柿叶总黄酮提取工艺探究论文

1 仪器与试药 １．１仪器ＵＶ－２２０１紫外可见分光光度计（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速倾斜式高速 万能粉碎机（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速天津市泰斯特仪器有限公司）；倾斜式高速ＰＢ２０３－Ｎ电子精密天平（Ｍｅｔｔｌ电子精密天平（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速Ｍｅｔｔｌ ｅｒＴｏｌｅｄｏ仪器上海有限公司）；倾斜式高速ＡＪ１５０Ｌ电子精密天平（Ｍｅｔｔｌｅｒｉ电子精密天平（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速Ｍｅｔｔｌｅｒｉ ｎＳｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）。 １．２试药实验用药材采自北京市昌平区，落叶晾干，经鉴定为柿树科柿属柿 DiospyrosKaki Ｌ电子精密天平（Ｍｅｔｔｌｅｒｉ．ｆ．；倾斜式高速芦丁对照品（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速中国药品生物制品检定所，批号：０８０－９３ ０３）；倾斜式高速ＡｌＣｌ３·６Ｈ２Ｏ等均为分析纯。等均为分析纯。 2 方法与结果 ２．１因素水平表乙醇作为提取溶剂，对乙醇浓度、溶剂量及提取次数和时间３种因 素进行考察，每种因素分为３个水平，结果见表１。 2.2 供试品溶液的制备精密称取柿叶最粗粉（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速１０～２２目之间）１ｇ共９份，按照共９份，按照 表２Ｌ电子精密天平（Ｍｅｔｔｌｅｒｉ９（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速３４）正交实验设计方案，用对应浓度和体积的乙醇回流提取相应次数和时间。 回流结束后合并提取液，放冷，抽滤，滤液转移至１００ｍｌ或２００ｍｌ量瓶中，分别 以其相应的提取溶剂定容，过微孔滤膜（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速０．４５ μ ｍ），作为供试品溶液。 表 1 正交设计因素水平（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速略） 表 2L9（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速34）正交实验设计及结果分析（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速略） 2.3 对照品溶液的制备精密称取１２０℃干燥至恒重的芦丁对照品０．０８２５ｇ共９份，按照于 １００ｍｌ量瓶中，７０％乙醇超声溶解，定容至刻度，得芦丁标准液０．８２５ｍｇ共９份，按照·ｍ ｌ－１。 2.4 显色试剂及测定波长的选择Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＮＯ２－ＮａＯＨ显色法Ａｌ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速Ｎ电子精密天平（ＭｅｔｔｌＯ等均为分析纯。３）３－Ｎ电子精密天平（ＭｅｔｔｌａＮ电子精密天平（ＭｅｔｔｌＯ等均为分析纯。２－Ｎ电子精密天平（ＭｅｔｔｌａＯ等均为分析纯。Ｈ显色法 ［４］：精密吸取芦丁标准液０．５ｍｌ和供试液１＃、４＃、７＃各适量至２５ｍｌ量 瓶中，分别加入５％Ｎ电子精密天平（ＭｅｔｔｌａＮ电子精密天平（ＭｅｔｔｌＯ等均为分析纯。２１．０ｍｌ，放置６ｍｉｎ，然后加入１０％Ａｌ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速Ｎ电子精密天平（ＭｅｔｔｌＯ等均为分析纯。 ３）３１．０ｍｌ，混匀，放置６ｍｉｎ，再加入４．３％Ｎ电子精密天平（ＭｅｔｔｌａＯ等均为分析纯。Ｈ１０ｍｌ，用７０％ 乙醇定容至刻度，放置１５ｍｉｎ。在１９０～７００ｎｍ范围内扫描测定吸收光谱。 ＡｌＣｌ３显色法［５］：精密吸取芦丁标准液０．１ｍｌ和供试液１＃、４＃、７ ＃各适量至１０ｍｌ量瓶中，分别加入０．１ｍｏｌ／Ｌ电子精密天平（ＭｅｔｔｌｅｒｉＡｌＣｌ３·６Ｈ２Ｏ等均为分析纯。１．０ｍｌ， 用５０％乙醇定容至刻度，摇匀，放置１５ｍｉｎ。