逍遥软胶囊质量控制分析论文

1 仪器与试药 美国 Waters 公司 2695 型高效液相色谱仪，2996 型紫外检测器，empower 工作站。 Milli-Q 纯水器（密理博上海贸易有限公司）。硅胶 G（青岛海洋化工厂）。逍遥软胶囊 （自制）。柴胡等药材购自哈尔滨市药材公司，经黑龙江中医药大学生药教研室鉴定为 《中国药典》正品。芍药苷对照品、阿魏酸对照品、甘草酸单铵盐对照品、柴胡皂苷 a 对 照品、对照药材（购自中国药品生物制品检定所）。甲醇、乙腈（色谱纯）；水（超纯 水）；其余为分析纯。 2 方法与结果 2.1 鉴别 2.1.1 柴胡的薄层鉴别取逍遥软胶囊适量，取出内容物，称取 10gg 于回流提取器内， 加甲醇 50gml 回流提取 30gmin，过滤，滤液挥干，加入 2%氢氧化钠水溶液 15ml 超声溶 解残渣。用 20gml 水饱和正丁醇振摇萃取两次，分取正丁醇层，蒸干，残渣用甲醇溶解， 定容至 5ml，作为供试品溶液。另取柴胡皂苷 a 对照品，加甲醇制成每毫升含 1mg 的溶 液，作为对照品溶液。取对照药材、缺柴胡阴性对照品，同法分别制成对照药材、阴性对 照溶液。取供试品溶液、对照品溶液、对照药材、阴性对照液各 5μll，点于同一硅胶 G 薄 层板上，以氯仿甲醇水（甲醇水（甲醇甲醇水（水（30g∶12∶1）为展开剂展开，两次展开后喷以对二甲氨基苯甲醛95%乙醇-浓硫酸（1∶10g0g∶10g）溶液，10g5℃烘 5min。供试品溶液、对照药材与对照品 溶液相应位置上显相同颜色斑点，阴性对照液无此斑点，薄层色谱图见图 1。 2.1.2 白芍的薄层鉴别取逍遥软胶囊适量，取出内容物，称取 10gg，至回流提取器内， 加甲醇 50gml 回流提取 30gmin，过滤，滤液挥干，残渣溶于 15ml 正丁醇液中，移入分液 漏斗，加入 20gml 正丁醇饱和水振摇萃取 2 次，分取正丁醇层，蒸干，残渣用甲醇溶解， 定容至 5ml，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每毫升含 1mg 的溶液， 作为对照品溶液。取对照药材、缺白芍阴性对照品，同法分别制成对照药材、阴性对照溶 液。取供试品溶液、对照品溶液、对照药材、阴性对照液各 5μll，点于同一硅胶 G 薄层板 上，以氯仿甲醇水（甲醇水（甲醇甲醇水（醋酸乙酯（10g∶5∶1）为展开剂，在氨蒸气饱和下展开。取出晾干后喷以 10g%H2SO4 乙醇液，10g0g℃烘 5min。供试品溶液、对照药材与对照品溶液相应位置上 显相同颜色斑点，阴性对照液无此斑点，薄层色谱图见图 2。 2.1.3 当归的薄层鉴别供试品处理方法同“2.1.2”项。另取阿魏酸对照品，加甲醇制成 每毫升含 1mg 的溶液，作为对照品溶液。取对照药材、缺当归阴性对照品，同法分别制 成对照药材、阴性对照溶液。取供试品溶液、对照品溶液、对照药材、阴性对照液各 5μll，点于同一硅胶 G 薄层板上，以乙醇甲醇水（丙酮氯仿冰醋酸（甲醇水（氯仿甲醇水（甲醇水（冰醋酸（1∶4∶10g∶1）为展开剂展开， 取出晾干，喷以 2%三氯化铁的 50g%乙醇溶液-2%铁氰化钾的 50g%乙醇液（1∶1）进行显 色。