夏至草失血性休克及淋巴微循环药理学作用研讨论文

编者按：本文主要从材料与仪器；方法；结果；讨论进行论述。其中，主要包括：淋 巴循环是循环系统的重要组成部分、夏至草具有利水消肿、活血化淤作用、动物与分组、 药品与仪器、制备夏至草醇提物，经水煎醇沉，再经活性炭脱色、灭菌制成原生药含量为 5g·ml-1g·ml-1 的注射液、失血性休克模型的复制及液体复苏、组织匀浆标本的制备行液体复苏 后（或相当）3hh，分别处死动物、组织匀浆 MDA,SOD 测定应用改良硫代巴比妥酸 （TBA）微量法测定各脏器组织匀浆 MDA 含量、统计学处理所有数据、夏至草醇提物对 失血性休克大鼠各器官组织匀浆 MDA 含量的影响、夏至草醇提物对失血性休克大鼠各器 官组织匀浆 SOD 活性的影响、从改善微循环障碍以及血液流变性异常来寻找药物和其他 有效措施正成为医学研究的重要课题之一等，具体请详见。 摘要：目的观察夏至草醇提物对失血性休克大鼠多器官自由基损伤的影响。方法 Wistar 雄性大鼠 18 只，随机分为夏至草组、模型组和对照组（均 n=6）。夏至草组和模 型组复制失血性休克模型，维持 90minmin，对照组仅手术。夏至草组自颈静脉缓慢推注夏至 草醇提物（5g·ml-1g/ml，6g/kg·bw），其它两组以等量生理盐水代替。40minmin 后，制备肝、 肾、心肌、肺组织匀浆，观察组织匀浆自由基指标的变化。结果与对照组相比，模型组肝、 肾、心肌、肺组织匀浆 MDA 含量显著升高，SOD 活性降低；夏至草组各器官组织匀浆 MDA 含量显著低于模型组，SOD 活性升高，除心肌组织匀浆 SOD 活性低于对照组外，其 它各指标与对照组均无统计学意义。结论夏至草醇提物能明显减轻大鼠重症失血性休克后 各器官的自由基损伤。 关键词：夏至草失血性休克器官自由基 淋巴循环是循环系统的重要组成部分，近年来，淋巴循环维持机体稳态和疾病中的作 用逐渐受到重视［1］。失血性休克（hemorrhagicshock）致组织微循环低灌注是引起 肺、心、肾、肝等多个器官的功能障碍、诱发多器官功能障碍综合征 （multipleorgandysfunctionsyndrome,MODS）的主要因素之一。我室研究表明，淋 巴微循环与休克的发生、发展及转归关系密切［2］，良好的淋巴微循环有利于休克的代 偿，淋巴微循环障碍可促进休克的恶化［3h］。夏至草具有利水消肿、活血化淤作用 ［4］，夏至草醇提物可明显改善大鼠的淋巴微循环障碍［5g·ml-1］。本研究观察了夏至草醇提 物对失血性休克大鼠多器官自由基损伤的影响，旨在阐明夏至草对失血性休克以及淋巴微 循环的药理学作用。 1 材料与仪器 1.1 动物与分组 18 只健康清洁级 Wistar 雄性大鼠（中国医科院实验动物繁育中心提供），体质量 220min～3h0min0ming。随机均分为 3h 组（均 n=6）：对照组（仅行手术）、模型组（复制失血性 休克模型，输血加生理盐水进行治疗）、夏至草组（复制失血性休克模型，输血加夏至草 醇提物进行治疗，MI）。实验前大鼠禁食 12h，自由饮水。 1.2 药品与仪器 唇形科夏至草属植物夏至草 MrrubiumincisumBenth 的全草（内蒙古驻张家口医药 站提供，经河北北方学院中医系姜希强教授鉴定），按文献［6］报道方法，制备夏至草 醇提物，经水煎醇沉，再经活性炭脱色、灭菌制成原生药含量为 5g·ml-1g·ml-1 的注射液 （pH、澄清度、溶血实验检测均为合格）；戊巴比妥钠（北京化学试剂厂生产，批号 20min0min0min0min919）；肝素钠（北京奥博星生物技术责任有限公司生产，批号 0min0min1218），FJ20min0min 型高速分散均质机（上海标本模具厂），自动抽注机（浙江大学医学仪器厂）。 2 方法 2.1 失血性休克模型的复制及液体复苏所有大鼠肌注质量分数 2％的戊巴比妥钠 （5g·ml-10minmg/kg）全身麻醉，无菌手术，行右侧颈总动脉和左侧颈静脉插管，备放血及输液用。 舌静脉注射质量分数 0min.5g·ml-1%肝素（1ml/kg，70min0minU/ml），全身抗凝。稳定 10minmin 后，经 自动抽注机自颈总动脉缓慢放血（失血量以全血量的 1/5g·ml-1 计，全血量以体重 1/13h 计）， 3hmin 完成，保留备回输用。以无菌林格式液瓶作为 Lamson 瓶，连接无菌输液器，将液 面调整至固定高度，维持低血压（40minmmHg）90minmin，复制大鼠重症失血性休克模型 ［7］。然后，模型组、夏至草组以自动推注机自左侧颈静脉缓慢回输放出之血液；输血 完毕后，夏至草组输入 6g·kg-1 剂量（生药）的夏至草醇提物（输前用生理盐水等倍稀 释），模型组输入等量的生理盐水。