白术混伪品鉴别分析论文

1 白术及其混伪品性状检索 1.根茎或块根呈肥厚团块状，表面有瘤状突起、沟纹 2.根茎表面灰黄色或灰棕色，有须根痕，顶端有下陷圆盘状茎基和芽痕。质地坚实， 不易折断；断面不平坦，有棕色点状油室散在。气清香，味甘，微辛，嚼之略带粘性…… ……………………………………………………………………………白术 2.根茎表面灰黄色或土棕色，下部具须根痕，顶端有残留的茎基。质地坚硬，不易折 断；断面有不规则的纤维，可见凸起筋脉纹（菊花心）。气特异，味淡，微苦…………… …………………………………………………………………菊三七 1.根茎或块根呈不规则连珠状、疙瘩状或结节状圆柱形，圆柱形或圆锥形，无瘤状突 起 3.根茎或块根呈圆柱形、圆锥形 4.断面有明显形成层环、放射状纹理 5.根茎表面黄棕色，有显著纵沟及侧根痕。质地坚硬，不易折断；断面略平坦，有散 在褐色油点。香气浓烈特异，味微苦…………………………………………………………… ……………………………………………………………………木香 5.根茎圆柱形，切片表面灰棕色或黄棕色，形成层环明显，木质部呈放射状纹理，质 地坚硬，易折断；断面无油点。气微，味微苦、辛……………………芍药 4.根表面灰棕色或灰褐色，有纵皱纹或横长纹理。顶端有凹陷的茎痕及红色叶柄残基， 质地坚硬，不易折断；断面略平坦，黄白色至浅灰色，有凹点油室，形成层环和放射状纹 理不明显。香气特异，味苦，微粘………………………土木香 3.根茎或块根呈不规则连珠状、疙瘩状或结节状圆柱形 6.根茎表面灰棕色，具纵皱纹、横曲纹及残留的须根痕，顶端具茎痕或茎基。质地坚 实，断面黄白色或灰白色，有棕色油点散在，暴露稍久有白毛状结晶析出………………… ………………………………………………………………茅苍术 6.表面无纵皱纹，无残留须根痕，顶端不具茎痕或茎基。质地疏松，断面有油点散在， 久置无白毛状结晶析出 7.根茎表面深棕色，有横纹。断面平坦，纤微性强，有棕红色油点散在。气特异，味 辛，微苦…………………………………………………………………………………………… …………………………………………………关苍术 7.根茎表面棕黑色，断面纤微性不强，有黄棕色油点散在。香气较淡，味辛、苦…… ……………………………………………………………………………………………………… ………………………………北苍术 2 白术及其混伪品粉末显微特征检索 1.粉末中石细胞较多 2.油室碎片多见 3.粉末棕色，具韧皮纤维，成束或单个散在，淡黄色，呈短梭形，末端钝圆或分叉， 初生壁与次生壁界限明显，壁层纹细密；木纤维长梭形，偶有分叉………………………… …………………………………………………………………………………北苍术 3.粉末棕色，不具韧皮纤维，木纤维多成束，长梭形或纺锤形，壁厚，孔沟明显。细 胞中菊糖有时与针晶相混。导管为具缘纹孔或网纹，直径 19～48μmμmm，导管分子短……… ………………………………………………………………………………茅苍术 2.无油室碎片或难见 4.粉末淡黄棕色，菊糖呈扇形或略呈扇形，表面显放射状纹理。木栓石细胞单个或 3 ～5 个成群，淡黄色，呈类多角形、类长方形或类长圆型，少数呈纺锤形，直径 37～ 64μmm。孔沟及胞腔明显，有的可见层纹，腔内不含黄色分泌物。草酸钙针晶细小，长 10 ～32μmm。油室碎片难见………………………………………………………………………… ……………………白术 4.粉末土黄色，无菊糖、油室碎片。棒状针晶两两成对排列于薄壁细胞中或散在，木 栓细胞腔内成堆充满三角形砂晶。有较多石细胞。韧型纤维呈飘带状，末端具短分支或一 端钝圆，直径 1.7～7μmm，胞腔明显，无孔沟……………………关苍术 1.粉末中无石细胞 5.粉末中有菊糖 6.粉末黄绿色，菊糖极多，呈扇形，表面观有放射状纹理。木纤维多成束，长梭形， 直径 16～24μmm，纹孔口横裂缝状，十字状或人字状。