在１９０～７００ｎｍ范围内扫描测 定吸收光谱。 比较上述两种显色法，用Ａｌ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速Ｎ电子精密天平（ＭｅｔｔｌＯ等均为分析纯。３）３－Ｎ电子精密天平（ＭｅｔｔｌａＮ电子精密天平（ＭｅｔｔｌＯ等均为分析纯。２－Ｎ电子精密天平（ＭｅｔｔｌａＯ等均为分析纯。Ｈ显色后，明显生 成红色絮状沉淀，此法不宜采用；倾斜式高速而ＡｌＣｌ３显色后，芦丁标准液的ＡｌＣｌ３显色后，芦丁标准液的 λ ｍａｘ＝４１０ ｎｍ，３个样品溶液的 λ ｍａｘ＝４００～４１０ｎｍ，故选择Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＮＯ２－ＮａＯＨ显色法ＡｌＣｌ３显色后４１０ ｎｍ测定吸光度。 2.5 显色稳定性考察精密吸取芦丁标准液０．３ｍｌ和供试液４＃１．０ｍｌ，依法 显色后放置不同时间，测定吸光度，结果见表３，吸光度 RSD 分别为０．２％和０．３％， 可见芦丁标准液和供试液４＃显色后４ｈ内基本稳定。 2.6 线性关系考察取芦丁标准液１．０ｍｌ置２５ｍｌ容量瓶中，用５０％乙醇定容 至刻度，摇匀，分别取１．０，２．０，２．５，３．０，３．５，４．０ｍｌ置１０ｍ ｌ量瓶中，加入０．１ｍｏｌ／Ｌ电子精密天平（ＭｅｔｔｌｅｒｉＡｌＣｌ３·６Ｈ２Ｏ等均为分析纯。１．０ｍｌ，用５０％乙醇定容至 刻度摇匀，４０ｍｉｎ后于４１０ｎｍ处测定吸光度Ａ值，结果见表４。线性回归得标准 曲线：A＝５．６×１０－３ C＋５．７×１０－３，R＝０．９９９９，线性范围为３３． ０～１３２．０ μ ｇ共９份，按照／ｍｌ。 2.7 样品测定分别取９份供试品溶液适量至１０ｍｌ量瓶中，加０．１ｍｏｌ／Ｌ电子精密天平（ＭｅｔｔｌｅｒｉＡ ｌＣｌ３·６Ｈ２Ｏ等均为分析纯。１．０ｍｌ，用５０％乙醇定容至刻度，摇匀，４０ｍｉｎ后于４１０ ｎｍ处测定吸光度Ａ值，换算为总黄酮含量（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速ｍｇ共９份，按照·ｇ共９份，按照－１），如表２所示，极差分析得最 佳提取工艺为Ａ２Ｂ２Ｃ３，即８０％乙醇，２５倍量，提取４次（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速２，１．５，１．５， １ｈ）。 表 3 显色稳定性考察（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速略） 表 4 芦丁标准曲线的制作（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速略） 2.8 验证实验精密称取柿叶最粗粉（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速１０～２２目之间）１ｇ共９份，按照５份，置于１００ｍｌ 锥形瓶中，按照Ａ２Ｂ２Ｃ３条件提取，合并提取液，放冷，抽滤，滤液转移至２００ｍ ｌ量瓶中，８０％乙醇定容至刻度，过微孔滤膜，测定样品中总黄酮的含量，结果见表５， 其平均值为１０１．８２１ｍｇ共９份，按照·ｇ共９份，按照－１，RSD＝２．１％，表明此条件重复性良好。 表 5 验证实验结果（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速略） 3 结论与讨论 3.1 结论柿叶乙醇提取最佳工艺为Ａ２Ｂ２Ｃ３，即８０％乙醇，２５倍量，提取４ 次（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速２，１．５，１．５，１ｈ）。经验证样品中总黄酮平均含量为１０１．８２１ｍｇ共９份，按照· ｇ共９份，按照－１（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速RSD＝２．１％），表明正交实验结果可靠。 3.2 讨论 3.2.1 预实验采用同一方法测定柿叶水提物和乙醇提取物中总黄酮含量，结果前者显 著低于后者，根据参考文献及上述预实验结果，采用乙醇作为提取溶剂。 3.2.2 ＡｌＣｌ３显色方法与参考文献比较未采用７０℃水浴，因为实际测定两者差 异不大，不采用水浴可以减少测定步骤，减小误差。 3.2.3 预实验采用２２～４８目柿叶粉回流提取，发现有爆沸现象，改为最粗粉１ ０～２２目。 