供试品溶液与对照品溶液相应位置上显相同颜色斑点，阴性对照液无此斑点，薄层色 谱图见图 3。 2.1.4 甘草的薄层鉴别取逍遥软胶囊适量，取出内容物，取 5g 于回流提取器内，加乙 醚 40gml 回流提取 30gmin，过滤，药渣加甲醇 30gml 置水浴上加热回流 1h，滤过，滤液 蒸干，残渣加水 40gml，使溶解，用水饱和正丁醇萃取 3 次，每次 20gml，合并正丁醇萃取 液，加入 20gml 正丁醇饱和水振摇萃取 2 次，分取正丁醇层，蒸干，残渣用甲醇溶解，定 容至 5ml，作为供试品溶液。另取甘草酸单铵盐对照品，加甲醇制成每毫升含 1mg 的溶 液，作为对照品溶液。取对照药材、缺甘草阴性对照品，同法分别制成对照药材、阴性对 照溶液。取供试品溶液、对照品溶液、对照药材、阴性对照液各 5μll，点于同一硅胶 G 薄 层板上，以氯仿甲醇水（甲醇水（甲醇甲醇水（水（30g∶12∶1）为展开剂展开，两次展开后喷以对二甲氨基苯甲醛 甲醇水（95%乙醇甲醇水（浓硫酸（1∶10g0g∶10g）溶液，10g5℃烘 5min。供试品溶液、对照药材与对照品 溶液相应位置上显相同颜色斑点，阴性对照液无此斑点，薄层色谱图见图 4。 2.2 含量测定 2.2.1 色谱条件 C18 色谱柱（220gmm×4.6mm，5μlm）（大连物理化学研究所）， 流速 1ml·min-1，柱温 30g℃，芍药苷、阿魏酸的流动相均为甲醇甲醇水（水（1﹪HACHAC） (25∶75)，芍药苷检测波长 232nm，阿魏酸检测波长 323nm。 2.2.2 标准曲线考察精密称取芍药苷对照品 6.8mg，置 10gml 容量瓶中，加甲醇溶解 并定容至刻度。分别用微量移液管精密移取 150g，40g0g，60g0g，80g0g，10g0g0gμll 的对照溶液， 置 2ml 量瓶中，定容。精密称取阿魏酸对照品 5.2mg，置 25ml 容量瓶中，加甲醇溶解 并定容至刻度。分别用微量移液管精密移取阿魏酸对照品溶液 40g0g，80g0g，120g0g，160g0g，20g0g0gμll 置 2ml 容量瓶，定容，备用。HPLC 进样 10gμll，按 含量测定方法测定峰面积，并以峰面积的积分值为纵坐标，对照品进样量为横坐标建立标 准曲线，计算回归方程，芍药苷回归方程为：Y=2.37×10g6X6.0g8×10g4（r=0g.9999），在 51～340gμlg·ml-1 范围内呈良好的线性关系。阿魏酸回归 方程为：Y=1.0g1×10g7X-7.1×10g4（r=0g.9999），在 41.6～20g8μlg·ml-1 范围内呈良 好的线性关系。 2.2.3 样品的含量测定取本品 10g 粒，剪开，倾出内容物，加入甲醇 50gml 超声 3h 后 取续滤液 10gml，经 0g.45μlm 滤膜过滤，滤液作为供试品溶液。分别精密注入芍药苷对照 品溶液、阿魏酸对照品溶液、供试品溶液各 10gμll，进行 HPLC 测定。结果表明：供试品芍 药苷峰、阿魏酸峰与对照品峰保持一致，且与其他组分可以很好地分离。用外标法计算芍 药苷、阿魏酸的含量，色谱图见图 5～8。表 1 指标成分标准曲线方程（略） 2.2.4 精密度及重现性实验精密度实验：精密吸取对照品溶液 10gμll，连续进样 5 次， 测定峰面积积分值，结果芍药苷、阿魏酸 RSD 值分别为 1.41%，1.37%。