水蛭对热刺激后血管壁论文

【摘要目的探索水蛭对热刺激后动脉管壁增厚的干预效果。方法使用局部热刺激兔耳， 温度为(43±0.5)℃，每次 3h，天天 1 次，共做 3 次。模型组分别于造模后 1 周、2 周、 4 周时取材；水蛭组实验前 3 天及实验后一直用水蛭灌胃，0.3g/(kg·d)，分别于造模后 1 周、2 周及 4 周时取材。采用光学显微镜及图像分析仪进行形态学观察。结果模型组热刺 激后动脉中膜成分增殖并突入血管腔内，造成管腔变狭。造模处平滑肌细胞层数及中膜厚 度增加。水蛭组和模型组相比，增殖程度减小，各项观测指标均有不同程度的变化，但统 计学分析差异无显著性。结论 0.3g/(kg·d)剂量的水蛭对热刺激后血管壁增厚的干预效果 不理想。 【动脉；狭窄；水蛭；形态学 【AbstractObjectiveThisstudywasdesignedtobuildanewexperimentalmodelofpr oliferationofarterialsmoothmusclecells(SMC).MethodsThecentralarteryoftherab bitearwasheatedby(43±0.5)℃for3hoursaday，andforthreedays.Weexaminedt hemorphologicalchangesofthearterialsbylightmicroscopyanddigitalplanimetry ，3days，1week，2weeks，and4weeksafterexperiment.Hirudopowderwasadm inistered3daysbeforeheating，andrabbitswereexamined4weeksafterexperime nt.ResultsAstheincreasingofthetime，theproliferationofSMCincreasedandexten dedtothelumineoftheartery，buttheinternalelasticmembranewasnotdisrupted. So，theluminastenosisoccuerd.HirudopowdercausedtheproliferationofSMCtode crease.Althoughtheluminabecomesmaller，theeffectisnotsignificant.Conclusio nFromtheresearchresultsabove，wecandrawtheconclusionthatheatcaninducea rterialSMCtoproliferate，andthendecreasetheareaofthearterylumina.Themodel isavailable.HeatcanactivateautocrinegrowthofthelocalSMC，andalterthestruct uresandfunctionofvascularwall.originatedfromthehost.Hirudopowderhasaslight effectondecreacingSMCproliferaton，becauseitmaynotplayapartintherelavent mechanismofheat. 【Keywordsartery；stenosis；Hirudopowder；morphology 水蛭是应用已久的活血祛瘀类药物，味咸苦，性平、有小毒，归肝经。其主要功效为 破血逐瘀。临床广泛应用于心脑血栓性疾病及瘀血经闭的治疗中，亦可用于治疗生殖系统 疾病如精不液化等。本实验探究水蛭对家兔热刺激后血管壁增厚的干预功能，现报告如下。 1 实验材料 1.1 实验动物中国家兔 48 只，体重 1.8～2.2kg，雄性，由湖南中医学院实验动物中 心提供。