3.2.3 反应物间的作用 （上海科华1）CK 检测不应在 ALP、抗Ca 检测之间，因 CK 反应液中加入 EDTA-HCVNa，能抑制 ALP 活性，结合 Ca 而使结果偏低。（上海科华2）ALT、抗AST 反应液中均含有 LDH，可干扰 LDH 检测结果。（上海科华3）Cho,Glu,UA,HBDH 用 PBS 缓冲液，干扰无机磷测定。（上海科华4）BUN 酶法 测定因谷氨酸脱氢酶（上海科华GLDH）消耗 NADH，不易放在底物 NADH 如 ALT、抗AST 项目前检 测。（上海科华5）同时测定一个项目的不同标本（上海科华血、抗尿、抗脑脊液等）：应将不同标本放入不同 通道测定。临床生化检测应注重试剂的合理排序，严格按规程操作，及时清除试剂瓶口处 结晶，以免导致试剂水平检测错误；对于稳定性差的试剂尽量减少与空气接触面积；有沉 淀、抗变浑浊及颜色异常改变的试剂及时更换，尽量清除无效值，提高生化检测的实效性； 为临床诊断发挥其应有的作用。