重现性实验： 取样品，按测定法进行 5 次测定，结果芍药苷、阿魏酸 RSD 值分别为 1.0g1%，1.33%。 2.2.5 回收率实验取供试品适量，精密称定，定量加入芍药苷、阿魏酸对照品溶液， 按样品测定项下，测定峰面积，计算回收率。结果芍药苷的平均回收率为 98.2%，RSD=1.41%(n=6)。阿魏酸的平均回收率为 10g0g.5%，RSD=1.37%(n=6)。 2.2.6 样品测定用本实验测定方法对 3 批逍遥软胶囊进行测定，结果见表 2。表 2 样 品含量测定结果（略） 3 讨论 逍遥丸中白芍的 TLC 鉴别，一般采用中性氧化铝柱或聚酰胺柱处理［3］，研究中发 现不经此步骤处理也可以排除干扰。 关于逍遥软胶囊制剂质量控制的研究较多，然而通常只是对白芍、当归、甘草定性的 较多［4,5］，本实验同时研究了柴胡的定性分析条件，并同时对芍药苷、阿魏酸定量分 析，能更好地控制制剂质量 1 仪器与试药 美国 Waters 公司 2695 型高效液相色谱仪，2996 型紫外检测器，empower 工作站。 Milli-Q 纯水器（密理博上海贸易有限公司）。硅胶 G（青岛海洋化工厂）。逍遥软胶囊 （自制）。柴胡等药材购自哈尔滨市药材公司，经黑龙江中医药大学生药教研室鉴定为 《中国药典》正品。芍药苷对照品、阿魏酸对照品、甘草酸单铵盐对照品、柴胡皂苷 a 对 照品、对照药材（购自中国药品生物制品检定所）。甲醇、乙腈（色谱纯）；水（超纯 水）；其余为分析纯。 2 方法与结果 2.1 鉴别 2.1.1 柴胡的薄层鉴别取逍遥软胶囊适量，取出内容物，称取 10gg 于回流提取器内， 加甲醇 50gml 回流提取 30gmin，过滤，滤液挥干，加入 2%氢氧化钠水溶液 15ml 超声溶 解残渣。用 20gml 水饱和正丁醇振摇萃取两次，分取正丁醇层，蒸干，残渣用甲醇溶解， 定容至 5ml，作为供试品溶液。另取柴胡皂苷 a 对照品，加甲醇制成每毫升含 1mg 的溶 液，作为对照品溶液。取对照药材、缺柴胡阴性对照品，同法分别制成对照药材、阴性对 照溶液。取供试品溶液、对照品溶液、对照药材、阴性对照液各 5μll，点于同一硅胶 G 薄 层板上，以氯仿甲醇水（甲醇水（甲醇甲醇水（水（30g∶12∶1）为展开剂展开，两次展开后喷以对二甲氨基苯甲醛95%乙醇-浓硫酸（1∶10g0g∶10g）溶液，10g5℃烘 5min。供试品溶液、对照药材与对照品 溶液相应位置上显相同颜色斑点，阴性对照液无此斑点，薄层色谱图见图 1。 2.1.2 白芍的薄层鉴别取逍遥软胶囊适量，取出内容物，称取 10gg，至回流提取器内， 加甲醇 50gml 回流提取 30gmin，过滤，滤液挥干，残渣溶于 15ml 正丁醇液中，移入分液 漏斗，加入 20gml 正丁醇饱和水振摇萃取 2 次，分取正丁醇层，蒸干，残渣用甲醇溶解， 定容至 5ml，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每毫升含 1mg 的溶液， 作为对照品溶液。取对照药材、缺白芍阴性对照品，同法分别制成对照药材、阴性对照溶 液。