1 材料 高效液相色谱仪：Ｌ电子精密天平（ＭｅｔｔｌｅｒｉＣ－６ＡＨＰＬ电子精密天平（ＭｅｔｔｌｅｒｉＣ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速ＳＣＬ电子精密天平（Ｍｅｔｔｌｅｒｉ－６Ａ系统控制器，Ｌ电子精密天平（ＭｅｔｔｌｅｒｉＣ－６Ａ恒流 泵，ＳＰＤ－６ＡＣ紫外检测器，威玛龙色谱工作站）；倾斜式高速ＫＱ２１８型超声清洗器（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速昆山 市超声仪器有限公司）；倾斜式高速ＡＲ２１４０型电子分析天平（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速上海奥豪斯公司）。 所有中药材由安徽省亳州市药材总公司提供，均符合《中国药典》２００５版及相关 地方标准；倾斜式高速黄芩苷和丹酚酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１ ５－２００２１２和１１１５６２－２００３０２，供含量测定用。 甲醇、乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯。 2 方法与结果 ２．１醇提工艺条件的优化以药材黄芩中有效成分黄芩苷的提取转移率和提取液的出 膏率作为测定指标，采用正交实验的方法对乙醇提取工艺进行了优选。 ２．１．１醇提液中黄芩苷的测定方法色谱条件：色谱柱为ＤｉｏｍａｎｄＴＭ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速２ ００ｍｍ×４．６ｍｍ，５ μ ｍ）；倾斜式高速流动相为甲醇－水－磷酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速４７∶５３∶０．１）；倾斜式高速紫 外检测波长２８０ｎｍ；倾斜式高速柱温为室温；倾斜式高速流速１ｍｌ／ｍｉｎ；倾斜式高速进样量：１０ｍｌ［１］。 在上述色谱条件下供试品溶液中黄芩苷能与其它组分达到基线分离。 ２．１．２因素水平表的设计与正交实验取影响该提取过程的４个主要因素：乙醇浓 度、溶媒量（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速加水倍量）、提取次数、提取时间，按Ｌ电子精密天平（Ｍｅｔｔｌｅｒｉ９（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速３４）正交实验表进行实验， 每个因素设计３个水平。因素水平表见表１。结果见表２。 表１醇提工艺的因素水平（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速略） 表 2 黄芩等醇提工艺正交实验及结果（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速略） *综合评分为出膏率＋提取率 结果分析：各因素水平之间的极差大小依次为Ａ＞Ｄ＞Ｂ＞Ｃ，表明乙醇浓度对实验 结果影响最大，其次是煎煮次数、溶剂用量，提取时间对实验结果的影响最小，最佳条件 为Ａ１Ｂ３Ｃ２Ｄ３。但Ｂ３与Ｂ２相差极小，而若选择Ｂ２可较Ｂ３节约资源，并减小Ｂ３与Ｂ２相差极小，而ＡｌＣｌ３显色后，芦丁标准液的若选择Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＮＯ２－ＮａＯＨ显色法Ｂ２可较Ｂ３节约资源，并减小 需浓缩的药液体积，大大节约能源，降低成本，故选择Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＮＯ２－ＮａＯＨ显色法Ａ１Ｂ２Ｃ２Ｄ３作为提取过程的 工艺参数。经３批验证实验，黄芩苷的提取率平均为９５．５１％，出膏率的平均为１７． ０１％，表明该工艺基本合理可行。 ２．２水提醇沉工艺的优化以药材丹参中有效成分丹酚酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１Ｂ的提取转移率和提取液的 出膏率作为评价指标，采用正交实验的方法对水煎煮的提取工艺进行优化。 ２．２．１水提液中丹酚酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１Ｂ的测定方法色谱条件：色谱柱为ＤｉｏｍａｎｄＴＭｍａｎｄＴＭ （Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速２００ｍｍ×４．６ｍｍ，５ μ ｍ）；倾斜式高速流动相为甲醇－乙腈－水－甲酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速３０：１０∶５ ８∶２）；倾斜式高速紫外检测波长２８６ｎｍ；倾斜式高速柱温为室温；倾斜式高速流速１ｍｌ／ｍｉｎ；倾斜式高速进样量１０ μ ｌ。 