油室碎片有时可见，内含黄色或棕 色分泌物。木栓细胞垂周壁微波状弯曲…………………………木香 6.菊糖呈不规则块状，无放射状纹理 7.粉末棕黄色，有木栓细胞及油室碎片，具草酸钙方晶。菊糖众多，呈不规则块状。 无淀粉粒。纤维多成束存在，长梭形，尖端弯曲斜尖，壁厚薄不均，直径 13～ 23μmm…………………………………………………………………土木香 7.粉末类白色，无草酸钙方晶、油室碎片和石细胞。菊糖呈透明不规则块状。纤维有 两种，壁薄者先端锐尖或钝圆，具斜纹孔，壁厚者稍弯曲，孔沟不明显…………………… …………………………………………………………菊三七 5.粉末类白色，无菊糖。含晶细胞方形或长方形，纵向连接，草酸钙簇晶较多，排列 呈纵行。淀粉粒类圆形，脐点三叉状或星状。木纤维主为纤维管胞，呈长梭形，纹孔口斜 裂缝状，孔沟明显，薄壁细胞呈类方形，壁呈连珠状，可见纹孔……芍药 3 小结 白术的混伪品大多数来源于白术同科植物，其相似程度较大，鉴别比较困难，但只要 把性状和显微特征结合起来，大多数种类可以正确鉴别。 根茎呈肥厚团块状，表面有瘤状突起，粉末中有石细胞、菊糖、草酸钙针晶，为白术 的重要鉴别特征。 根茎表面的颜色、须根痕的有无、下陷圆盘状茎基和芽痕、质地、断面棕色点状油室 等可作为白术药材的辅助鉴别特征。 1 仪器与试药 １．１仪器ＵＶ－２２０１紫外可见分光光度计（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速 万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；ＰＢ２０３－Ｎ电子精密天平（Ｍｅｔｔｌ电子精密天平（Ｍｅｔｔｌ ｅｒＴｏｌｅｄｏ仪器上海有限公司）；ＡＪ１５０Ｌ电子精密天平（Ｍｅｔｔｌｅｒｉ电子精密天平（Ｍｅｔｔｌｅｒｉ ｎＳｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）。 １．２试药实验用药材采自北京市昌平区，落叶晾干，经鉴定为柿树科柿属柿 DiospyrosKaki Ｌ电子精密天平（Ｍｅｔｔｌｅｒｉ．ｆ．；芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号：０８０－９３ ０３）；ＡｌＣｌ３·６Ｈ２Ｏ等均为分析纯。等均为分析纯。 2 方法与结果 ２．１因素水平表乙醇作为提取溶剂，对乙醇浓度、溶剂量及提取次数和时间３种因 素进行考察，每种因素分为３个水平，结果见表１。 2.2 供试品溶液的制备精密称取柿叶最粗粉（１０～２２目之间）１ｇ共９份，按照共９份，按照 表２Ｌ电子精密天平（Ｍｅｔｔｌｅｒｉ９（３４）正交实验设计方案，用对应浓度和体积的乙醇回流提取相应次数和时间。 回流结束后合并提取液，放冷，抽滤，滤液转移至１００ｍｌ或２００ｍｌ量瓶中，分别 以其相应的提取溶剂定容，过微孔滤膜（０．４５ μm ｍ），作为供试品溶液。 表 1 正交设计因素水平（略） 表 2L9（34）正交实验设计及结果分析（略） 2.3 对照品溶液的制备精密称取１２０℃干燥至恒重的芦丁对照品０．０８２５ｇ共９份，按照于 １００ｍｌ量瓶中，７０％乙醇超声溶解，定容至刻度，得芦丁标准液０．８２５ｍｇ共９份，按照·ｍ ｌ－１。 2.4 显色试剂及测定波长的选择Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＮＯ２－ＮａＯＨ显色法Ａｌ（Ｎ电子精密天平（ＭｅｔｔｌＯ等均为分析纯。３）３－Ｎ电子精密天平（ＭｅｔｔｌａＮ电子精密天平（ＭｅｔｔｌＯ等均为分析纯。２－Ｎ电子精密天平（ＭｅｔｔｌａＯ等均为分析纯。Ｈ显色法 ［４］：精密吸取芦丁标准液０．５ｍｌ和供试液１＃、４＃、７＃各适量至２５ｍｌ量 瓶中，分别加入５％Ｎ电子精密天平（ＭｅｔｔｌａＮ电子精密天平（ＭｅｔｔｌＯ等均为分析纯。