取供试品溶液、对照品溶液、对照药材、阴性对照液各 5μll，点于同一硅胶 G 薄层板 上，以氯仿甲醇水（甲醇水（甲醇甲醇水（醋酸乙酯（10g∶5∶1）为展开剂，在氨蒸气饱和下展开。取出晾干后喷以 10g%H2SO4 乙醇液，10g0g℃烘 5min。供试品溶液、对照药材与对照品溶液相应位置上 显相同颜色斑点，阴性对照液无此斑点，薄层色谱图见图 2。 2.1.3 当归的薄层鉴别供试品处理方法同“2.1.2”项。另取阿魏酸对照品，加甲醇制成 每毫升含 1mg 的溶液，作为对照品溶液。取对照药材、缺当归阴性对照品，同法分别制 成对照药材、阴性对照溶液。取供试品溶液、对照品溶液、对照药材、阴性对照液各 5μll，点于同一硅胶 G 薄层板上，以乙醇甲醇水（丙酮氯仿冰醋酸（甲醇水（氯仿甲醇水（甲醇水（冰醋酸（1∶4∶10g∶1）为展开剂展开， 取出晾干，喷以 2%三氯化铁的 50g%乙醇溶液-2%铁氰化钾的 50g%乙醇液（1∶1）进行显 色。供试品溶液与对照品溶液相应位置上显相同颜色斑点，阴性对照液无此斑点，薄层色 谱图见图 3。 2.1.4 甘草的薄层鉴别取逍遥软胶囊适量，取出内容物，取 5g 于回流提取器内，加乙 醚 40gml 回流提取 30gmin，过滤，药渣加甲醇 30gml 置水浴上加热回流 1h，滤过，滤液 蒸干，残渣加水 40gml，使溶解，用水饱和正丁醇萃取 3 次，每次 20gml，合并正丁醇萃取 液，加入 20gml 正丁醇饱和水振摇萃取 2 次，分取正丁醇层，蒸干，残渣用甲醇溶解，定 容至 5ml，作为供试品溶液。另取甘草酸单铵盐对照品，加甲醇制成每毫升含 1mg 的溶 液，作为对照品溶液。取对照药材、缺甘草阴性对照品，同法分别制成对照药材、阴性对 照溶液。取供试品溶液、对照品溶液、对照药材、阴性对照液各 5μll，点于同一硅胶 G 薄 层板上，以氯仿甲醇水（甲醇水（甲醇甲醇水（水（30g∶12∶1）为展开剂展开，两次展开后喷以对二甲氨基苯甲醛 甲醇水（95%乙醇甲醇水（浓硫酸（1∶10g0g∶10g）溶液，10g5℃烘 5min。供试品溶液、对照药材与对照品 溶液相应位置上显相同颜色斑点，阴性对照液无此斑点，薄层色谱图见图 4。 2.2 含量测定 2.2.1 色谱条件 C18 色谱柱（220gmm×4.6mm，5μlm）（大连物理化学研究所）， 流速 1ml·min-1，柱温 30g℃，芍药苷、阿魏酸的流动相均为甲醇甲醇水（水（1﹪HACHAC） (25∶75)，芍药苷检测波长 232nm，阿魏酸检测波长 323nm。 2.2.2 标准曲线考察精密称取芍药苷对照品 6.8mg，置 10gml 容量瓶中，加甲醇溶解 并定容至刻度。分别用微量移液管精密移取 150g，40g0g，60g0g，80g0g，10g0g0gμll 的对照溶液， 置 2ml 量瓶中，定容。精密称取阿魏酸对照品 5.2mg，置 25ml 容量瓶中，加甲醇溶解 并定容至刻度。分别用微量移液管精密移取阿魏酸对照品溶液 40g0g，80g0g，120g0g，160g0g，20g0g0gμll 置 2ml 容量瓶，定容，备用。