在上述色谱条件下供试品溶液中丹酚酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１Ｂ能与其它组分达到基线分离。 ２．２．２水提过程因素水平的选择Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＮＯ２－ＮａＯＨ显色法及统计结果取影响水提取工艺的３个主要因素： 水的用量、提取次数、提取时间，按Ｌ电子精密天平（Ｍｅｔｔｌｅｒｉ９（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速３４）正交实验表进行实验，每个因素设计３ 个水平。因素水平见表３，结果见表４，方差分析见表 5。 表３丹参等水提工艺因素水平（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速略） 表４丹参等Ｌ电子精密天平（Ｍｅｔｔｌｅｒｉ９（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速３４）水提工艺正交实验及结果（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速略） *综合评分为出膏率＋提取率 表 5 丹参等水提工艺实验结果的方差分析（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速略） 结果分析：由表４数据可以看出，各因素对实验影响的大小依次为Ｃ＞Ｂ＞Ａ，即煎 煮次数影响最大，其次为煎煮时间，最小为加水量。由表５可以看出，影响因素Ａ和Ｂ影 响不显著，Ｃ因素影响较显著，最佳实验条件为Ａ３Ｂ２Ｃ３，但Ｂ３与Ｂ２相差极小，而若选择Ｂ２可较Ｂ３节约资源，并减小Ａ３与Ａ２相差较小， 而ＡｌＣｌ３显色后，芦丁标准液的若选择Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＮＯ２－ＮａＯＨ显色法Ａ２可较Ａ３少节约水资源，并减小需浓缩的药液体积，大大节约能源，降低成 本，节省时间，故应选择Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＮＯ２－ＮａＯＨ显色法Ａ２Ｂ２Ｃ３，即正交表实验，丹酚酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１Ｂ的提取率平均为９１． ３６％，出膏率平均为２０．３７％，表明该工艺基本合理可行。 ２．２．３醇沉工艺因素水平表的设计取影响该过程的３个主要因素：浸膏相对密度、 醇沉液的乙醇浓度、醇沉时间，按Ｌ电子精密天平（Ｍｅｔｔｌｅｒｉ９（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速３４）正交实验表进行实验，每个因素设计３个 水平。因素水平表见表６，结果见表７～８。 表６丹参等醇沉工艺因素水平（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速略） 表７丹参等醇沉工艺正交实验及结果（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速略） 丹酚酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１ B 转移率=醇沉后丹酚酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１ B 含量醇沉前丹酚酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１ B 的含量×100% 杂质去除率（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速%）=醇沉前的固体量-醇沉后的固体量醇沉前的固体量×100% 综合评分（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速%）＝丹酚酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１ B 的转移率＋杂质去除率 表 8 丹参等醇沉工艺实验结果的方差分析（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速略） 