合格证号为湘医动字第 20-003 号。 1.2 药物和试剂水蛭购自湖南长沙九芝堂药店，产地为山东，宽体金线蛭，生产日期 为 2005 年 1 月。 1.3 仪器 GSY 型恒温水浴锅(北京医疗器械厂)；数字彩色图像分析仪(美国 Optimas 公司)；OlympusBH—2 显微镜（日本 Olympus 公司产）；局部加热器（湖南中医学院 组织胚胎学实验室）。 2 实验方法 2.1 实验动物分组 48 只家兔随机分为左耳模型组和右耳模型组，每组 24 只。一只耳 朵造模，另一只耳朵为假处理。再将上述两组动物分别随机纳入 6 组，使每组含有 8 只动 物，即左、右耳造模各 4 只。模型组分为 3 个，水蛭灌胃组为 3 个，分别在热刺激后 3 天、 1 周、2 周、4 周时处死取材。 2.2 造模及灌胃法的实施从耳根部起至耳尖部，测量兔耳中心动脉的长度，选取中心 2cm 的长度作为受试部位。将加热器置于受试部位，以胶布固定，使之紧贴皮肤。加热器 为 0.3mm 厚的铁皮制成的小圆匣，直径 2cm，高 1.3cm；侧面开 2 个小孔，分别接入 水管和出水管。热水流速为 156～160ml/min，流入前温度为(43±0.5)℃，流出后温度 为 41℃～42℃。假处理组仅给予同样的器具操做，温度和室温一致，时间均为每次 3h， 天天 1 次，连续做 3 次。水蛭组热刺激前 3 天及热刺激后一直给予水蛭粉灌胃。0.3g/ (kg·d)，分 2 次于上、下午灌胃。每次剂量溶于 3ml 蒸馏水中，灌入后再灌 2ml 蒸馏水， 以使胃管壁不残留药末。所有动物均以普通兔饲料喂养。 2.3 标本的采集及处理按预定日期空气栓塞法处死动物，石蜡切片法，用地依红染弹 性纤维，再用 Harris 苏木素染细胞核，最后用伊红染胶原纤维及细胞质。 2.4 观测指标均为光镜下观测［1］(1)内弹性膜的完整性摘要：在 10×40 倍放大的 条件下，观察所有切片内弹性膜是否有断裂。(2)血管腔面积的测定摘要：10×10 倍放大 条件下，使用图像分析仪进行测量，标本选取及计算法同上。(3)中膜厚度的测量摘要： 10×40 倍放大条件下，线型测微尺进行测量（每小格为 25μmm）。选取中膜最厚处为中 心点，然后从中心点开始，将动脉横截面等距离分成五段。分别测出 5 个均分点（包含中 心点在内）处的中膜厚度，取均值。标本选取及计算法同上。(4)血管壁平滑肌细胞层的计 数摘要：10×10 倍放大条件下，在上述 5 个点分别测量平滑肌细胞层数，取均值。标本 选取及计算法同上。 3 统计学方法 所有数据以均数±标准差(x±s)表示。多组均数比较进行方差齐性检查，方差齐采用 方差分析、方差不齐采用 tD 检验，两组均数比较采用 t 检验。所有数据经 SAS6.12 软件 进行处理。 4 结果 4.1 一般情况观察实验后模型组兔耳局部轻度发红，持续 20～35min，对照组无变化。 所有动物耳部皮肤无溃烂及肿胀。兔子毛发有光泽，活动、进食及二便均未见异常。无生 病及中途死亡发生。 4.2 血管相关性指标的观察结果见表 1、2、3。模型组中膜有不同程度的增生。所有 受检标本均未见内弹性膜断裂。热刺激后 3 天可见局部内弹性膜厚度，向管腔内突入；1 周后，模型组的局部中膜增厚，增生物主要由 VSMC 及胶原纤维构成。2 周、4 周时局部 中膜继续增厚，管腔进一步缩小。 表 1 家兔不同时间管腔面积测量（×10-2mm2，x±s） 注摘要：和同期假处理组相比，*P%26lt;0.05P%26lt;0.05；和模型组 28 天相比，＃P %26lt;0.05；和水蛭组 3 天相比，ΔP%26lt;0.05P%26lt;0.05；和水蛭对照组 28 天相比，※P %26lt;0.05 表 2 家兔不同时间血管中膜厚度测量（μmm，x±s） 注摘要：和同期假处理组相比，*P%26lt;0.05P%26lt;0.05；和模型组 28 天相比，＃P %26lt;0.05；和水蛭组 3 天相比，ΔP%26lt;0.05P%26lt;0.05；和水蛭对照组 28 天相比，※P %26lt;0.05 模型组和同期假处理组相比，管腔明显缩窄（P%26lt;0.05）。