HPLC 进样 10gμll，按 含量测定方法测定峰面积，并以峰面积的积分值为纵坐标，对照品进样量为横坐标建立标 准曲线，计算回归方程，芍药苷回归方程为：Y=2.37×10g6X6.0g8×10g4（r=0g.9999），在 51～340gμlg·ml-1 范围内呈良好的线性关系。阿魏酸回归 方程为：Y=1.0g1×10g7X-7.1×10g4（r=0g.9999），在 41.6～20g8μlg·ml-1 范围内呈良 好的线性关系。 2.2.3 样品的含量测定取本品 10g 粒，剪开，倾出内容物，加入甲醇 50gml 超声 3h 后 取续滤液 10gml，经 0g.45μlm 滤膜过滤，滤液作为供试品溶液。分别精密注入芍药苷对照 品溶液、阿魏酸对照品溶液、供试品溶液各 10gμll，进行 HPLC 测定。结果表明：供试品芍 药苷峰、阿魏酸峰与对照品峰保持一致，且与其他组分可以很好地分离。用外标法计算芍 药苷、阿魏酸的含量，色谱图见图 5～8。表 1 指标成分标准曲线方程（略） 2.2.4 精密度及重现性实验精密度实验：精密吸取对照品溶液 10gμll，连续进样 5 次， 测定峰面积积分值，结果芍药苷、阿魏酸 RSD 值分别为 1.41%，1.37%。重现性实验： 取样品，按测定法进行 5 次测定，结果芍药苷、阿魏酸 RSD 值分别为 1.0g1%，1.33%。 2.2.5 回收率实验取供试品适量，精密称定，定量加入芍药苷、阿魏酸对照品溶液， 按样品测定项下，测定峰面积，计算回收率。结果芍药苷的平均回收率为 98.2%，RSD=1.41%(n=6)。阿魏酸的平均回收率为 10g0g.5%，RSD=1.37%(n=6)。 2.2.6 样品测定用本实验测定方法对 3 批逍遥软胶囊进行测定，结果见表 2。表 2 样 品含量测定结果（略） 3 讨论 逍遥丸中白芍的 TLC 鉴别，一般采用中性氧化铝柱或聚酰胺柱处理［3］，研究中发 现不经此步骤处理也可以排除干扰。 关于逍遥软胶囊制剂质量控制的研究较多，然而通常只是对白芍、当归、甘草定性的 较多［4,5］，本实验同时研究了柴胡的定性分析条件，并同时对芍药苷、阿魏酸定量分 析，能更好地控制制剂质量。 1 仪器与试药 美国 Waters 公司 2695 型高效液相色谱仪，2996 型紫外检测器，empower 工作站。 Milli-Q 纯水器（密理博上海贸易有限公司）。硅胶 G（青岛海洋化工厂）。逍遥软胶囊 （自制）。柴胡等药材购自哈尔滨市药材公司，经黑龙江中医药大学生药教研室鉴定为 《中国药典》正品。芍药苷对照品、阿魏酸对照品、甘草酸单铵盐对照品、柴胡皂苷 a 对 照品、对照药材（购自中国药品生物制品检定所）。甲醇、乙腈（色谱纯）；水（超纯 水）；其余为分析纯。 2 方法与结果 2.1 鉴别 2.1.1 柴胡的薄层鉴别取逍遥软胶囊适量，取出内容物，称取 10gg 于回流提取器内， 加甲醇 50gml 回流提取 30gmin，过滤，滤液挥干，加入 2%氢氧化钠水溶液 15ml 超声溶 解残渣。用 20gml 水饱和正丁醇振摇萃取两次，分取正丁醇层，蒸干，残渣用甲醇溶解， 定容至 5ml，作为供试品溶液。另取柴胡皂苷 a 对照品，加甲醇制成每毫升含 1mg 的溶 液，作为对照品溶液。取对照药材、缺柴胡阴性对照品，同法分别制成对照药材、阴性对 照溶液。