苦玄参化学成分分析论文

1 化学成分 迄今为止，苦玄参中的化学成分主要集中在葫芦苦素(Cucurbitacin)Cucurbitacin))三萜成分和黄酮 类化合物的研究报道，国内外对苦玄参进行研究，发现其有效成分主要为四环三萜苷类。 三萜成分是苦玄参中最早被报道的一类化学成分，由于它们与葫芦科植物中的苦味素结构 相似，所以也有文献将其称为葫芦苦素(Cucurbitacin)cucurbitacin))［3］。成桂仁等自苦玄参药材中 共分离鉴定了 6 个葫芦苦素类苷元、1 个皂酮、10 个皂苷［4～17］和 3 个黄酮 ［18］。王力生等［19］从苦玄参乙醇提取物的较低极性部位中分离鉴定了 6 个化合物， 即 N-ben)zoylphen)ylalan)yl-L-phen)ylalan)in)olacetate①，1-羟基-7 羟甲基蒽醌②， 9，16-二羟基-10，12，14-三烯-十八碳酸③，5，7，4''''-三羟基黄酮④，β-谷甾醇⑤和 胡萝卜苷⑥。化合物①～③的 13C-NMR 数据为首次提供。邹节明等［20］用硅胶和 MCI 柱色谱分离纯化，得到 2 个不含呋喃环的葫芦苦素类化合物，分别鉴定为 11，24-二酮5，21-二烯葫芦素-3α-O-β-D-吡喃木糖基-16α-O-α-L-吡喃鼠李糖苷（脱氢拜俄尼苷）和 己降葫芦苦素 F，其中前者为新化合物，后者首次从苦玄参中分离得到。此外，他们还用 采用大孔树脂、硅胶柱色谱纯化得到一个新的三萜皂苷——11，22-三羰基-16α-羟基(Cucurbitacin)20s，24)-环氧苦味素-5，23-二烯-2β-O-β-D-吡喃葡糖苷（苦玄参苷 XI）［21］。现 将已从苦玄参中分离鉴定的三萜成分和黄酮类化合物结构整理如下。 1.1 四环三萜类苷及苷元 见表 1～2，图 1～6。表 1 四环三萜类苷及苷元结构式（略）表 2 四环三萜类苷及苷 元结构式（略）表 3 黄酮类化合物结构式（略） 2 定量分析 四环三萜苷类是苦玄参中主要活性成分，苦玄参 IA 和 IB 是其中的主要苷元，药理实 验证明，苦玄参干浸膏有明显的抗炎及镇痛作用［22］。2005 版《中国药典》正文中尚 未收载该品种，但有些以其为原料的中成药如妇炎净胶囊等已收载入《中国药典》（2000 年版及 2005 版）［23］。目前学者对苦玄参质量分析的研究主要集中在对苦玄参药材及 其中成药中苦玄参苷 IA 含量的测定方面。 2.1 高效液相色谱法陈勇等［24］用 RP-HPLC 法，采用 C18ODS2 柱 (Cucurbitacin)5μmm，4.6mm×250mm)，以乙腈-0.3％磷酸(Cucurbitacin)34∶66)为流动相，流速 lml／min)，柱温 为 25℃，检测波长为 264n)m，对不同产地、不同采收季节苦玄参中苦玄参苷 IA 进行含 量测定。结果显示，苦玄参苷 IA 进样量在 0．42～2．10μmg 的范围内呈良好的线性关系 （r=0.9999），平均回收率为 100.4％，RSD=1.64％(Cucurbitacin)n)=6)。实验证明不同产地苦玄 参中苦玄参苷Ⅰ A 的含量不同，苦玄参采收季节不同是影响其含量的一个因素。 邹节明等［25］将超滤技术用于苦玄参等药材有效成分的分离提取，以提取物中有效 成分（苦玄参苷Ⅰ A）的转移率、药液的膜通量和干膏（固体物）降低率 3 个考察指标作 为评价的标准，对苦玄参水提液进行超滤实验，用 HPLC 法测定苦玄参苷 IA 的含量，结果 在超滤前药液中的含量约为 0.28％，而超滤后在药液中能达到 0.22％以上，转移率能够 达到 80％以上，干膏降低率达到了 45％以上，取得了良好的效果。 郑成远等［26］采用 RP-HPLC 法测定湖南张家界、广西梧州、安徽亳州、江西樟树 和河南商丘 5 个产地苦玄参中苦玄参苷 IA 含量，色谱条件为：Kro-masilC-18 柱 (Cucurbitacin)4.6mm×250mm,5μmm)，柱温 35℃；流动相乙腈-0.5%醋酸=36∶64，流速 1.0ml/ min)，检测波长 264n)m。结果显示各地苦玄参药材中苦玄参苷Ⅰ A 的含量差异较大，安 徽亳州和江西樟树所产苦玄参药材中苦玄参苷Ⅰ A 的含量较高。 邹节明等［27］以 HPLC 法测定苦玄参苷 IA 的含量为指标，筛选适用的大孔吸附树 脂型号，评价树脂吸附与解吸工艺，结果表明苦玄参提取物精制适用 HPD50 号树脂，吸 附阶段泄漏点和饱和点分别在 1.5 和 l1 左右，解吸阶段的适用乙醇浓度分别为 50%，苦 玄参苷 IA 含量可提高 4 倍以上。 