２１．０ｍｌ，放置６ｍｉｎ，然后加入１０％Ａｌ（Ｎ电子精密天平（ＭｅｔｔｌＯ等均为分析纯。 ３）３１．０ｍｌ，混匀，放置６ｍｉｎ，再加入４．３％Ｎ电子精密天平（ＭｅｔｔｌａＯ等均为分析纯。Ｈ１０ｍｌ，用７０％ 乙醇定容至刻度，放置１５ｍｉｎ。在１９０～７００ｎｍ范围内扫描测定吸收光谱。 ＡｌＣｌ３显色法［５］：精密吸取芦丁标准液０．１ｍｌ和供试液１＃、４＃、７ ＃各适量至１０ｍｌ量瓶中，分别加入０．１ｍｏｌ／Ｌ电子精密天平（ＭｅｔｔｌｅｒｉＡｌＣｌ３·６Ｈ２Ｏ等均为分析纯。１．０ｍｌ， 用５０％乙醇定容至刻度，摇匀，放置１５ｍｉｎ。在１９０～７００ｎｍ范围内扫描测 定吸收光谱。 比较上述两种显色法，用Ａｌ（Ｎ电子精密天平（ＭｅｔｔｌＯ等均为分析纯。３）３－Ｎ电子精密天平（ＭｅｔｔｌａＮ电子精密天平（ＭｅｔｔｌＯ等均为分析纯。２－Ｎ电子精密天平（ＭｅｔｔｌａＯ等均为分析纯。Ｈ显色后，明显生 成红色絮状沉淀，此法不宜采用；而ＡｌＣｌ３显色后，芦丁标准液的ＡｌＣｌ３显色后，芦丁标准液的 λ ｍａｘ＝４１０ ｎｍ，３个样品溶液的 λ ｍａｘ＝４００～４１０ｎｍ，故选择Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＮＯ２－ＮａＯＨ显色法ＡｌＣｌ３显色后４１０ ｎｍ测定吸光度。 2.5 显色稳定性考察精密吸取芦丁标准液０．３ｍｌ和供试液４＃１．０ｍｌ，依法 显色后放置不同时间，测定吸光度，结果见表３，吸光度 RSD 分别为０．２％和０．３％， 可见芦丁标准液和供试液４＃显色后４ｈ内基本稳定。 2.6 线性关系考察取芦丁标准液１．０ｍｌ置２５ｍｌ容量瓶中，用５０％乙醇定容 至刻度，摇匀，分别取１．０，２．０，２．５，３．０，３．５，４．０ｍｌ置１０ｍ ｌ量瓶中，加入０．１ｍｏｌ／Ｌ电子精密天平（ＭｅｔｔｌｅｒｉＡｌＣｌ３·６Ｈ２Ｏ等均为分析纯。１．０ｍｌ，用５０％乙醇定容至 刻度摇匀，４０ｍｉｎ后于４１０ｎｍ处测定吸光度Ａ值，结果见表４。线性回归得标准 曲线：A＝５．６×１０－３ C＋５．７×１０－３，R＝０．９９９９，线性范围为３３． ０～１３２．０ μm ｇ共９份，按照／ｍｌ。 2.7 样品测定分别取９份供试品溶液适量至１０ｍｌ量瓶中，加０．１ｍｏｌ／Ｌ电子精密天平（ＭｅｔｔｌｅｒｉＡ ｌＣｌ３·６Ｈ２Ｏ等均为分析纯。１．０ｍｌ，用５０％乙醇定容至刻度，摇匀，４０ｍｉｎ后于４１０ ｎｍ处测定吸光度Ａ值，换算为总黄酮含量（ｍｇ共９份，按照·ｇ共９份，按照－１），如表２所示，极差分析得最 佳提取工艺为Ａ２Ｂ２Ｃ３，即８０％乙醇，２５倍量，提取４次（２，１．５，１．５， １ｈ）。 表 3 显色稳定性考察（略） 表 4 芦丁标准曲线的制作（略） 2.8μm 验证实验精密称取柿叶最粗粉（１０～２２目之间）１ｇ共９份，按照５份，置于１００ｍｌ 锥形瓶中，按照Ａ２Ｂ２Ｃ３条件提取，合并提取液，放冷，抽滤，滤液转移至２００ｍ ｌ量瓶中，８０％乙醇定容至刻度，过微孔滤膜，测定样品中总黄酮的含量，结果见表５， 其平均值为１０１．８２１ｍｇ共９份，按照·ｇ共９份，按照－１，RSD＝２．１％，表明此条件重复性良好。 表 5 验证实验结果（略） 3 结论与讨论 3.1 结论柿叶乙醇提取最佳工艺为Ａ２Ｂ２Ｃ３，即８０％乙醇，２５倍量，提取４ 次（２，１．５，１．５，１ｈ）。经验证样品中总黄酮平均含量为１０１．８２１ｍｇ共９份，按照· ｇ共９份，按照－１（RSD＝２．１％），表明正交实验结果可靠。 3.2 讨论 3.2.1 预实验采用同一方法测定柿叶水提物和乙醇提取物中总黄酮含量，结果前者显 著低于后者，根据参考文献及上述预实验结果，采用乙醇作为提取溶剂。 3.2.2 ＡｌＣｌ３显色方法与参考文献比较未采用７０℃水浴，因为实际测定两者差 异不大，不采用水浴可以减少测定步骤，减小误差。 3.2.3 预实验采用２２～４８目柿叶粉回流提取，发现有爆沸现象，改为最粗粉１ ０～２２目。 