大豆发酵制品中总异黄酮含量测定论文

1 器材与方法 1.1 材料 正己烷（A.R），天津化学试剂厂产品；无水乙醇（天津化学试剂厂产品；无水乙醇（A.R），天津化学试剂厂产品；无水乙醇（天津化学试剂厂产品；氢 氧化钠（A.R），天津化学试剂厂产品；无水乙醇（河北辛集化工厂产品；染料木素对照品（含量约为 98%），天津化学试剂厂产品；无水乙醇（Sigma 公司 产品。淡豆豉（SemenSojaePraeparatum）购自石家庄市乐仁堂药店，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（经河北医科大 学中医学院药用植物教研室严玉平副教授鉴定为正品，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（留样凭证存放于河北医科大学中医 学院药用植物教研室。 1.2 仪器 λ-2 紫外分光光度仪（美国 PE 公司）、RE-52A 旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）、 BS223S 电子天平（德国赛多利斯公司）。 1.3 样品溶液制备［6］取符合实验要求的淡豆豉，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（粉碎，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（过 10 目筛，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（精密称取 5g。加正己烷 40ml 超声振荡脱脂 25min，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（弃去正己烷，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（重复 1 次。残渣加入 50ml70% 乙醇溶液，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（85℃热回流提取 3 次，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（1h/次，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（收集提取液。减压回收溶剂至干，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（加 NaOH（0.01mol/L）溶液溶解，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（定容为 250ml，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（作为供试品液。精密移取供试品液 2ml 置 100ml 量瓶中，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（加 NaOH（0.01mol/L）溶液定容至刻度，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（摇匀。平行操作 3 份。 1.4 标准曲线绘制精密称取 120℃干燥至恒重的染料木素 10.2mg，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（置 50ml 容量瓶 中，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（加 0.01mol/LNaOH 溶液定容至刻度，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（摇匀。精密吸取此溶液 0.5，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（1.0，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（2.0，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（3.0，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（4.0ml 分别置于 100ml 容量瓶中，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（加 0.01mol/LNaOH 定容至刻 度，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（摇匀，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（以 0.01mol/LNaOH 溶液为空白溶液，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（在 271nm 处测吸收度。以吸收度 （Y）为纵坐标，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（染料木素浓度(μg/ml)μg/ml)g/ml)（X）为横坐标绘制标准曲线（见图 1），天津化学试剂厂产品；无水乙醇（结果表 明染料木素浓度与吸收度呈良好线性关系。回归方程为 Y=0.1698X+0.0059，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（r=1.0000。 1.5 样品测定以 0.01mol/LNaOH 溶液为空白溶液，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（在 271nm 处测吸收度。每个样 品重复测定 2 次。 2 结果 2.1 溶剂的选择从染料木素的结构特点及理化性质可知，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（其具有强疏水性，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（难溶于水、 稀盐酸等，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（微溶于甲醇、乙醇。选择上述溶液作为染料木素的溶出介质不适宜。根据染料 木素及异黄酮类化合物的理化特性（结构中含有酚羟基呈现弱酸性，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（易溶于稀碱），天津化学试剂厂产品；无水乙醇（选择 稀氢氧化钠（0.01mol/L）溶液溶解大豆提取物中异黄酮类化合物，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（是简便可行的。 2.2 波长选择由对照品紫外扫描图谱(μg/ml)图 2)可得知，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（最大吸收峰都在 271nm，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（且最大 吸收峰周围干扰较小，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（我们就把 271nm 作为测定波长。 2.3 线性关系考察本法中，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（染料木素在 0.51～4.08μg/ml)g/ml 范围呈良好线性关系(μg/ml)见图 1)，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（相关系数 r=1.0000，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（测定上限可达 8.0μg/ml)g/ml，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（下限为 0.2μg/ml)g/ml。 2.4 回收率实验精密吸取标准品溶液 25，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（50，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（25，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（50，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（25μg/ml)l，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（分别置 5 只 5ml 容 量瓶中,再分别精密加入供试液 150μg/ml)l，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（0.01mol/LNaOH 定容至刻度，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（摇匀，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（按“1.3.3” 项操作，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（计算回收率，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（结果平均回收率为 99.3%，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（RSD 为 2.1%。见表 1。 2.5 精密度实验精密吸取标准品溶液 100μg/ml)l，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（分别置 5 只 5ml 容量瓶中,加 0.01mol/ LNaOH 定容至刻度，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（摇匀，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（按“1.4”项操作，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（测定吸收度，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（RSD 为 1.9%。 2.6 样品测定取已制备好的 3 份样品溶液测定，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（每份样品按测定程序测定 2 次，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（以染 料木素计量大豆异黄酮含量，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（所得结果见表 2。表 1 加样回收率（略）表 2 样品中大豆异 黄酮含量（略） 3 讨论 淡豆豉为常用药食同源物质，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（其最新报道有降血糖、血脂的作用，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（但有关淡豆豉中总 异黄酮的质量分析报道较少［7］。我们经过研究对比，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（确定用一种简单易行的紫外分光 光度法对其主要有效成分—异黄酮类成分进行测定，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（建立了一种淡豆豉的质量控制标准。 本法简便、快速、选择性好、线性范围宽、重复性好、能全面反映样品中大豆异黄酮 的总含量，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（适用于淡豆豉中总异黄酮的质量检测和测定，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（尤其是生产过程的质量控制。 采用稀碱溶液溶解异黄酮，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（增加了异黄酮的溶解度，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（使得淡豆豉中总异黄酮含量测定 准确度大大提高。同时由于淡豆豉中异黄酮与碱发生反应，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（使得其最大吸收波长发生红移，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（ 紫外吸收峰远离末端吸收，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（也提高了淡豆豉中总异黄酮含量测定准确度。