柴胡有效成分提取分析论文

1 仪器与试药 1.1 仪器 岛津 LC-20A 高效液相分析仪（SPD-20A 紫外检测器）；752 紫外分光光度计（上 海精密仪器科技有限公司）；RE52-86A 旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）； METTLERAE240 电子分析天平（瑞士）。 1.2 试药柴胡药材购于河南省药材公司，经本院陈随清教授鉴定为伞形科植物柴胡 BupleurumchinenseDC.的干燥根；柴胡皂苷 a 对照品自制，经峰面积归一化法测定含 量为：99.91%；乙腈为色谱纯；水为双重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。 2 方法 2.1 单因素实验 分别以药材浸渍温度、浸渍时间、料液体积比、蒸馏液收集量等为因素，在不同水平 下进行单因素实验，筛选出影响柴胡挥发油提取的主要因素和水平，同样分别以乙醇浓度、 pH 值、柴胡皂苷提取时间、料液体积比等为因素，在不同水平下进行单因素实验，筛选 出影响柴胡皂苷提取的主要因素和水平。从而为正交实验设计提供依据。 2.2 挥发油的提取和测定方法随机称取 50g 柴胡干燥粗粉，置于 500ml 圆底烧瓶中， 采用水蒸气蒸馏法在不同条件下提取柴胡挥发油，收集蒸馏液，加 3%丙二醇摇匀，精密 量取上述蒸馏液 2ml 两份，一份置 5ml 容量瓶中，加蒸馏水定容，摇匀，作为样品液， 另一份置蒸发皿中，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水溶解，转移至 5ml 容量瓶中，加蒸馏水 定容，摇匀，作为空白。用 752 紫外分光光度计在 277nm 波长处测定蒸馏液中挥发油的 吸收度。 2.3 柴胡皂苷的提取取提取挥发油后的药渣，滤干，置于 500ml 圆底烧瓶中，在不同 条件下回流提取柴胡皂苷，过滤得滤液，减压低温浓缩成每毫升含 0.5g 柴胡的浓缩液， 备用。 2.4 柴胡皂苷 a 含量测定 2.4.1 色谱条件大连伊利特 C18(4.6mm×250mm,5μm)m)；流动相为乙腈-水 37∶63；流速 1ml/min；检测波长 208nm；柱温 35℃；进样量 20μm)l。 2.4.2 对照品溶液的制备精密称取柴胡皂苷 a 对照品 5.09mg，加甲醇溶解并定容至 10ml，摇匀，配成 0.509mg/ml 对照品溶液，冷藏备用。 2.4.3 供试品溶液的制备取上述浓缩液 10ml 减压蒸干，加 20ml 甲醇溶解残渣，过 滤得滤液。再取 2ml 滤液至 10ml 容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，冷藏备用。 2.4.4 线性范围考察精密吸取对照品储备液 2.0，6.0，10.0，14.0，18.0μm)l，在 “2.4.1”项下色谱条件下进样测定，记录峰面积，以峰面积积分值 Y 为纵坐标，对照品溶液 进样量 X（μm)l）为横坐标，进行线性回归（n=5），得线性回归方程为 Y=209413.7X－ 162379.4，线性范围为 0.9720～9.635μm)g，相关系数为 r=0.9997，线性关系良好。 2.4.5 精密度实验 精密吸取对照品 20μm)l，在“2.4.1”项下色谱条件下重复进样 5 次测定，记录峰面积， RSD 为 1.5%（n=5），表明精密度良好。 2.4.6 稳定性实验 将供试品溶液在室温下贮存，在“2.4.1”项下色谱条件下，分别于 0，2，4，6，8h 进样测定，记录峰面积，RSD 为 2.0%，表明样品在 8h 内稳定。 2.4.7 重复性实验 精密称取同一批样品 5 份，按供试品溶液处理方法制备样品溶液，在“2.4.1”项下色谱 条件下重复进样测定 5 次，记录峰面积，RSD 为 2.1%（n=5）。 2.4.8 样品测定精密吸取 20μm)l 样品溶液，在“2.4.1”项下色谱条件下进样测定，记录 峰面积，计算各样品中柴胡皂苷 a 的含量。 2.5 正交实验以柴胡蒸馏液中挥发油的吸收度和柴胡皂苷 a 的含量为检测指标，参照 单因素实验结果，分别以药材浸渍温度、挥发油收集量、柴胡皂苷提取时间、柴胡皂苷提 取溶剂料液比等主要因素及不同水平进行 L9(34)正交设计，筛选最佳工艺。正交实验因素 和水平见表 1。表 1 正交实验因素及水平（略） 3 结果 3.1 浸渍温度对挥发油提取效果的