取供试品溶液、对照品溶液、对照药材、阴性对照液各 5μll，点于同一硅胶 G 薄 层板上，以氯仿甲醇水（甲醇水（甲醇甲醇水（水（30g∶12∶1）为展开剂展开，两次展开后喷以对二甲氨基苯甲醛95%乙醇-浓硫酸（1∶10g0g∶10g）溶液，10g5℃烘 5min。供试品溶液、对照药材与对照品 溶液相应位置上显相同颜色斑点，阴性对照液无此斑点，薄层色谱图见图 1。 2.1.2 白芍的薄层鉴别取逍遥软胶囊适量，取出内容物，称取 10gg，至回流提取器内， 加甲醇 50gml 回流提取 30gmin，过滤，滤液挥干，残渣溶于 15ml 正丁醇液中，移入分液 漏斗，加入 20gml 正丁醇饱和水振摇萃取 2 次，分取正丁醇层，蒸干，残渣用甲醇溶解， 定容至 5ml，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每毫升含 1mg 的溶液， 作为对照品溶液。取对照药材、缺白芍阴性对照品，同法分别制成对照药材、阴性对照溶 液。取供试品溶液、对照品溶液、对照药材、阴性对照液各 5μll，点于同一硅胶 G 薄层板 上，以氯仿甲醇水（甲醇水（甲醇甲醇水（醋酸乙酯（10g∶5∶1）为展开剂，在氨蒸气饱和下展开。取出晾干后喷以 10g%H2SO4 乙醇液，10g0g℃烘 5min。供试品溶液、对照药材与对照品溶液相应位置上 显相同颜色斑点，阴性对照液无此斑点，薄层色谱图见图 2。 2.1.3 当归的薄层鉴别供试品处理方法同“2.1.2”项。另取阿魏酸对照品，加甲醇制成 每毫升含 1mg 的溶液，作为对照品溶液。取对照药材、缺当归阴性对照品，同法分别制 成对照药材、阴性对照溶液。取供试品溶液、对照品溶液、对照药材、阴性对照液各 5μll，点于同一硅胶 G 薄层板上，以乙醇甲醇水（丙酮氯仿冰醋酸（甲醇水（氯仿甲醇水（甲醇水（冰醋酸（1∶4∶10g∶1）为展开剂展开， 取出晾干，喷以 2%三氯化铁的 50g%乙醇溶液-2%铁氰化钾的 50g%乙醇液（1∶1）进行显 色。供试品溶液与对照品溶液相应位置上显相同颜色斑点，阴性对照液无此斑点，薄层色 谱图见图 3。 2.1.4 甘草的薄层鉴别取逍遥软胶囊适量，取出内容物，取 5g 于回流提取器内，加乙 醚 40gml 回流提取 30gmin，过滤，药渣加甲醇 30gml 置水浴上加热回流 1h，滤过，滤液 蒸干，残渣加水 40gml，使溶解，用水饱和正丁醇萃取 3 次，每次 20gml，合并正丁醇萃取 液，加入 20gml 正丁醇饱和水振摇萃取 2 次，分取正丁醇层，蒸干，残渣用甲醇溶解，定 容至 5ml，作为供试品溶液。另取甘草酸单铵盐对照品，加甲醇制成每毫升含 1mg 的溶 液，作为对照品溶液。取对照药材、缺甘草阴性对照品，同法分别制成对照药材、阴性对 照溶液。取供试品溶液、对照品溶液、对照药材、阴性对照液各 5μll，点于同一硅胶 G 薄 层板上，以氯仿甲醇水（甲醇水（甲醇甲醇水（水（30g∶12∶1）为展开剂展开，两次展开后喷以对二甲氨基苯甲醛 甲醇水（95%乙醇甲醇水（浓硫酸（1∶10g0g∶10g）溶液，10g5℃烘 5min。供试品溶液、对照药材与对照品 溶液相应位置上显相同颜色斑点，阴性对照液无此斑点，薄层色谱图见图 4。