结果分析：各因素对实验影响的大小依次为 C>A>B，即醇沉时间影响最大，其次为 浸膏密度，最小为乙醇浓度，最佳实验条件为 A3B2C1，但Ｂ３与Ｂ２相差极小，而若选择Ｂ２可较Ｂ３节约资源，并减小 B1 与 B2 相差极小，而ＡｌＣｌ３显色后，芦丁标准液的若选 择Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＮＯ２－ＮａＯＨ显色法 B1 可较 B2 则乙醇的用量减少，并减小需浓缩的药液体积,大大节约能源，降低成本， 节省时间，而ＡｌＣｌ３显色后，芦丁标准液的且由方差分析结果可知，3 个因素均影响不显著，故应选择Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＮＯ２－ＮａＯＨ显色法 A3B1C1，即： 醇沉前的浸膏相对密度为 1.20，醇沉后乙醇浓度为 60%，醇沉时间为 12h。经 3 批验证 实验，丹酚酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１ B 的转移率平均为 91.60%，杂质去除率的平均为 41.42%，表明该工艺参 数基本合理可行。 3 讨论 本品为中药复方制剂，药味多，成分复杂。根据各药材的理化性质，将 22 种药材分 成 3 部分，分别采用醇提、水提醇沉的提取方法。 通过正交优化实验，以有效成分转移率和出膏率为评价指标，确定了最佳工艺参数。 经过 3 批验证实验，结果合理可行，且可控性强。 1 仪器与试药 １．１仪器电子天平（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速ＡＹ１２０，ＳＨＡＭＡＯ等均为分析纯。ＺＵＣＯ等均为分析纯。ＲＰＯ等均为分析纯。ＰＡＩＴＩＯ等均为分析纯。Ｎ电子精密天平（ＭｅｔｔｌＪ ＡＰＡＮ电子精密天平（Ｍｅｔｔｌ）、ＨＨ－６－恒温水浴锅（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速江苏金坛市宏华仪器厂）、超声波清洗器（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速２５０ Ｗ，上海之信仪器有限公司）、电热鼓风恒温干燥箱（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速３１００Ｗ，上海讯能电热设备有 限公司）、ＵＶ－１８００紫外可见分光光度计（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速北京瑞利分析仪器公司）；倾斜式高速双Ｂ循环水Ｂ循环水 式多用真空泵（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速ＳＨＢ－ＩＶ，郑州长城科工贸有限公司）。 １．2 试药葡萄糖标准品Ｓｉｇ共９份，按照ｍａ公司产品；倾斜式高速苯酚，硫酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１、丙酮、乙醚、三氯乙酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１、 氢氧化钠试剂均为分析纯，医用乙醇（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速广州市新升华玻有限公司），苯酚试液参照文献 ［８］配制。 鱼腥草购于广州清平市场，经广东药学院陈幼竹博士鉴定为三白草科蕺菜属植物 Houttuyniacordata Ｔｈｕｎｂ． 2 方法与结果 ２．１鱼腥草多糖的提取与精制取鱼腥草干品２００ｇ共９份，按照，以９５％乙醇回流脱脂３次， 药渣置通风处晾干，加水１０倍量、８倍量、８倍量，于９０～１００℃依次提取３，２， １ｈ，过滤，合并滤液，浓缩至约２００ｍｌ，加入等体积３０％三氯乙酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１溶液脱蛋白， ４℃静置，离心，上清液用０．０１ｍｏｌ／Ｌ电子精密天平（Ｍｅｔｔｌｅｒｉ的氢氧化钠调ｐＨ＝７，溶液减压浓缩，ｐＨ＝７，溶液减压浓缩， 浓缩液对水透析，透析液减压浓缩至１００ｍｌ，加入９５％乙醇调ｐＨ＝７，溶液减压浓缩，含醇量为８０％，静 置，离心，沉淀用无水乙醇、丙酮、无水乙醚依次洗涤，真空干燥，得除蛋白精制鱼腥草 多糖。 ２．２多糖含量测定方法的建立 ２．２．1 标准品溶液的制备精密称取１０５℃干燥至恒重的葡萄糖０．