甄汉深等［28］采用 Agilen)tZORBAXEclipseXDBC8 色谱柱 (Cucurbitacin)4.6mm×150mm，5μmm)，以乙腈-0.5%醋酸(Cucurbitacin)32∶68)为流动相，流速 1ml·min)-1，检 测波长 264n)m，测定广西两种不同产地种植的苦玄参药材的茎、叶中苦玄参苷Ⅰ A 的含 量。实验结果显示，苦玄参苷Ⅰ A 在 2.28～11.4μmg 范围内线性良好，平均加样回收率为 101.1%，RSD=2.4%(Cucurbitacin)n)=5)。两种产地叶中苦玄参苷Ⅰ A 均明显高于茎。 胡慧玲等［29］用 KromasilODS-1HPLC 柱 C18(Cucurbitacin)250mm×4.6mm,5μmm)，以乙 腈-水-冰醋酸(Cucurbitacin)38∶62∶0.5)为流动相，流速 1.0ml/min)，柱温 40℃，检测波长 264n)m， 对妇炎宁片中的苦玄参苷 IA 进行了含量测定。结果为苦玄参苷 IA 在线性范围为 0.1～ 0.6μmg 范围内线性良好(Cucurbitacin)r=0.9995)，平均回收率为 101.22%，RSD=2.16%(Cucurbitacin)n)=5)，10 批样品的平均测定结果为 3.44mg/g。 2.2 薄层扫描法邹节明等［30］采用薄层扫描法测定不同产地苦玄参的根、茎、叶中 苦玄参苷Ⅰ A 和Ⅰ B 的含量，以甲醇为溶媒，超声提取苦玄参各药用部位，提取物经大孔 树脂 D101 精制后，点于含 1%CMC-Na 的硅胶 GF254 板上，以氯仿-甲醇-水(Cucurbitacin)4∶1∶0.1) 为展开剂展开后，用 CAMAGTLCⅢ 型线性扫描仪测定，检测波长为 268n)m，狭缝尺寸为 8mm×0．6mm。结果显示，苦玄参苷Ⅰ A 的点样量在 1.1～5.4μmg，苦玄参苷Ⅰ B 在 1.0～6.2μmg 范围内与各自峰面积呈良好的线性关系，r 分别为 0.9990 和 0.9992，加样 回收率分别为 98.3%和 97.5%；在同一产地不同药用部位中，苦玄参苷Ⅰ A 和 IB 的含量： 叶中最高，茎中次之，根中最低；在同一药用部位中，叶中苦玄参苷Ⅰ A 含量高于Ⅰ B， 根和茎中苦玄参苷Ⅰ B 含量高于Ⅰ A。 陈勇［31］采用双波长薄层扫描法分别测定炎肿化毒片、炎见宁片和妇炎净胶囊中苦 玄参苷Ⅰ A 的含量，用 5%CMC-Na 的硅胶 GF254 板，展开剂为氯仿∶甲醇=4∶1，在紫外 灯下（254n)m）检视定位，进行光谱扫描，扫描条件为： λS=270nmS=270n)m，λS=270nmR=350n)m，SX=3，反射式锯齿形扫描。结果表明苦玄参苷Ⅰ A 的点样 量在 2.4～7.2μmg 间呈良好的线性关系，平均加样回收率为 97.9%，RSD=1.8% (Cucurbitacin)n)=5)。蒋明廉［32］用同样的方法测定苦玄参中苦玄参苷Ⅰ A 的含量，从测定结果来看， 与成桂仁［12］报道从苦玄参中提取分离苦玄参苷Ⅰ A 和Ⅰ B 的收得率 0.25%和 0.17% 基本一致。 2.3 其他方法王力生等［33］以 TLC 为检测手段，考察 D-101 大孔吸附树脂对苦玄 参总皂苷的吸附和洗脱条件，并采用分光光度法测定提取物中苦玄参皂苷的含量。结果 D101 大孔吸附树脂可以把苦玄参总皂苷含量由浸膏中的 8.7%提高至 27.3%，增加 20% 乙醇洗脱操作可进一步提高至 52.1%；苦玄参总皂苷的最大吸收波长为 261n)m，与苦玄 参苷Ⅰ A 一致。苦玄参苷Ⅰ A 在 4.56～91.2μmg/ml 与吸光度呈良好的线性关系，平均回 收率为 96.3%。结果表明，D-101 大孔吸附树脂能有效富集并纯化苦玄参总皂苷；分光 光度法测定苦玄参总皂苷含量具有快捷、准确的特点。 3 结语 苦玄参所含化学成分复杂，具有多种生物活性。本文依据皂苷元母核将其归纳分类， 为进一步探讨苦玄参的化学成分和构效关系研究提供了方便和依据。 苦玄参苷 IA 是苦玄参三萜部位中含量最高的成分，在干植物中的含量约为 0.25%［12］，有中枢抑制作用和抗补体作用［3］，是苦玄参的主要活性成分，因此苦 玄参定量分析方面报道最多的是苦玄参苷Ⅰ A 的含量测定，各地苦玄参药材中苦玄参苷 Ⅰ A 的含量差异较大，含量的差异与很多因素有关，与采收的季节也有关系，因此，今后 可对苦玄参的最佳采收期及最适加工方法进行进一步考究。 苦玄参苷Ⅰ A 的含量测定方法比较发现，薄层扫描法测定含量时易出现斑点不清、拖 尾等现象。高效液相色谱法集分离和测定为一体，简便、稳定、重复性好，易与其他干扰 成分分开，可作为苦玄参质量控制的研究方法。