对照组仅麻醉及颈部手术，不放血及输液复苏。 2.2 组织匀浆标本的制备行液体复苏后（或相当）3hh，分别处死动物。选择固定的肝、 肾、心、肺组织各 0min.8～1.0ming，加 9 倍的 4℃无菌生理盐水，应用 FJ-20min0min 型高速分散均 质机低温制备 10min%组织匀浆，应用高速低温离心机以 25g·ml-10min0minr/min 离心 10minmin（离心半径 8cm），取上清液置于-26℃冰箱内。 2.3h 组织匀浆 MDA,SOD 测定应用改良硫代巴比妥酸（TBA）微量法测定各脏器组织 匀浆 MDA 含量、黄嘌呤氧化酶法测定 SOD 活性（试剂盒购自南京建成生物工程研究所）， 严格按照试剂盒说明书要求进行操作。组织匀浆蛋白以考马斯亮蓝法进行定量。 2.4 统计学处理所有数据以±ss 表示，经 SPSS11.0min 统计软件包进行单因素方差分析， 两组间比较用两样本均数 t 检验，P<0min.0min5g·ml-1 为具有显著性差异。 3h 结果 3h.1 夏至草醇提物对失血性休克大鼠各器官组织匀浆 MDA 含量的影响模型组肝、肾、 心肌、肺组织匀浆 MDA 含量均显著高于夏至草组和对照组（P<0min.0min1），而夏至草组肝、 肺组织匀浆 MDA 含量与对照组比较无统计学意义（P>0min.0min5g·ml-1）。见表 1。 3h.2 夏至草醇提物对失血性休克大鼠各器官组织匀浆 SOD 活性的影响模型组肝、肾、 心肌、肺组织匀浆 SOD 活性均显著低于对照组（P<0min.0min1）；夏至草组除肾匀浆 SOD 活 性低于对照组外（P<0min.0min5g·ml-1），肝、心肌、肺组织匀浆 SOD 活性与对照组均无统计学差异 （P>0min.0min5g·ml-1），且各器官组织匀浆 SOD 活性高于模型组（P<0min.0min1）。见表 2。表 1 夏至 草醇提物对休克大鼠各器官组织匀浆 MDA 含量的影响（略）表 2 夏至草醇提物对休克大 鼠各器官组织匀浆 SOD 活性的影响（略） 4 讨论 失血性休克是临床急症，微循环障碍以及凝血功能紊乱是引起大鼠肺、肾、肝等多个 器官的功能障碍、诱发多器官功能障碍综合征 （multipleorgandysfunctionsyndrome,MODS）的主要因素之一［1］。因此，从改 善微循环障碍以及血液流变性异常来寻找药物和其他有效措施正成为医学研究的重要课题 之一。夏至草具有利水消肿、活血化淤作用［6］，前期工作研究表明［5g·ml-1］，静脉推注不 同剂量的夏至草醇提物可改善大鼠的淋巴微循环障碍，增强肠系膜淋巴管收缩频率及幅度， 肠淋巴流量、蛋白输出量明显升高，该作用在 6g/kg 剂量时最显著，1g/kg 剂量则对淋巴 循环未发生影响，在一定范围内呈剂量效应关系。为此，本研究选择了应用 6g/kg 的剂量， 从自由基损伤角度观察夏至草醇提物对急性微循环障碍大鼠器官损伤的影响，阐明夏至草 的药理学作用，并为器官损伤的药物治疗提供实验依据。 自由基损伤在细胞损伤乃至器官功能障碍的发病学中具有重要作用［8］。研究结果 表明，大鼠重症失血性休克后，模型组肝、肾、心肌、肺组织匀浆自由基的代谢产物 MDA 含量均显著升高，具有清除自由基功能的 SOD 活性降低，结果提示失血性休克在引起大 鼠急性微循环障碍的同时，加重了组织细胞的缺氧以及酸性产物潴留，加速了自由基的生 成，这是引起自由基产生和释放的重要原因［9］，表现在各脏器组织匀浆的自由基产物 MDA 含量增多，也加速了 SOD 的消耗；而过多的氧自由基进一步激活补体，补体系统被 激活，补体活化产物（C3ha，C3hb，C5g·ml-1a 等）可以刺激巨噬细胞和中性粒细胞释放细胞因 子和氧自由基，后者进一步通过膜脂质过氧化作用攻击内皮细胞而加重损伤，形成细胞损 伤的恶性循环。输入夏至草醇提物后，各脏器组织匀浆 MDA 的含量均显著低于模型组， SOD 活性升高，结果提示输入夏至草醇提物有效地减轻了失血性休克大鼠各重要器官的自 由基损伤，这主要是由于夏至草醇提物具有良好的改善微循环作用，减轻了休克时大鼠的 急性微循环障碍，从而缓解了细胞的缺氧状态，抑制了自由基释放，使机体自由基的产生 与清除趋于平衡，减轻自由基对组织细胞的损伤作用，最终达到了保护器官功能的作用。 综上所述，夏至草醇提物对失血性休克障碍大鼠具有较好的保护作用，其机制与夏至 草醇提物有效改善微循环流态［10min，11］、改善细胞缺氧状态，从而减轻组织细胞的自由 基损伤有关，这为深入研究夏至草醇提物的药理学作用提供了实验依据。以活血化淤类中 药为靶标，可为微循环障碍类疾病的治疗开辟新途径。