０９６４ｇ共９份，按照， 加水溶解并定容至１００ｍｌ，再取１ｍｌ，定容至１０ｍｌ的容量瓶中，即制得浓度为 ０．０９６４ｍｇ共９份，按照／ｍｌ的葡萄糖对照品贮备液。 ２．２．2 供试品溶液的制备称取鱼腥草５０ｇ共９份，按照，按正交设计表进行提取，得粗多糖。 称取１０５℃干燥至恒重的粗多糖约３０ｍｇ共９份，按照，精密称定，置于１００ｍｌ量瓶中，加水 溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。 ２．２．３标准曲线的绘制精密量取葡萄糖标准品溶液０．１，０．２，０．３，０． ４，０．５，０．６，０．７ｍｌ，分别置１０ｍｌ具塞试管中，加蒸馏水补充至１．０ ｍｌ，摇匀，加５％苯酚溶液１ｍｌ，浓硫酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１５ｍｌ，室温放置４０ｍｉｎ。另取１ｍｌ 蒸馏水，加同量苯酚和浓硫酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１，同法操作，作为空白对照。置ＵＶ－１８００型分光光度 计中，于４９０ｎｍ测定吸收度，以吸收度（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速Ｙ）对葡萄糖含量（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速Ｘ）进行回归，得回归 方程：Y＝９．１０７３ X＋０．０１０２，相关系数 r＝０．９９９８。结果表明葡萄糖 在０．０１９３～０．０９６４ｍｇ共９份，按照／ｍｌ范围内呈良好的线性关系。 ２．２．４换算因素的测定精密称取６０℃干燥至恒重的鱼腥草多糖１０１．２ｍｇ共９份，按照， 置１００ｍｌ容量瓶中，加入少量蒸馏水溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取此液１ｍ ｌ，照标准曲线制备项下的方法测定吸收度，从回归方程中求出多糖供试液中葡萄糖的浓 度。按下式计算换算因素：F＝W／（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速C×D）。Ｆ为换算因素；Ｗ为多糖重量（ｍｇ）；为换算因素；倾斜式高速Ｗ为多糖重量（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速ｍｇ共９份，按照）；倾斜式高速 Ｃ为多糖稀释液中葡萄糖的浓度（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速ｍｇ共９份，按照／ｍｌ）；倾斜式高速Ｄ为稀释因素。 ２．２．５样品测定方法取各供试品溶液，按标准曲线项下方法操作，测定吸收值， 从回归方程中求出供试液中葡萄糖的含量，按下式计算样品中多糖含量：多糖含量（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速％） ＝C×D×F×１００／W。C 为供试液中葡萄糖的浓度（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速ｍｇ共９份，按照／ｍｌ）；倾斜式高速D 为供试液的稀释 因素；倾斜式高速F 为换算因素，W 为供试样品重量（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速ｍｇ共９份，按照）。 ２．３正交实验法优化超声波提取鱼腥草多糖最佳工艺 ２．３．1 制定因素水平表根据文献报道［９］并结合实际，超声波提取多糖的影响 因素有超声时间、料液比、醇沉浓度，为此选择Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＮＯ２－ＮａＯＨ显色法３因素作为考察因素，并结合生产实际， 每因素又选取３个水平，按Ｌ电子精密天平（Ｍｅｔｔｌｅｒｉ９（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速３４）正交表安排实验，以多糖得率及含量作为衡量提 取效率的双Ｂ循环水重客观指标，优选最佳工艺，为了提高统计分析的可靠性，每一条件下都作了 重复实验（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速n＝３），测定结果取其平均值供统计分析用。因素水平安排见表１。结果见 表２。 ２．３．2 加权法综合评价鱼腥草多糖提取工艺最佳提取条件要满足多糖得率高并且 含量也高，因此采用加权评分法综合评估鱼腥草多糖提取条件。评分标准为：将各项指标