模型组 4 周后管腔面 积明显%26lt;3、7 天组，见表 1；假处理组内弹性膜光滑完整，局部中膜无增厚，管腔面 积间相比差异无显著性，见表 1。 模型组中膜厚度随动物热刺激后生存时间的延长而增加，提示损伤后管壁的厚度在一 定时间内有增加的趋向见表 2。平滑肌细胞的层数随动物热刺激后生存时间延长而增加， 提示热刺激后平滑肌细胞在 28 天内始终保持增殖状态，见表 3。 表 3 家兔不同时间血管壁平滑肌层数测量（层/管腔，x±s） 注摘要：和同期假处理组相比，*P%26lt;0.05P%26lt;0.05；和模型组 28 天相比，＃P %26lt;0.05；和模型组 14 天相比，ΔP%26lt;0.05P%26lt;0.05；和水蛭对照组 28 天相比，※P %26lt;0.05；和水蛭组 3 天相比，▲P%26lt;0.05 水蛭组各项指标的变化趋向和模型组类似，但变化幅度相对较小，和同期模型组相比， 统计学差异无显著性。提示 0.3g/kg 水蛭对模型的干预效果不理想。 5 讨论 水蛭是应用已久的活血祛瘀类药物，味咸苦、性平、有小毒，归肝经。其主要功效为 破血逐瘀，并可堕胎。临床广泛应用于心脑血栓性疾病及瘀血经闭的治疗中，亦可用于治 疗生殖系统疾病如精不液化等。 本探究使用兔耳皮肤局部热刺激法，造成兔耳中心动脉中膜平滑肌细胞增殖，管腔狭 窄。水蛭对此病理变化的干预效果较差，除了药物剂量和制剂的新问题，可能和其所含成 分有关。水蛭分离出的活性成分大致可分为两大类摘要：一类直接功能于凝血系统的成分， 包括凝血酶抑制剂，以及其他抑制血液凝固的物质，如水蛭素(Hirudin)；第二类是其他蛋 白酶抑制剂及其他活性成分，如溶纤素(Hement—erin)等［2］。水蛭素是水蛭的主要活 性成分，是目前已知的最强的凝血酶抑制剂。水蛭素可和凝血酶形成复合物，阻断凝血酶 的蛋白质水解功能，不仅阻止了纤维蛋白凝块形成，而且阻止凝血酶催化的其他凝血反应 摘要：如对凝血因子Ⅴ、Ⅷ的激活以及凝血酶诱导的血小板聚集和释放。因此，水蛭的主的激活以及凝血酶诱导的血小板聚集和释放。因此，水蛭的主 要功能为抗血栓，表现为大大降低血小板和纤维蛋白形成的凝块，而不改变血小板数量和 纤维蛋白含量［3］。 家兔股动脉形成粥样斑块后，应用气囊法形成术后，立即给予肝素和水蛭素，结果水 蛭素组的再狭窄明显降低，疗效优于肝素组，表明水蛭具有一定的抗平滑肌细胞增殖的功 能，但是该功能的发挥机理可能和其抗血栓功能关系密切。由于热刺激后局部血管壁未见 血小板聚积和血栓形成，所以我们推测管壁的增厚和血小板和血栓的关系不大。热应激激 活血管局部的自/旁分泌性增殖。探究表明摘要：急性热应激能使血中血管紧张素Ⅱ明显升明显升 高［4］。由于血管平滑肌细胞具有分泌血管紧张素原的功能，且含有血管紧张素转换酶， 所以我们推测热刺激可使受热局部平滑肌细胞分泌过多的血管紧张素，通过自／旁分泌途 径直接功能于平滑肌细胞；也可通过间接功能激活其他生长因子，如 PDGF-A、ET－ 1、FGF 等，共同功能于平滑肌，促进其增殖及合成基质［5］。此外，当局部热刺激时， 滋养血管平滑肌交感神经受热刺激，紧张度降低［5］，可以引起滋养血管扩张，血流量 增加［6］。同时，由于所支配的动脉受热扩张，局部血管内压力升高，平滑肌舒张，动 脉壁变薄，会使滋养血管受到中膜和外膜的挤压功能而扭曲［7］，管腔缩窄，血流减慢， 血流量降低。后者的功能抵消并大于前者的功能，故使中膜血液供给量降低，造成中膜缺 血缺氧。缺氧可以诱发平滑肌增殖［8］，缺血可以促进新内膜的产生。由于水蛭并不能 功能于上述病理环节，因此对热刺激后引起的动脉管壁狭窄的干预功能较差。