1 材料 高效液相色谱仪：Ｌ电子精密天平（ＭｅｔｔｌｅｒｉＣ－６ＡＨＰＬ电子精密天平（ＭｅｔｔｌｅｒｉＣ（ＳＣＬ电子精密天平（Ｍｅｔｔｌｅｒｉ－６Ａ系统控制器，Ｌ电子精密天平（ＭｅｔｔｌｅｒｉＣ－６Ａ恒流 泵，ＳＰＤ－６ＡＣ紫外检测器，威玛龙色谱工作站）；ＫＱ２１８型超声清洗器（昆山 市超声仪器有限公司）；ＡＲ２１４０型电子分析天平（上海奥豪斯公司）。 所有中药材由安徽省亳州市药材总公司提供，均符合《中国药典》２００５版及相关 地方标准；黄芩苷和丹酚酸Ｂ对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１ ５－２００２１２和１１１５６２－２００３０２，供含量测定用。 甲醇、乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯。 2 方法与结果 ２．１醇提工艺条件的优化以药材黄芩中有效成分黄芩苷的提取转移率和提取液的出 膏率作为测定指标，采用正交实验的方法对乙醇提取工艺进行了优选。 ２．１．１醇提液中黄芩苷的测定方法色谱条件：色谱柱为ＤｉｏｍａｎｄＴＭ（２ ００ｍｍ×４．６ｍｍ，５ μm ｍ）；流动相为甲醇－水－磷酸（４７∶５３∶０．１）；紫 外检测波长２８０ｎｍ；柱温为室温；流速１ｍｌ／ｍｉｎ；进样量：１０ｍｌ［１］。 在上述色谱条件下供试品溶液中黄芩苷能与其它组分达到基线分离。 ２．１．２因素水平表的设计与正交实验取影响该提取过程的４个主要因素：乙醇浓 度、溶媒量（加水倍量）、提取次数、提取时间，按Ｌ电子精密天平（Ｍｅｔｔｌｅｒｉ９（３４）正交实验表进行实验， 每个因素设计３个水平。因素水平表见表１。结果见表２。 表１醇提工艺的因素水平（略） 表 2 黄芩等醇提工艺正交实验及结果（略） *综合评分为出膏率＋提取率 结果分析：各因素水平之间的极差大小依次为Ａ＞Ｄ＞Ｂ＞Ｃ，表明乙醇浓度对实验 结果影响最大，其次是煎煮次数、溶剂用量，提取时间对实验结果的影响最小，最佳条件 为Ａ１Ｂ３Ｃ２Ｄ３。但Ｂ３与Ｂ２相差极小，而ＡｌＣｌ３显色后，芦丁标准液的若选择Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＮＯ２－ＮａＯＨ显色法Ｂ２可较Ｂ３节约资源，并减小 需浓缩的药液体积，大大节约能源，降低成本，故选择Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＮＯ２－ＮａＯＨ显色法Ａ１Ｂ２Ｃ２Ｄ３作为提取过程的 工艺参数。经３批验证实验，黄芩苷的提取率平均为９５．５１％，出膏率的平均为１７． ０１％，表明该工艺基本合理可行。 ２．２水提醇沉工艺的优化以药材丹参中有效成分丹酚酸Ｂ的提取转移率和提取液的 出膏率作为评价指标，采用正交实验的方法对水煎煮的提取工艺进行优化。 ２．２．１水提液中丹酚酸Ｂ的测定方法色谱条件：色谱柱为ＤｉｏｍａｎｄＴＭｍａｎｄＴＭ （２００ｍｍ×４．６ｍｍ，５ μm ｍ）；流动相为甲醇－乙腈－水－甲酸（３０：１０∶５ ８∶２）；紫外检测波长２８６ｎｍ；柱温为室温；流速１ｍｌ／ｍｉｎ；进样量１０ μm ｌ。 在上述色谱条件下供试品溶液中丹酚酸Ｂ能与其它组分达到基线分离。 ２．２．２水提过程因素水平的选择Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＮＯ２－ＮａＯＨ显色法及统计结果取影响水提取工艺的３个主要因素： 水的用量、提取次数、提取时间，按Ｌ电子精密天平（Ｍｅｔｔｌｅｒｉ９（３４）正交实验表进行实验，每个因素设计３ 个水平。因素水平见表３，结果见表４，方差分析见表 5。 表３丹参等水提工艺因素水平（略） 表４丹参等Ｌ电子精密天平（Ｍｅｔｔｌｅｒｉ９（３４）水提工艺正交实验及结果（略） *综合评分为出膏率＋提取率 表 5 丹参等水提工艺实验结果的方差分析（略）